nogle mikroorganismer har en evne til at reducere svovl (svovl) indeholdende forbindelser til hydrogensulfid under metabolisme, som almindeligvis anvendes som testmål for deres identifikation i laboratorier. Talrige metoder anvendes til at detektere H2S-produktion af mikroorganismer, der varierer med svovlkilden og metalsalte, der anvendes til at indikere H2S-dannelse. SIM er mere følsom ved påvisning af H2S end enten TSI eller KIA på grund af dens halvfaste natur, dens mangel på forstyrrende kulhydrater og brugen af peptoniseret jern som indikator. Imidlertid er Blyacetatpapir 10 gange mere følsomt end andre medier.
mål
for at bestemme, om mikroben reducerer svovlholdige forbindelser til sulfider for at producere hydrogensulfidgas.
princip
en jernforbindelse og en svovlforbindelse er inkluderet i testmediet til test for produktion af hydrogensulfidgas. Hydrogensulfid produceres, hvis svovlforbindelsen reduceres af bakteriestammen. Denne test bestemmer således, om mikroben reducerer svovlholdige forbindelser til sulfider under metabolismen. H2S produceres af visse bakterier gennem reduktion af svovlholdige aminosyrer som cystin, methionin eller gennem reduktion af uorganiske svovlforbindelser såsom thiosulfater, sulfater eller sulfitter under proteinnedbrydning eller når anaerob respiration sender elektronerne til svovl i stedet for til ilt. I begge tilfælde produceres H2S (hydrogensulfidgas), som reagerer med jernforbindelsen for at danne det sorte bundfald af jernsulfid. Den sorte farve virker som en indikator for tilstedeværelsen af hydrogensulfid. Påvisning af hydrogensulfid (H2S) gas produceret af en organisme. bruges hovedsageligt til at hjælpe med identifikation af den pågældende organisme.
medier:
denne test kan udføres med brug af flere medier, herunder Triple Sugar Iron (TSI), Kligler ‘ s Iron Agar (KIA), SIM medium og Blyacetatpapir.
- Sulfitindolmotilitet (SIM) medium til påvisning af H2S
dette medium indeholder jernholdigt ammoniumsulfat og natriumthiosulfat, som derefter sammen tjener som indikatorer til produktion af hydrogensulfid. Produktion af hydrogensulfid kan detekteres, når jernholdigt sulfid, et sort bundfald, fremstilles som et resultat af jernholdigt ammoniumsulfat, der reagerer med H2S-gas.
sammensætning:
Oksekødekstrakt 3,0 g pepton 30,0 g jernholdigt ammoniumsulfat 0,2 g natriumthiosulfat 0,025 g Agar 3,0 g endelig pH ( ved 25 liter C) 7,3 liter 0.2 destilleret vand 1000ml
- Jernagarer til påvisning af H2S
dette medium er egnet til påvisning af H2S-produktion ved enterobakterier. H2S detekteres af jerncitratet indeholdt i mediet - Blyacetatpapirtest til påvisning af H2S
når en følsom teknik til påvisning af H2S-produktion er påkrævet, anbefales test af blyacetatpapir.
Procedure
I. I sulfit indolmotilitet (SIM) medium
- inokulerer organismen i mærket rør ved hjælp af stikinokulation.
- inkuber de inokulerede rør ved 37 liter C i 24-48 timer.
- Observer for dannelsen af sort bundfald på mediet.
II. i kligler jernagar (KIA) og tredobbelt Sukkerjernagar (TSIA)
- Inokuler testorganismen i KIA og inkuber den ved passende temperatur natten over.
- Overhold for sværtning af mediet.
III. test af Blyacetatpapir
- inokulerer et rør eller en flaske sterilt peptonvand eller næringsstofbuljong med testorganismen.
- indsæt en blyacetatpapirstrimmel i halsen på flasken eller røret over mediet, og stop godt.
- inkuber det inokulerede medium ved 35-37oC, og Undersøg dagligt for en sværtning af den nederste del af strimlen.
resultater
- positivt resultat: Blackening på mediet
- negativt resultat:Ingen sværtning på mediet
bruger
- det bruges hovedsageligt til at hjælpe med identifikation af familiemedlemmer Enterobacteriaceae og lejlighedsvis til at differentiere andre bakterier såsom Bacteroidessps og Brucella sps.
- testen hjælper med identifikation og differentiering af medlemmer af Enterobacteriaceae (enterics) fra andre Gram – baciller.
- det er især nyttigt at identificere Salmonella, Francisella og Proteus arter.
begrænsninger
- H2S-produktion kan hæmmes på TSI for organismer, der anvender saccharose og undertrykker den mekanisme, der resulterer i produktion af H2S.
- blyacetat er giftigt for bakterier og kan hæmme væksten af visse bakterier. Lad ikke medierne røre ved strimlen.
- det anbefales, at biokemisk, immunologisk, molekylær eller massespektrometri test udføres på kolonier fra ren kultur for fuldstændig identifikation.
- Tille, P. M., & Forbes, B. A. (2014). Bailey & Scotts diagnostiske mikrobiologi (trettende udgave.). St. Louis, Missouri: Elsevier.
- Cappuccino J. G. og Sherman N. 2008. Mikrobiologi: en Laboratoriemanual, 8. udgave. Pearson Benjamin Cummings, San Francisco, CA, USA.
- www.vumicro.com/vumie/help/VUMICRO/Hydrogen_Sulfide_Production_Test.htm
- mic.microbiologyresearch.org/content/journal/micro/10.1099/00221287-8-3-397
- https://microbenotes.com/hydrogen-sulfide-h2s-production-test/
- www.microbiologyresearch.org/docserver/fulltext/micro/8/3/mic-8-3-397.pdf?expires=1543332392&id=id&accname=guest&checksum=C42277C712F05E5951241893FC8EC3F7
- spot.pcc.edu/~jvolpe/b/bi234/lab/differentialMedia/H2Sproduction.html
- https://senthilprabhu.blogspot.com/2017/10/hydrogen-sulphide-h2s-production-test.html
- https://jb.asm.org/content/jb/10/5/439.full.pdf
