En Guide til Koi Herpesvirussygdom: hvordan man opdager, behandler og forebygger

det første anerkendte tilfælde af KHV opstod i Det Forenede Kongerige i 1996 (Haenen et al. 2004). Siden da er andre tilfælde blevet bekræftet i næsten alle lande, at kultur koi og/eller almindelig karpe med undtagelse af Australien (Hedrick et al. 2000; Haenen et al. 2004, Pokorova et al. 2005). Dette informationsark er beregnet til at informere dyrlæger, biologer, fiskeproducenter og hobbyister om KHV-sygdom.

hvad er KHV?

Figur 1. Koi med flettet gæller og sunkne øjne på grund af koi herpesvirus sygdom.

Koi herpesvirus (også kendt som Cyprinid herpesvirus 3; CyHV3) er klassificeret som en dobbeltstrenget DNA-virus tilhørende familien Alloherpesviridae (som omfatter fisk herpesvirus). Arbejdet med Vals og kolleger (Vals et al. 2005, 2009) afslørede, at KHV faktisk er et herpesvirus, baseret på virusmorfologi og genetik, og er tæt beslægtet med karpepokvirus (Cyprinid herpesvirus 1; CyHV1) og guldfisk hæmatopoietisk nekrosevirus (Cyprinid herpesvirus 2; CyHV2). Koi herpesvirus sygdom er blevet diagnosticeret i koi og almindelig karpe (Hedrick et al. 2000; OATA 2001). Andre cyprinider (f.eks. guldfisk; Carassius auratus og græskarper; ctenopharyngodon idella) og ikke-cyprinidarter påvirkes typisk ikke af KHV, skønt KHV-DNA er blevet påvist i væv fra guldfisk og andre fiskearter udsat for virussen ved hjælp af polymerasekædereaktion (PCR) testmetoder (El-Matbouli et al. 2007, Sadler et al. 2008, Bergmann et al. 2009, Kempter et al. 2009). Hybrid guldfisk (han guldfisk C. auratus hunkarpe C. carpio) var moderat resistente over for dødelighed efter eksperimentel infektion med KHV (Hedrick et al. 2006). Hvorvidt hybrid almindelig karpe, andre cyprinider eller ikke-cyprinidarter kan have KHV og senere overføre sygdommen til na-karpesorter forbliver kontroversiel.

Koi herpesvirussygdom (KHVD) påvirker fisk i forskellige aldre, hvilket ofte resulterer i 80-100 procent dødelighed i modtagelige populationer, når vandtemperaturerne er mellem 60 liter og 77 liter F (16 liter og 25 liter C) (Haenen et al. 2004). Som med andre herpesvirale infektioner kan KHV dog forblive i den inficerede fisk for livet; derfor bør fisk, der kommer sig efter et KHV-udbrud, betragtes som bærere af virussen (Petty and Fraser 2005, St. Hilaire et al. 2005, Eide et al. 2011).

Hvad er tegnene på KHV?

kliniske tegn på KHV er ofte ikke-specifikke. Dødeligheden kan begynde meget hurtigt i inficerede populationer, hvor dødsfald starter inden for 24 Til 48 timer efter den første begyndelse af kliniske tegn. I eksperimentelle undersøgelser døde 82 procent af fiskene udsat for virussen ved en vandtemperatur på 72 liter F (22 liter C) inden for de første 15 dage (Ronen et al. 2003). KHV-infektion kan producere alvorlige gællelæsioner, der udviser som gællemotling med røde og hvide pletter (Figur 1) (kan svare til columnaris sygdomstegn; srac publikation #479b om Columnaris sygdom). De hvide pletter skyldes nekrose (død) af gillevævet. Gill læsioner forårsaget af KHV sygdom er de mest almindelige kliniske tegn i berørte koi. Andre eksterne tegn på KHV kan omfatte blødende gæller, sunkne øjne og blege pletter på huden. Nogle KHV-inficerede koi kan have en hakket næse (Goodvin 2012). I nogle tilfælde kan sekundære bakterielle og parasitære infektioner være det mest oplagte problem, der maskerer skaden forårsaget af den primære virusinfektion. Mikroskopisk undersøgelse af gillebiopsier afslører ofte et stort antal bakterier og forskellige parasitter (Hedrick et al. 2000; Haenen et al. 2004).

