glideklemmer findes i alle livets domæner og er afgørende for effektiv DNA-replikation, hvilket kræves hver gang en celle deler sig, samt for koordinering af trafik på DNA. Escherichia coli (E. coli) beta‐klemme er et ringformet protein bestående af to identiske monomerer kodet af dnaN-genet, der associeres med DNA-polymerase III og letter den høje grad af processivitet, der kræves til DNA-replikation. Glidende klemmeproteiner åbnes og indlæses på specifikke DNA-strukturer af klemlæssere i nærvær af ATP. Vi sigter mod at få indsigt i bidrag fra forskellige domæner til funktionen af beta ved hjælp af en linked‐beta‐klemme, der begrænser homodimer ved en af to grænseflader. Normalt tillader den homo‐dimeriske struktur af beta‐klemmen det at fungere som et molekylært værktøjsbælte, der binder mere end et protein samtidigt på specifikke proteininteraktionssteder på klemmen. Således vil en bedre forståelse af glideklemmernes rolle i processen med DNA-skadetolerance indsamles ved at undersøge, om en grænseflade eller bindingssted er tilstrækkelig til DNA-belastning eller til andre proteininteraktioner. For at skabe denne konstruktion blev linkerlængden og sekvensen samt ekspressionsbetingelserne optimeret. De koblede beta-proteiner blev karakteriseret ved en termisk denatureringsassay og viste sammenlignelig termisk stabilitet med vildtype beta. I en ATPase-analyse blev der påvist lignende mængder uorganisk fosfat i reaktioner indeholdende enten bundet beta eller vildtype beta, hvilket indikerer, at klemlæsseren kan interagere med begge versioner af beta‐klemmen. I øjeblikket undersøger vi, om bundet og vildtype beta forbedrer processiviteten af en polymerase i et primerforlængelsesassay. Vi konstruerer og karakteriserer nu varianter af vildtype beta og koblet beta for at teste vigtigheden af rester på kun et af grænsefladerne eller partnerproteinbindingsstederne.
