Isolierungs- und Identifizierungsmethoden von Rothia-Arten in Mundhöhlen

Rothia dentocariosa und Rothia mucilaginosa, grampositive Bakterien, sind Teil der normalen Flora in der menschlichen Mundhöhle und im Rachen. Darüber hinaus wird vorausgesagt, dass Rothia aeria, die zuerst aus Luftproben in der russischen Raumstation Mir isoliert wurde, ein oraler Bewohner ist. Immungeschwächte Patienten werden häufig von diesen Organismen infiziert, was zu verschiedenen systemischen Erkrankungen führt. Die Beteiligung dieser Organismen an oralen Infektionen hat wenig Aufmerksamkeit erregt, und ihre Verteilung in der Mundhöhle wurde aufgrund von Schwierigkeiten bei der genauen Identifizierung dieser Organismen nicht vollständig geklärt. Ein geeignetes selektives Medium für orale Rothia-Arten, einschließlich R. aeria, ist notwendig, um die wahre Prävalenz dieser Organismen in der Mundhöhle zu beurteilen. Um die Bakterienpopulation in der Mundhöhle zu untersuchen, wurde in dieser Studie ein neuartiges selektives Medium (ORSM) zur Isolierung oraler Rothia-Arten entwickelt. ORSM besteht aus Trypton, Natriumgluconat, Lab-Lemco-Pulver, Natriumfluorid, neutralem Acriflavin, Lincomycin, Colistin und Agar. Die durchschnittliche Wachstumswiederherstellung oraler Rothia-Arten auf ORSM betrug 96,7% im Vergleich zu BHI-Y-Agar. Das Wachstum anderer repräsentativer oraler Bakterien, d. h. der Gattungen Streptococcus, Actinomyces, Neisseria und Corynebacterium, wurde auf dem selektiven Medium bemerkenswert gehemmt. PCR-Primer wurden basierend auf Teilsequenzen der 16S-rDNA-Gene oraler Rothia-Spezies entwickelt. Diese Primer reagierten auf jeden Organismus und reagierten nicht auf andere nicht-orale Rothia-Arten oder repräsentative orale Bakterien. Diese Ergebnisse zeigten, dass diese Primer zur Identifizierung oraler Rothia-Arten nützlich sind. Ein einfaches Multiplex-PCR-Verfahren unter Verwendung dieser Primer war eine zuverlässige Methode zur Identifizierung oraler Rothia-Arten. Der Anteil oraler Rothia-Arten in Speichelproben von 20 Probanden wurde mittels Kulturmethode unter Verwendung von ORSM untersucht. Rothia dentocariosa, Rothia mucilaginosa und R. aeria entfielen 1,3%, 5,9% und 0.8% der gesamten kultivierbaren Bakterien befinden sich auf BHI-Y-Agar in den Mundhöhlen aller Probanden. Es wurde gezeigt, dass unter den oralen Rothia-Arten R. mucilaginosa in der Mundhöhle des Menschen am häufigsten vorkommt. Ein neuartiges selektives Medium, ORSM, war nützlich, um jede orale Rothia-Spezies zu isolieren.



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