interne tegn på KHVD er variable og ikke-specifikke, men kan omfatte større end normale vedhæftninger i kropshulrummet og forstørrelse og/eller flettet udseende af indre organer (Hedrick et al. 2000; Haenen et al 2004).

adfærdsmæssigt forbliver berørte fisk ofte nær overfladen, svømmer sløv og kan udvise åndedrætsbesvær og ukoordineret svømning.

Hvordan bliver fisk smittet med KHV?

metoder til spredning (transmission) af KHV inkluderer direkte kontakt med inficeret fisk, kontakt med væsker fra inficeret fisk; og kontakt med vand, mudder eller andre fomitter/vektorer, der er kommet i kontakt med forurenede systemer. Den infektiøse virus kommer primært ind i modtagelige fisk gennem huden, inklusive gillevæv (Costes et al. 2009). Afhængig af vandtemperaturen kan modtagelige fisk, der udsættes for KHV, enten blive inficeret, udvikle sygdom og dø; eller de kan overleve det første udbrud af sygdommen og blive bærere af virussen (Petty and Fraser 2005, St. Hilaire et al. 2005, Eide et al. 2011). Fisk, der overlever eksponering for KHV eller modtager KHV-vaccinen, kan blive immuniseret og udvikle et beskyttelsesniveau mod virussen, selvom beskyttelseslængden forbliver ukendt (Ronen et al. 2003, Perelberg et al. 2008). Overlevende fra KHV-udbrud kan blive bærere af virussen og kan være i stand til at sprede sygdommen til modtagelige fisk. Disse bærerfisk viser muligvis ikke tegn på KHV-infektion, selvom de muligvis bærer og/eller kaster virussen.

Hvordan påvirker vandtemperaturen KHV sygdom?

KHV-sygdom (KHVD) udbrud forekommer typisk om foråret og efteråret, når vandtemperaturerne er mellem 60 og 77 liter F (16 liter og 25 liter C) med en inkubationsperiode på 7-21 dage afhængigt af vandtemperaturen (Haenen et al. 2004). KHVD ved temperaturer så lave som 60 liter f (15,5-16 liter C) er rapporteret i almindelige karperudbrud i Japan, og eksperimentelle forsøg har vist, at virussen kan inducere dødelighed op til omkring 82 kg F (28 kg C). Varmere Vandtemperaturer fremkalder hurtigere klinisk sygdom sammenlignet med fisk, der holdes ved lavere temperaturer. Ved lavere Vandtemperaturer (f. eks., 55 liter F), kan virussen inficere fisk uden at fremkalde kliniske tegn på sygdom, men når tilladte Vandtemperaturer igen opleves, viser fiskene typiske KHV-tegn og kan dø (Gilad et al. 2003, St. Hilaire et al. 2005).

Hvordan ved jeg, om mine fisk har KHV?

positiv diagnose af KHV kræver hjælp fra en dyrlæge eller fiskesundhedsspecialist og et diagnostisk laboratorium for fiskesygdomme. Diagnostisk identifikation af KHV kan udføres ved flere direkte og indirekte metoder. Direkte metoder er procedurer, der registrerer faktiske virus eller” stykker ” af virus. Indirekte metoder er procedurer, der bestemmer, om en fisk har monteret et immunrespons mod KHV efter eksponering for virus ved at måle anti-KHV-antistofniveauer i blodet (Adkison et al. 2005, St-Hilaire et al. 2005, 2009).

