G418

G418 (Geneticin, Invitrogen): In Wasser mit 200 mg / ml auflösen, filtersterilisieren und in Aliquots bei 4 ° C lagern

clonNAT (Nourseothricin, Werner BioAgents, Jena, Deutschland): In Wasser mit 100 mg / ml auflösen, filtersterilisieren und in Aliquots bei 4 ° C aliquots bei 4 ° C

Canavanin (l-Canavaninsulfatsalz, Sigma, C-9758): In Wasser mit 100 mg / ml auflösen, filtrieren sterilisieren und in Aliquots bei 4 ° C lagern

Thialysin (S- (2-aminoethyl) -l-cysteinhydrochlorid, Sigma, A-2636): Dissolve in water at 100 mg/ml, filter sterilize, and store in aliquots at 4 °C.

Amino acids supplement powder mixture for synthetic media (complete): Contains 3 g adenine (Sigma), 2 g uracil (ICN), 2 g inositol, 0.2 g para-aminobenzoic acid (Acros Organics), 2 g alanine, 2 g arginine, 2 g asparagine, 2 g aspartic acid, 2 g cysteine, 2 g glutamic acid, 2 g glutamine, 2 g glycine, 2 g histidine, 2 g isoleucine, 10 g leucine, 2 g lysine, 2 g methionine, 2 g phenylalanine, 2 g proline, 2 g serine, 2 g threonine, 2 g tryptophan, 2 g tyrosine, and 2 g valine (Fisher). Drop-out (DO) Pulvermischung ist eine Kombination der oben genannten Zutaten abzüglich der entsprechenden Ergänzung. Pro Liter Medium werden zwei Gramm der DO-Pulvermischung verwendet.

Aminosäureergänzung für Sporulationsmedium: Enthält 2 g Histidin, 10 g Leucin, 2 g Lysin, 2 g Uracil; Pro Liter Sporulationsmedium werden 0,1 g der Aminosäureergänzungspulvermischung verwendet.

Glucose (Dextrose, Fisher): 40% ige Lösung vorbereiten, autoklavieren und bei Raumtemperatur lagern.

YEPD: 120 mg Adenin (Sigma), 10 g Hefeextrakt, 20 g Pepton, 20 g Bacto-Agar (BD Difco) zu 950 ml Wasser in einem 2 l Kolben geben. Nach dem Autoklavieren 50 ml 40% ige Glucoselösung zugeben, gründlich mischen, auf ~ 65 ° C abkühlen und Teller einfüllen.

YEPD + G418: YEPD-Medium auf ~ 65 ° C abkühlen lassen, 1 ml G418-Stammlösung (Endkonzentration 200 mg / l) zugeben, gründlich mischen und Teller gießen.

YEPD + clonNAT: YEPD-Medium auf ~ 65 ° C abkühlen lassen, 1 ml clonNAT-Stammlösung (Endkonzentration 100 mg / l) zugeben, gründlich mischen und Teller gießen.

JEPD + G418/clonNAT: Kühlen Sie das YEPD-Medium auf ~ 65 ° C ab, geben Sie 1 ml G418 (Endkonzentration 200 mg / l) und 1 ml clonNAT (Endkonzentration 100 mg / l) Stammlösungen hinzu, mischen Sie gründlich und gießen Sie die Platten ein.

Angereicherte Sporulation: 10 g Kaliumacetat (Fisher), 1 g Hefeextrakt, 0,5 g Glucose, 0,1 g Aminosäuren-Ergänzungspulvermischung zur Sporulation, 20 g Bacto-Agar zu 1 l Wasser in einem 2 l Kolben geben. Nach dem Autoklavieren das Medium auf ~ 65 ° C abkühlen, 250 µl G418-Stammlösung (Endkonzentration 50 mg / l) zugeben, gründlich mischen und die Platten einfüllen.

(SD/MSG) − His/ Arg/Lys + Canavanin/ Thialysin / G418: 1,7 g Hefe-Stickstoffbase ohne Aminosäuren oder Ammoniumsulfat (BD Difco), 1 g MSG (l−Glutaminsäure-Natriumsalzhydrat, Sigma), 2 g Aminosäure-Ergänzungspulvermischung (DO – His/Arg/Lys), 100 ml Wasser in einen 250 ml Kolben geben. 20 g Bacto-Agar zu 850 ml Wasser in einem 2 l Kolben geben. Autoklav separat. Kombinieren Sie autoklavierte Lösungen, fügen Sie 50 ml 40% ige Glucose hinzu, kühlen Sie das Medium auf ~ 65 ° C ab, geben Sie 0,5 ml Canavanin (50 mg / l), 0,5 ml Thialysin (50 mg / l) und 1 ml G418 (200 mg / l) Stammlösungen hinzu, mischen Sie gründlich und gießen Sie Platten ein. Ammoniumsulfat behindert die Funktion von G418 und clonNAT. Daher wird synthetisches Medium, das diese Antibiotika enthält, mit Mononatriumglutaminsäure als Stickstoffquelle hergestellt (Cheng et al., 2000).

