Giemsa-Färbung: Prinzip, Verfahren und Ergebnisse

Giemsa-Färbung ist eine Art Romanowsky-Färbung, benannt nach Gustav Giemsa, einem deutschen Chemiker, der eine Farbstofflösung herstellte. Es wurde in erster Linie für den Nachweis von Malariaparasiten in Blutausstrichen entwickelt, wird aber auch in der Histologie zur Routineuntersuchung von Blutausstrichen eingesetzt.

Verwendungen von Giemsa Stain

Neben der Färbung von Malariaparasiten hat Giemsa Stain eine Vielzahl von Anwendungen in der Mikrobiologie und Pathologie:

• Giemsa-Färbung wird verwendet, um differentielle Leukozytenzahlen zu erhalten.
• Es wird auch verwendet, um Kern- und zytoplasmatische Morphologie der verschiedenen Blutzellen wie Blutplättchen, Erythrozyten, WBCs zu unterscheiden.
• In der Mikrobiologie wird die Giemsa-Färbung zur Färbung von Einschlusskörpern in Chlamydia trachomatis, Borrelia-Arten, und, wenn die Wayson-Färbung nicht verfügbar ist, zur Färbung von Yersinia pestis verwendet. Giemsa-Färbung wird auch verwendet, um Histoplasma capsulatum, Pneumocystis jiroveci, Klebsiella granulomatis, Penicillium marneffei und gelegentlich bakterielle Kapseln zu färben.
• Diese Färbung wird auch in der Zytogenetik verwendet, um die Chromosomen zu färben und Chromosomenaberrationen zu identifizieren. Es wird häufig für G-Banding (Giemsa-Banding) verwendet)

Prinzip der Giemsa-Färbung

Giemsa-Färbung ist eine Differentialfärbung und enthält eine Mischung aus Azurblau, Methylenblau und Eosinfarbstoff. Es ist spezifisch für die Phosphatgruppen der DNA und bindet sich dort, wo hohe Mengen an Adenin-Thymin-Bindung vorhanden sind.

Azur und Eosin sind saure Farbstoffe, die die Grundbestandteile der Zellen wie das Zytoplasma, Granulate usw. variabel anfärben.

Methylenblau wirkt als basischer Farbstoff, der die sauren Komponenten, insbesondere den Zellkern, färbt.

Methanol wirkt sowohl als Fixiermittel als auch als Zellfärbung. Das Fixiermittel erlaubt keine weitere Veränderung der Zellen und lässt sie auf dem Objektträger haften.

Zusammensetzung der Giemsa-Beize

Giemsa-Beize kann im eigenen Haus mit Giemsa-Beizpulver hergestellt oder kommerziell bezogen werden. Die Grundzutaten von beiden sind die gleichen; Je nach Verwendung können jedoch Verdünnungen vorgenommen werden.

VERFAHREN

A. Zur hausinternen Beizvorbereitung:

1. Wiegen Sie die erforderliche Menge Pulverfleck und geben Sie sie in eine saubere, trockene Flasche mit 1 Liter Fassungsvermögen. Fügen Sie Methanol hinzu und mischen Sie gut.
2. Glycerin abmessen, zugeben und gut mischen.
3. Legen Sie die flasche fleck in wasserbad bei 50-60 ° C oder bei 37 ° C für bis zu 2 stunden mit häufigen mischen.
4. Flasche etikettieren und an einem kühlen, dunklen Ort mit festem Stopfen aufbewahren.

HINWEIS: Wenn wasser bekommt in kontakt während jeder schritte der vorbereitung von fleck, die fleck ruft verwöhnt, daher verwenden, trockenen glaswaren und shop in bedingungen, wo es wäre keine wasser kontaktieren.

• 1 und verdünnen Sie mit Wasser, das auf pH 7,2 gepuffert ist, um Arbeitslösungen

B zu erhalten. Zum Färben von Objektträgern

Die Methode zum Färben, Konzentration und Zeitpunkt der verwendeten Färbung variiert je nach Verwendungszweck, zum Beispiel verwenden dünne Blutausstriche eine 1: 20-Verdünnung des Stammmaterials, während für dicke Blutausstriche eine 1: 50-Verdünnung verwendet wird.

ForThin blood smear

1. Fixieren Sie den luftgetrockneten Film in absolutem Methanol, indem Sie den Film kurz (zwei Dips) in ein Coplin-Gefäß mit absolutem Methanol tauchen.
2. Herausnehmen und an der Luft trocknen lassen.
3. Beize mit verdünnter Giemsa-Beize (1:20, vol/vol) für 20 min (Bei einer 1:20 verdünnung, 2 ml Stamm Giemsa zu 40 ml gepuffertem Wasser in einem Coplin-Gefäß geben).
4. Waschen Sie den Objektträger, indem Sie ihn kurz in ein Coplin-Gefäß mit gepuffertem Wasser eintauchen (ein oder zwei Dips).
   Hinweis: Übermäßige waschen wird entfärben die film.
5. Senkrecht an der Luft trocknen lassen. Beobachten Sie unter dem Mikroskop zuerst bei 40X und dann mit Ölimmersionslinse

FürDicke Blutausstriche

1. Lassen Sie den Film mehrere Stunden oder über Nacht gründlich an der Luft trocknen. Trocknen Sie die Filme nicht in einem Inkubator oder durch Hitze, da dies das Blut fixiert und die Lysierung der Erythrozyten beeinträchtigt.
   Hinweis: Wenn eine schnelle Diagnose von Malaria erforderlich ist, können dicke Filme etwas dünner als üblich gemacht, 1 Stunde trocknen gelassen und dann gefärbt werden.
2. NICHT BEHEBEN.
3. 50 min lang mit verdünntem Giemsa-Fleck (1:50, vol/vol) färben (Bei einer Verdünnung von 1:50 1 ml Giemsa-Stamm zu 50 ml gepuffertem Wasser in einem Coplin-Gefäß geben)
4. Waschen Sie den Film, indem Sie ihn 3 bis 5 min lang in gepuffertes Wasser legen.
5. In vertikaler Position an der Luft trocknen lassen und zuerst unter dem Mikroskop bei 40X und dann mit Ölimmersionslinse beobachten

Für Chlamydia trachomatis

Befolgen Sie die oben genannten Schritte, jedoch mit dem verdünnten Fleck von 1:40 Verdünnung (0,5 ml Giemsa-Stammlösung zu 19,5 ml gepuffertem Wasser geben) und lassen Sie den Fleck 90-120 Minuten einwirken.

BEOBACHTUNG:

Bei mikroskopischer Beobachtung werden Zellorganellen, Bakterien und Parasiten anhand ihrer Morphologie und Farbe unterschieden;