Isolations-og identifikationsmetoder for Rothia-arter i mundhule

Rothia Dentocariosa og Rothia mucilaginosa, som er Gram-positive bakterier, er en del af den normale flora i det menneskelige mundhule og svælg. Desuden forventes Rothia Aeria, som først blev isoleret fra luftprøver i den russiske rumstation Mir, at være en mundtlig indbygger. Immunkompromitterede patienter inficeres ofte af disse organismer, hvilket fører til forskellige systemiske sygdomme. Inddragelsen af disse organismer i orale infektioner har tiltrukket sig lidt opmærksomhed, og deres fordeling i mundhulen er ikke blevet fuldstændigt afklaret på grund af vanskeligheder med nøjagtigt at identificere disse organismer. Et egnet selektivt medium til orale Rothia-arter, herunder R. aeria, er nødvendigt for at vurdere den reelle forekomst af disse organismer i mundhulen. For at undersøge bakteriepopulationen i mundhulen blev der udviklet et nyt selektivt medium (ORSM) til isolering af orale Rothia-arter i denne undersøgelse. ORSM består af trypton, natriumgluconat, Lab-Lemco pulver, natriumfluorid, neutralt acriflavin, lincomycin, colistin og agar. Den gennemsnitlige vækstgenopretning af orale Rothia-arter på ORSM var 96,7% sammenlignet med den på BHI-y-agar. Vækst af andre repræsentative orale bakterier, dvs. slægter Streptococcus, Actinomyces, Neisseria og Corynebacterium, blev bemærkelsesværdigt hæmmet på det selektive medium. PCR-primere blev designet baseret på delvise sekvenser af 16S rDNA-generne af orale Rothia-arter. Disse primere reagerede på hver organisme og reagerede ikke på andre ikke-orale Rothia-arter eller repræsentative orale bakterier. Disse resultater viste, at disse primere er nyttige til identifikation af orale Rothia-arter. En simpel multipleks PCR-procedure ved anvendelse af disse primere var en pålidelig metode til identifikation af orale Rothia-arter. Andelen af orale Rothia-arter i spytprøver indsamlet fra 20 forsøgspersoner blev undersøgt ved dyrkningsmetode ved anvendelse af ORSM. Rothia dentocariosa, Rothia mucilaginosa og R. aeria tegnede sig for 1,3%, 5,9% og 0.8% af det samlede dyrkbare bakterietal på henholdsvis BHI-y-agar i mundhulen hos alle forsøgspersoner. Det blev indikeret, at blandt orale Rothia-arter er R. mucilaginosa mest fremherskende i mundhulen hos mennesker. Et nyt selektivt medium, ORSM, var nyttigt til isolering af hver oral Rothia-Art.



+