(SD/MSG) − His/Arg/Lys + Canavanin/Thialysin/clonNAT: 1,7 g Hefe−Stickstoffbase ohne Aminosäuren oder Ammoniumsulfat, 1 g MSG, 2 g Aminosäure-Ergänzungspulvermischung (DO – His/Arg/Lys), 100 ml Wasser in einem 250 ml Kolben zugeben. 20 g Bacto-Agar zu 850 ml Wasser in einem 2 l Kolben geben. Autoklav separat. Kombinieren Sie autoklavierte Lösungen, fügen Sie 50 ml 40% Glucose hinzu, kühlen Sie das Medium auf ~ 65 ° C ab und fügen Sie 0 hinzu.5 ml Canavanin (50 mg / l), 0,5 ml Thialysin (50 mg / l) und 1 ml clonNAT (100 mg / l) Stammlösungen, gründlich mischen und Platten gießen.

(SD/MSG) − His/Arg/Lys + Canavanin/Thialysin/ G418/clonNAT: 1,7 g Hefe−Stickstoffbase ohne Aminosäuren oder Ammoniumsulfat, 1 g MSG, 2 g Aminosäure-Ergänzungspulvermischung (DO – His/Arg/Lys), 100 ml Wasser in einem 250 ml Kolben zugeben. 20 g Bacto-Agar zu 850 ml Wasser in einem 2 l Kolben geben. Autoklav separat. Kombinieren Sie autoklavierte Lösungen, fügen Sie 50 ml 40% Glucose hinzu, kühlen Sie das Medium auf ~ 65 ° C ab, fügen Sie 0,5 ml Canavanin (50 mg / l), 0 hinzu.5 ml thialysine (50 mg/l), 1 ml G418 (200 mg/l) und 1 ml clonNAT (100 mg/l) Stammlösungen, mischen gänzlich und gießen Platten.

(SD/MSG) Komplett: 1,7 g Hefe-Stickstoff-Base ohne Aminosäuren oder Ammoniumsulfat, 1 g MSG, 2 g Aminosäuren-Ergänzungspulvermischung (komplett), 100 ml Wasser in einem 250 ml Kolben zugeben. 20 g Bacto-Agar zu 850 ml Wasser in einem 2 l Kolben geben. Autoklav separat. Kombinieren Sie autoklavierte Lösungen, fügen Sie 50 ml 40% ige Glucose hinzu, mischen Sie gründlich, kühlen Sie das Medium auf ~ 65 ° C ab und gießen Sie die Platten ein.

SD – His/Arg/Lys + Canavanin/Thialysin: 6 hinzufügen.7 g Hefe-Stickstoff-Base ohne Aminosäuren (BD Difco), 2 g Aminosäuren−Ergänzungspulvermischung (DO – His/Arg/Lys), 100 ml Wasser in einem 250 ml Kolben. 20 g Bacto-Agar zu 850 ml Wasser in einem 2 l Kolben geben. Autoklav separat. Kombinieren Sie autoklavierte Lösungen, fügen Sie 50 ml 40% Glucose hinzu, kühlen Sie das Medium auf ~ 65 ° C ab, fügen Sie 0,5 ml Canavanin (50 mg / l) und 0,5 ml Thialysin (50 mg / l) Stammlösungen hinzu, mischen Sie gründlich und gießen Sie Platten. Dieses Medium enthält keine Antibiotika wie G418 oder clonNAT und daher wird Ammoniumsulfat als Stickstoffquelle verwendet.

SD – Leu/Arg/Lys + Canavanin/Thialysin: 6,7 g Hefe−Stickstoffbase ohne Aminosäuren, 2 g Aminosäure-Ergänzungspulvermischung (DO – Leu/Arg/Lys), 100 ml Wasser in einem 250 ml Kolben zugeben. 20 g Bacto-Agar zu 850 ml Wasser in einem 2 l Kolben geben. Autoklav separat. Kombinieren Sie autoklavierte Lösungen, fügen Sie 50 ml 40% Glucose hinzu, kühlen Sie das Medium auf ~ 65 ° C ab, fügen Sie 0,5 ml Canavanin (50 mg / l) und 0,5 ml Thialysin (50 mg / l) Stammlösungen hinzu, mischen Sie gründlich und gießen Sie Platten.