Einige Mikroorganismen haben die Fähigkeit, Schwefel (Schwefel) enthaltende Verbindungen während des Metabolismus zu Schwefelwasserstoff zu reduzieren, was üblicherweise als Testmaßnahme für ihre Identifizierung in Laboratorien verwendet wird. Zahlreiche Methoden werden verwendet, um die H2S-Produktion durch Mikroorganismen nachzuweisen, die mit der Schwefelquelle und den Metallsalzen variieren, die verwendet werden, um die H2S-Bildung anzuzeigen. SIM ist empfindlicher beim Nachweis von H2S als TSI oder KIA, aufgrund seiner halbfesten Natur, seines Mangels an störenden Kohlenhydraten und der Verwendung von peptonisiertem Eisen als Indikator. Bleiacetatpapier ist jedoch 10-mal empfindlicher als andere Medien.
Um festzustellen, ob die Mikrobe schwefelhaltige Verbindungen zu Sulfiden reduziert, um Schwefelwasserstoffgas zu erzeugen.
Prinzip
Eine Eisenverbindung und eine Schwefelverbindung sind in dem Testmedium enthalten, um die Herstellung von Schwefelwasserstoffgas zu testen. Schwefelwasserstoff entsteht, wenn die Schwefelverbindung durch den Bakterienstamm reduziert wird. Dieser Test bestimmt somit, ob die Mikrobe schwefelhaltige Verbindungen während des Metabolisierungsprozesses zu Sulfiden reduziert. H2S wird von bestimmten Bakterien durch Reduktion schwefelhaltiger Aminosäuren wie Cystin, Methionin oder durch Reduktion anorganischer Schwefelverbindungen wie Thiosulfate, Sulfate oder Sulfite während des Proteinabbaus oder wenn die anaerobe Atmung die Elektronen zu Schwefel statt zu Sauerstoff transportiert, produziert. In beiden Fällen wird H2S erzeugt (Schwefelwasserstoffgas), das mit der Eisenverbindung reagiert, um den schwarzen Niederschlag von Eisensulfid zu bilden. Die schwarze Farbe dient als Indikator für das Vorhandensein von Schwefelwasserstoff. Der Nachweis von Schwefelwasserstoff (H2S) -Gas, das von einem Organismus produziert wird. wird hauptsächlich verwendet, um bei der Identifizierung dieses bestimmten Organismus zu helfen.
Medien:
Dieser Test kann unter Verwendung mehrerer Medien durchgeführt werden, darunter Triple Sugar Iron (TSI), Kligler’s Iron Agar (KIA), SIM-Medium und Bleiacetatpapier.
- Sulfit Indol Motility (SIM) Medium zum Nachweis von H2S
Dieses Medium enthält Eisenammoniumsulfat und Natriumthiosulfat, die dann zusammen als Indikatoren für die Herstellung von Schwefelwasserstoff dienen. Die Produktion von Schwefelwasserstoff kann nachgewiesen werden, wenn Eisensulfid, ein schwarzer Niederschlag, als Ergebnis der Reaktion von Eisenammoniumsulfat mit H2S-Gas entsteht.
Zusammensetzung:
Rindfleischextrakt 3,0 g Pepton 30,0 g Eisenammoniumsulfat 0,2 g Natriumthiosulfat 0,025 g Agar 3,0 g End-pH (bei 25 ° C) 7,3 ± 0.2 Destilliertes Wasser 1000ml
- Eisenagare zum Nachweis von H2S
Dieses Medium eignet sich zum Nachweis der H2S-Produktion durch Enterobakterien. H2S wird durch das im Medium enthaltene Eisencitrat nachgewiesen - Bleiacetat-Papiertest zum Nachweis von H2S
Wenn eine empfindliche Technik zum Nachweis der H2S-Produktion erforderlich ist, wird der Bleiacetat-Papiertest empfohlen.
Vorgehensweise
I. In Sulfit Indole motility (SIM) Medium
- Den Organismus mittels Stichinokulation in markiertes Röhrchen inokulieren.
- Inkubieren Sie die inokulierten Röhrchen 24-48 Stunden bei 37°C.
- Auf die Bildung von schwarzem Niederschlag auf dem Medium achten.
II. In Kligler-Eisen-Agar (KIA) und Dreifachzucker-Eisen-Agar (TSIA)
- Inokulieren Sie den Testorganismus in WASSER und inkubieren Sie ihn bei geeigneter Temperatur über Nacht.
- Auf Schwärzung des Mediums achten.
III. Bleiacetat-Papiertest
- Inokulieren Sie dem Testorganismus ein Röhrchen oder eine Flasche steriles Peptonwasser oder Nährbrühe.
- Führen Sie einen Bleiacetat-Papierstreifen in den Hals der Flasche oder des Röhrchens über dem Medium ein und stopfen Sie ihn gut ab.
- Inkubieren Sie das inokulierte Medium bei 35-37oC und untersuchen Sie es täglich auf eine Schwärzung des unteren Teils des Streifens.
Ergebnisse
- Positives Ergebnis:Schwärzung auf dem Medium
- Negatives Ergebnis:Keine Schwärzung auf dem Medium
Verwendet
- Es wird hauptsächlich zur Identifizierung von Mitgliedern der Familie Enterobacteriaceae und gelegentlich zur Unterscheidung anderer Bakterien wie Bacteroidessps und Brucella sps verwendet.
- Der Test hilft bei der Identifizierung und Differenzierung von Mitgliedern der Enterobacteriaceae (Enterika) von anderen Gram- Bazillen.
- Es ist besonders hilfreich bei der Identifizierung von Salmonellen-, Francisella- und Proteus-Arten.
- Die H2S-Produktion kann bei Organismen, die Saccharose verwenden und den Enzymmechanismus unterdrücken, der zur Produktion von H2S führt, an der TSI gehemmt werden.
- Bleiacetat ist für Bakterien toxisch und kann das Wachstum einiger Bakterien hemmen. Lassen Sie das Medium den Streifen nicht berühren.
- Es wird empfohlen, zur vollständigen Identifizierung biochemische, immunologische, molekulare oder massenspektrometrische Tests an Kolonien aus Reinkultur durchzuführen.
- Tille, PM, & Forbes, BA (2014). Bailey & Scotts diagnostische Mikrobiologie (Dreizehnte Auflage.). St. Louis, Missouri: Elsevier.
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- https://microbenotes.com/hydrogen-sulfide-h2s-production-test/
- www.microbiologyresearch.org/docserver/fulltext/micro/8/3/mic-8-3-397.pdf?expires=1543332392&id=id&accname=guest&checksum=C42277C712F05E5951241893FC8EC3F7
- spot.pcc.edu/~jvolpe/b/bi234/lab/differentialMedia/H2Sproduction.html
- https://senthilprabhu.blogspot.com/2017/10/hydrogen-sulphide-h2s-production-test.html
- https://jb.asm.org/content/jb/10/5/439.full.pdf