direkte metoder, der anvendes til at identificere KHV, inkluderer: 1) virusisolering og identifikation (dvs.dyrkning af virussen) ved hjælp af en modtagelig cellelinie, såsom koi Fin (KF-1) cellelinie {optimal vækst observeret ved temperaturer mellem 59 liter og 77 liter F (15 liter og 25 liter C)} og 2) PCR-teknikker (dvs. test for tilstedeværelsen af KHV-DNA). Til disse direkte diagnostiske tests fjernes væv fra fisk, der opsamles i LIVE og derefter aflives. Isolering og påvisning af virus i væv fra fisk døde længere end et par timer kan være upålidelige. Ikke-dødelige direkte diagnostiske tests er tilgængelige på prøver såsom blod, fækalt materiale, slim og gilleklip (dvs.biopsier), men disse tests kan give mindre endelige eller mindre nøjagtige resultater. En positiv cellekulturtest indikerer en aktiv, igangværende infektion med KHV. Positiv påvisning af KHV-DNA ved hjælp af PCR indikerer, at virussen er til stede, så den kan bruges til at bekræfte KHV-sygdom hos klinisk syge fisk og måske endda til at identificere bærere (Eide et al. 2011).

en indirekte testmetode for KHV, der er blevet anvendt i vid udstrækning, er det immunosorbentassay (ELISA). KHV ELISA bruger en blodprøve og er derfor et ikke-dødbringende diagnostisk værktøj. ELISA-data kan dokumentere, at en fisk i øjeblikket monterer eller tidligere har monteret et immunrespons (dvs.produktion af antistoffer) mod KHV. En positiv ELISA-test for KHV indikerer, at fisken har produceret antistoffer mod KHV efter en tidligere eksponering for virussen. Imidlertid tager antistofproducerende immunceller tid at blive aktiveret, og over tid, hvis en fisk ikke længere er syg, kan anti-KHV-antistofproduktion bremse eller stoppe. Derfor kan ELISA muligvis ikke påvise antistoffer mod KHV, hvis infektionen opstod år før, eller hvis fisken endnu ikke har haft tid til at producere antistoffer.

Negative resultater ved enten direkte eller indirekte test betyder ikke nødvendigvis, at fisk ikke er bærere. Der er ingen test, der definitivt registrerer alle luftfartsselskaber eller overlevende.

er der behandling for KHV?

der er ingen behandling for KHV. Antivirale lægemidler er ikke tilgængelige til behandling af KHV eller andre virussygdomme hos dyrkede fisk. Undersøgelser har vist, at koi kan overleve et udbrud af KHV, hvis vandtemperaturerne øges til 86 liter F (30 liter C) under udbruddet (Ronen et al. 2003). Imidlertid, denne teknik øger kun overlevelsesraten marginalt, og kunstigt at hæve Vandtemperaturer over 80 liter F i holdefaciliteter kan resultere i en øget forekomst af andre mere almindelige bakterielle og parasitære sygdomme. Høje vandtemperaturer anbefales generelt ikke til rutinemæssig opdræt og håndtering af koi og almindelig karpe. Derudover og endnu vigtigere kan koi, der overlever et KHV-udbrud eller dem, der udsættes for høje vandtemperaturer, blive bærere af virussen. Disse carrier koi er en kilde til sygdommen til modtagelige fisk, når betingelserne er passende for viral udgydelse og infektion. På grund af tidligere eksponering og immunisering af virussen vil bærerfisk typisk ikke bukke under for KHV-sygdom eller vise tegn på klinisk infektion.

for nylig godkendte USDA APHIS brugen af en svækket levende vaccine til forebyggelse af KHVD, der skal administreres til almindelig karpe eller koi, der er tungere end 100 gram (vaccinen er ikke godkendt til brug i yngel). Vaccinen, oprindeligt udviklet af en israelsk forskningsgruppe (Ronen et al. 2003), genererer høje anti-KHV antistoftitere og beskytter vaccineret almindelig karpe eller koi ved efterfølgende viral udfordring (Ronen et al. 2003, Perelberg et al. 2008). Der er imidlertid rejst betænkeligheder med hensyn til vaccinens virkning og længden af den beskyttelse, der gives vaccineret fisk. I øjeblikket er det ukendt, om vaccinerede fisk bliver bærere af vaccinestammen, eller om de er beskyttet mod infektion af vildtypestammen, som ville udgøre en trussel mod uvaccineret almindelig karpe. En anden udfordring med hensyn til vaccinen er, at ingen diagnostiske tests er kommercielt tilgængelige, der kan differentiere vaccineret versus naturligt inficeret/eksponeret fisk.

