Technische Informationen und verwandte Produkte
Produkteigenschaften für native Meerrettichperoxidase
Extinktionskoeffizient: EmM = 100 bei Messung bei 403 nm.1
Molekulargewicht: (ca. 44 kDa)
Umfasst die Polypeptidkette (33.890 Dalton), Hemin plus Ca2+ (ca. 700 Dalton),
und Kohlenhydrate (9400 Dalton).3
Isoelektrischer Punkt: Isozyme reichen von 3,0 – 9,0
Mindestens sieben Isozyme von HRP existieren.2
Meerrettichperoxidase (HRP) wird aus Meerrettichwurzeln (Acacia rusticana) isoliert und gehört zur Ferroprotoporphyringruppe der Peroxidasen. HRP ist ein einkettiges Polypeptid, das vier Disulfidbrücken enthält. Es ist ein Glykoprotein, das 18% Kohlenhydrate enthält. Die Kohlenhydratzusammensetzung besteht aus Galactose, Arabinose, Xylose, Fucose, Mannose, Mannosamin und Galactosamin, abhängig vom spezifischen Isozym.2
Substratspezifität
HRP verbindet sich leicht mit Wasserstoffperoxid (H2O2), und der resultierende Komplex kann eine Vielzahl von chromogenen Wasserstoffspendern oxidieren. Es kann auch chemilumineszierende Substrate wie Luminol und Isoluminol und fluorogene Substrate wie Tyramin, Homovanillinsäure und 4–Hydroxyphenylessigsäure verwenden.
Der Substratindex des Enzyme Explorers enthält Links zu mehreren chromogenen und chemilumineszenten Wasserstoffdonatoren, die zur Bestimmung der Peroxidaseaktivität verwendet werden.
Inhibitoren
Die folgenden Verbindungen sind Inhibitoren der Meerrettichperoxidase: Natriumazid, Cyanid, L–Cystin, Dichromat, Ethylenthioharnstoff, Hydroxylamin, Sulfid, Vanadat, p–Aminobenzoesäure, Cd+ 2, Co+2, Cu+2, Fe+ 3, Mn+2, Ni+ 2, Pb+2,4
pH-Abhängigkeit
Der pH-Wert von optimum von HRP liegt im Bereich von 6,0 bis 6,5. Die Aktivität bei pH 7,5 beträgt 84% des Maximums. Das Enzym ist im pH-Bereich von 5,0 bis 9,0 am stabilsten.5
Anwendungen
Meerrettichperoxidase wird häufig als Markierung für Immunglobuline in vielen verschiedenen immunchemischen Anwendungen verwendet, einschließlich ELISA, Immunoblotting und Immunhistochemie. HRP kann durch verschiedene Methoden an Antikörper konjugiert werden, einschließlich Glutaraldehyd, Periodatoxidation, durch Disulfidbindungen sowie durch Amino- und Thiol-gerichtete Cross-Inker. HRP ist die begehrteste Markierung für Antikörper, da es die kleinste und stabilste der drei beliebtesten Enzymmarkierungen (HRP, alkalische Phosphatase und B-Galactosidase) ist und seine Glykosylierung zu einer geringeren unspezifischen Bindung führt.6 Protokolle, die die Methoden der Glutaraldehyd- und Periodatkonjugation beschreiben, können in Harlow, E. et al.7
Wir bieten verschiedene chromogene und chemilumineszierende Detektionsreagenzien für Blotting-, Histologie- und ELISA-Anwendungen an.
Wir bieten auch eine komplette Linie von HRP-konjugierten Antikörpern an.
Zubereitungshinweise
Die Wahl des Lösungsmittels hängt von der beabsichtigten Anwendung ab. Die pulverförmigen Enzyme sind lösliches Wasser oder 0,1 M Phosphatpuffer, pH 6 (10 mg/ml). Die Suspension (P6140) kann in Wasser verdünnt werden.
Lagerung/Stabilität
Die pulverförmigen Peroxidasen sollten bei 2-8 °C gekühlt werden. Die Suspension (P6140) sollte bei 2-8 ° C gelagert werden.
Temperaturstabilität von lyophilisierten Pulvern
Temperaturstabilität von Lösungen
Stabilität von Lösungen vs. pH
Stabilität von Lösungen vs. Konzentration
RZ-Profil
RZ (Reinheitszahl): das Absorptionsverhältnis A403/A275. Es ist ein Maß für den Hämingehalt der Peroxidase, nicht für die Enzymaktivität. Selbst Präparate mit hohem RZ-Wert können eine geringe enzymatische Aktivität aufweisen. Wählen Sie für konjugierende Proteine wie Antikörper gegen Peroxidase eine Peroxidase mit einem RZ-Wert von mindestens 3,0.
Spectrophotometric Method to Determine the RZ Value for Peroxidase
Peroxidase Enzymes for Labeling
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