fordi KHV-udbrud har forårsaget store tab ved koi og almindelige karpefaciliteter, og fordi der er bekymring for, at overlevende er bærere, bør enhver med koi, der er blevet diagnosticeret med KHV, overveje affolkning (eliminering af hele befolkningen) som en logisk mulighed. Alle materialer og systemer, som den inficerede fisk har kontaktet, skal rengøres og desinficeres.

virale partikler i miljøvand kan forblive infektiøse i op til tre dage. 2006). Imidlertid kan almindelige desinfektionsprotokoller (se nedenfor) bruges til at eliminere virussen fra vandsystemer og udstyr. Biofiltre og biofiltermedier, der udsættes for virussen, skal også rengøres grundigt og desinficeres. Før desinfektion skal udstyr rengøres for affald eller organisk opbygning, da disse kan reducere desinfektionsmiddelets effektivitet. Kloropløsninger (f.eks. husholdningsblegemiddel) kan bruges til at desinficere stort udstyr eller systemer uden fisk. Den anbefalede protokol for klor er 200 ppm (200 mg/L) i en time (Noga 1996). Korrekt dosering af denne aktive ingrediens afhænger af typen af klor anvendes. For husholdningsblegemiddel, som er 5,25 procent natriumhypochlorit pr. liter, vil 35 ml pr. gallon vand give 200 mg/L endelig koncentration.

kvaternære ammoniumforbindelser kan også anvendes til systemer og udstyr. Kvaternære ammoniumforbindelser er mildere på net end kloropløsninger. Den anbefalede KVALITETSKONTROLKONCENTRATION til desinfektion er 500 ppm (500 mg/L) i en time (Noga 1996). Korrekt dosering afhænger af typen / koncentrationen i den anvendte blanding, da koncentrationerne varierer afhængigt af det anvendte produkt. Forskellige kvalitetsprodukter kan variere fra 10 procent til 50 procent aktiv ingrediens. F. eks.er Roccal-D Plus Karr (Pharmacia & Upjohn Company) ca. 24% aktiv ingrediens; derfor ville en endelig behandlingskoncentration på 500 mg/L kræve ca. 7,9 mL Karr pr. gallon vand. Skyl grundigt efter brug af enhver type desinfektionsmiddel for at fjerne resterende desinfektionsmiddel, der kan dræbe fisk.

Hvordan kan KHV forhindres?

før du får fisk, skal du først spørge leverandøren, om der har været større uforklarlige tab i befolkningen. Overvågning og test for KHV kan udføres ved laboratorieundersøgelser, så spørg leverandører, hvis der er foretaget nogen test for KHV, og anmod om en kopi af laboratorieresultatdokumentation. Den bedste måde at forhindre KHV på er at kende dine fiskeleverandører og have et godt samarbejde med dem.

karantæne (dvs.adskillelse fra andre koi) er den mest pålidelige metode til at undgå introduktion af patogener i en dam eller et anlæg. For at gennemføre en effektiv karantæneprocedure skal alle nye fisk opbevares i et separat system, ideelt set i en anden bygning eller et andet område end den hjemmehørende fisk. Beboerfisk skal fodres, håndteres og vedligeholdes inden den nye fisk. Den karantænefisk kræver dedikeret udstyr såsom Net, spande og sifonslanger, der kun bruges til dem. Derudover bør fodbade og håndvask bruges af alle, der kommer ind og forlader karantæneområdet. Fisk skal sættes i karantæne i mindst 30 dage. Specielt til KHV skal Ny koi sættes i karantæne i vand, der er 75 liter f (24 liter C) i mindst 30 dage. Ved afslutningen af karantæneperioden skal enhver syg fisk undersøges af en dyrlæge og/eller et diagnostisk laboratorium for at udelukke KHV eller andre sygdomme. Hvis alle fisk forekommer sunde, skal der indsamles blodprøver fra disse karantænefisk og indsendes til antistofdetektion ved hjælp af ELISA. (Atkinson et al. 2005; St. Hilaire et al. 2009)

Koi-hobbyister opfordres til at fremme brugen af koi-udstillinger i engelsk stil, som holder forskellige kilder (ejere) af koi adskilt under forestillingen og bedømmelsen. Derudover, separate net, sifonslanger, og andet udstyr skal bruges af alle udstillingsdeltagere til deres egen fisk. Den japanske udstillingsstil, hvor koi fra forskellige ejere placeres sammen i den samme tank, kan resultere i spredning af sygdom blandt modtagelige fisk. Uanset udstillingsstil, fisk, der vender tilbage fra udstillinger, skal sættes i karantæne i mindst 30 dage og holdes kl 75 liter F inden de placeres tilbage i den generelle befolkning. For ekstra sikkerhed kan antistofprøvning af blodprøvetagning være nyttigt. Overlevende (fisk, der tidligere har været udsat for KHV sygdom) bør aldrig tages til en koi Vis.

i slutningen af karantæneperioden og inden du placerer alle fisk sammen, skal du placere flere nye koi med flere koi fra den etablerede befolkning i et separat område væk fra resten af den etablerede befolkning og se dem for tegn på sygdom. Denne” test ” kan hjælpe med at bestemme med et mindre antal fisk, om placering af de to populationer sammen efter karantæne kan forårsage problemer. Desværre er der ingen garantier.

Hvem skal jeg kontakte, hvis jeg har mistanke om, at min fisk har KHV, eller hvis jeg ønsker mere information?

Kommercielle fiskeproducenter, grossister og detailhandlere i Florida kan kontakte en af følgende University of Florida Fish Disease Diagnostic Labs*:

i north Florida:

Thomas B. Valsek
laboratorium for dyrelivs-og akvatisk Veterinærsygdom (BØLGDL)
akvatisk Patobiologi
University of Florida
Bldg. 471, 2173 klippevej
Gainesville, Florida 32611
(352) 273-5202
e-mail: [email protected]

i Det Sydlige Florida:

Roy P. E. Yanong eller Deborah Pouder
tropisk Akvakulturlaboratorium
diagnostisk laboratorium for fiskesygdomme
University of Florida
1408 24. St. SE 33570
Ruskin, Florida
(813) 671-5230
http://tal.ifas.ufl.edu

*bemærk: disse laboratorier accepterer kun sager fra kommercielle fiskeproducenter, grossister og detailhandlere.

hobbyister og personlige koi-damejere (eller kommercielle fiskeproducenter, grossister og detailhandlere uden for Florida) kan søge efter en akvatisk dyrlæge eller et akvatisk diagnostisk laboratorium i deres område på Akvavetmed hjemmeside (http://www.aquavetmed.info) eller http://www.myveterinarian.com/avma/vclPublic/#.

Hvad er de lovgivningsmæssige overvejelser forbundet med KHV?

fra januar 2007 blev KHV føjet til Verdensorganisationen for dyresundhed (OIE; www.oie.int) sygdomsliste for fisk. På grund af denne liste USA Department of Agriculture Animal and Plant Health Inspection Service (USDA APHIS) beder om, at akkrediterede dyrlæger og diagnostiske laboratorier rapporterer positive tilfælde af KHV til området dyrlæge-in-charge (AVIC) i den stat, hvor fisken stammer fra. Der vil dog ikke blive anmodet om kundeoplysninger (f.eks. navn, adresse). Disse oplysninger hjælper USDA med at bestemme, hvad forekomsten af KHV er i USA. USDA APHIS har ingen import sundhedskrav specifikke for KHV for koi eller andre fisk bevæger interstate eller internationalt. Der er ingen obligatorisk affolkning for populationer af koi inficeret med KHV. Det er op til ejeren af disse dyr og deres dyrlæge at beslutte, hvilket kursus de skal tage.

Koi-opdrættere, forhandlere, udstillere og dyrlæger bør være opmærksomme på internationale eksportsundhedsbestemmelser vedrørende flytning af KHV-vaccineret fisk. Importkravene for nogle lande angiver, at KHV-vaccineret fisk ikke vil være tilladt indrejse. Tjek venligst APHIS hjemmeside for statslige og internationale sundhedskrav (opført henholdsvis): http://www.aphis.usda.gov/animal_health/animal_dis_spec/aquaculture/aquastates.shtml

http://www.aphis.usda.gov/regulations/vs/iregs/animals/

eller kontakt det lokale USDA APHIS VS Area Office for at få hjælp (http://www.aphis.usda.gov/animal_health/area_offices/).

kan mennesker få KHV?

der er ingen bekymring med KHV. Herpesvirus, der er ansvarlig for at forårsage KHV-sygdom hos fisk, vil ikke forårsage sygdom hos mennesker.

hvordan adskiller KHV sig fra andre virussygdomme?

det er vigtigt at differentiere KHV fra andre vira, der kan forårsage sygdom hos karper og koi. To andre vigtige virussygdomme, der er anerkendt i karper, er forårsviræmi af karper (SVC) og karperkopper (Cyprinid herpesvirus 1; CyHV1). Disse sygdomme har signifikant forskellige forvaltnings-og reguleringsmæssige konsekvenser (tabel 1). Både KHV og SVC er nu opført som anmeldelsespligtige fiskesygdomme af OIE. Inden for USA betragtes SVC imidlertid som en fremmed eller eksotisk (ikke til stede) fiskesygdom hos akvakulturerede modtagelige arter, og som sådan er den akkrediterede dyrlæge eller laboratorium forpligtet til at underrette bekræftede udbrud til USDA APHIS Veterinary Services-embedsmænd, der igen vil underrette OIE. Til sammenligning anses KHV for at være udbredt i USA. USDA APHIS beder akkrediterede dyrlæger og laboratorier om at rapportere tilfælde af KHV til områdets dyrlæge (AVIC) i den stat, hvor udbruddet finder sted. Oplysningerne hjælper USDA med at bestemme, hvad den sande forekomst af KHV er i USA, hvert udbrud af KHV vil ikke blive underrettet til OIE.

Forårsviræmi af karpe sygdom er forårsaget af en enkeltstrenget RNA-virus, Rhabdovirus carpio, og er blevet rapporteret hos almindelig karpe og koi (C. carpio), græskarpe (C. idella), bighead karpe (Aristichthys nobilis), sølvkarpe (Hypophthalmichthys molitriks), Crucian karper (Carassius carassius) og almindelig guldfisk (C. auratus). For mere information om SVC se tabel 1 og UF / IFA faktaark “Spring Viremia of Carp” (VM-142).

Karpepoks sygdom (Cyprinid herpesvirus 1; CyHV1) er forårsaget af et andet herpesvirus fra KHV (Herpesvirus cyprini), der har en bred geografisk fordeling og påvirker almindelig karpe og koi. Karperkopper forårsager typisk glatte hævede vækster (“vorte-lignende masser”) på hud og finner af ældre fisk, men kan være forbundet med høj dødelighed hos yngel mindre end to måneder (Sano et al. 1990). Karperkopper er ikke en rapporterbar eller anmeldelsespligtig sygdom i de amerikanske Vandtemperaturer over 68 kg F (20 kg C) hjælper med at reducere hud-og finvækst på ældre fisk, men eliminerer ikke virussen fra fisken (tabel 1). Hos modne fisk er karperkopper typisk en ikke-dødelig, selvbegrænsende sygdom (dvs.de fleste, hvis ikke alle vækster, vil løse ved varmere temperaturer alene).

sammendrag

Koi herpesvirussygdom er en ødelæggende sygdom hos ornamental koi og almindelig karpe. Der er flere metoder til at detektere forskellige tilstande af infektionen. Der er ingen effektiv behandling for at fjerne virusets fisk. God forvaltningspraksis, herunder karantæne, testning og passende opdræt, er vigtige komponenter til forebyggelse af denne sygdom for alle koi-og almindelige karperproducenter, forhandlere og hobbyister.

August 2013