Vergleich zwischen konventioneller Entkalkung und mikrowellenunterstützter Methode im Knochengewebe mit Mycetom

Abstract

Mycetom ist eine lebenslange granulomatöse Erkrankung von Unterhautgewebe und Knochen. Die Histopathologie ist eine fundierte indikative Methode, die auf der Annahme einer definitiven Diagnose eines Mycetoms beruht. Es erfordert eine effiziente Verarbeitung von Geweben einschließlich Knochenentkalkung. Der Entkalkungsprozess muss eine vollständige Entfernung von Kalzium sowie eine ordnungsgemäße Erhaltung der Färbefähigkeit von Gewebe und Mikroorganismen gewährleisten. Zielen. Vergleich der konventionellen Methode zur Entkalkung mit der Mikrowellenmethode unter Verwendung verschiedener Entkalkungslösungen. Verschiedene Eigenschaften wurden getestet, einschließlich der Geschwindigkeit der Entkalkung und der morphologischen und pilzlichen Konservierung in Knochengewebe, das von Mycetom betroffen ist. Materialien und Methoden. Drei Entkalkungslösungen wurden verwendet, um Kalzium aus 50 Knochengewebeproben zu entfernen, die mit Mycetom betroffen waren, einschließlich 10% neutralem gepuffertem EDTA (pH 7,4), 5% Salpetersäure und 5% Salzsäure. Konventionelle und Mikrowellenmethoden wurden verwendet. Hämatoxylin-Eosin (HE) -Färbung, Gridley-Färbung und Grocott-Hexamin-Silber-Färbung wurden verwendet, um die Knochen- und Pilzmorphologien zu bewerten. Suchergebnisse. Die Entkalkungszeit der herkömmlichen Methode gegenüber der Mikrowellenmethode mit 10% EDTA (pH 7,4) betrug 120 Stunden und 29 Stunden, während 5%ige Salzsäure und 5% ige Salpetersäure getrennt 8 Stunden und 3 Stunden benötigten. Außerdem ist 10% EDTA das beste Entkalkungsmittel für HE-Flecken und Pilzflecken. 5% Salzsäure und 5% Salpetersäure können zur Pilzfärbung verwendet werden. Schlussfolgerung. Die aktuelle Studie untersuchte die Auswirkungen verschiedener Entkalkungsmittel sowie zweier Entkalkungsverfahren auf den Erhalt der Knochenstruktur und die Pilzfärbung, um geeignete Protokolle für die Analyse des von einer Mycetominfektion betroffenen Knochengewebes zu entwickeln.

1. Einleitung

Das Myzetom ist eine lebenslange granulomatöse, allmählich schädliche epidemische Erkrankung der Haut und des Unterhautgewebes, die zu tieferen Strukturen wie Muskeln und Knochen fortschreiten und zu einer ausgedehnten Zerstörung, hauptsächlich der Füße, führen kann, die eine breite lokale chirurgische Exzision oder Amputation der Gliedmaßen erfordert . Das Myzetom wird durch das Triumvirat der Expansion, der Erschöpfung der Nebenhöhlen und der Existenz kolonialer Körner in den entzündlichen Exsudaten definiert . Die Infektion wird als Eumycetom (Pilzinfektion) oder Aktinomycetom (bakterielle Infektion) klassifiziert . Es ist im Großen und Ganzen ein Zustand tropischer und halbtropischer Regionen, insbesondere des Sudan . Madurella mycetomatis Getreidekörner sind riesig, von 0,5 bis 3 mm und erscheinen abgerundet, oval oder dreilappig. Sie bestehen aus kreuz und quer verlaufenden Hyphen, die in interstitiellem bräunlichem Zement verwurzelt sind und aus melaninähnlichem, schwarzbraunem Pigment bestehen . Die Histopathologie ist eine schnelle indikative Methode sowie ein vorteilhaftes Verfahren unter der Annahme einer endgültigen Diagnose der Mycetomerkrankung und enthält einen Bericht, der die morphologische Darstellung der Erreger beschreibt. Der Erreger konnte noch aus dem betroffenen Knochengewebe isoliert werden . Die Entkalkung ist ein grundlegender Schritt, der üblicherweise für die histopathologische Untersuchung von Knochen erreicht wird . Die Mineralien in den Knochen bestehen aus Kalzium und Phosphor, und unlösliche Salze machen mehr als sechzig Prozent des Knochengewebes aus . Diese Mineralien liefern Knochenhärte und sind die Ursache für Schwierigkeiten beim Gewebeschneiden mit rotierenden Mikrotomen . Solche Gewebe müssen behandelt werden, um Calciumphosphat durch ein Verfahren zu extrahieren, das als Entkalkung bekannt ist, indem das Gewebe ausreichend empfindlich gemacht wird, um durch das Mikrotom geschnitten zu werden. Die Entkalkung erfolgt durch Säuren, die lösliche Calciumsalze oder Chelatbildner bilden, die an Calciumionen binden. Die derzeitigen herkömmlichen Entkalkungsmethoden zeichnen sich durch mühsame Prozesse und das anhaltende Versagen der Färbereaktion von Geweben aus . Bei der herkömmlichen Entkalkungsmethode werden Knochengewebe bei Raumtemperatur in eine Entkalkungsflüssigkeit gegeben, wobei die Lösung in regelmäßigen Abständen bis zum Erreichen des Endpunkts gewechselt wird. Die Mikrowellenentkalkung ist eine innovative Technik im Vergleich zur herkömmlichen Methode . Dabei werden feste Gewebe für periodische Zeiträume mit üblichen Verschiebungen der Entkalkungsflüssigkeiten bis zum Erreichen des Endpunktes in einem Mikrowellenofen in die Entkalkungslösung gegeben. Mikrowellenstrahlung wurde durchgeführt, um den Entkalkungsprozess ungefähr von Tagen auf Stunden zu beschleunigen . Ziel der vorliegenden Studie war es, die konventionelle Methode der Entkalkung mit der modifizierten Mikrowellenmethode unter Verwendung verschiedener Entkalkungslösungen zu vergleichen. Verschiedene Eigenschaften wurden getestet, einschließlich der Geschwindigkeit der Entkalkung und der morphologischen und Pilzkonservierung im Knochengewebe, das von einer Madurella mycetomatis-Infektion betroffen ist.

2. Materialien und Methoden

Dies ist eine experimentelle deskriptive Studie, die darauf abzielt, das konventionelle zu vergleichen Entkalkungsverfahren mit mikrowellenverstärkter Entkalkung in Bezug auf die von Mycetominfektion betroffene Gewebemorphologie unter Verwendung von Hämatoxylin- und Eosin-, Gridley- und Grocott-Hexamin-Silber-Färbungen zur vollständigen Identifizierung der Madurella mycetomatis-Kausalorganismen. Diese Studie wurde am Mycetoma Research Center im Soba University Hospital und an der Fakultät für medizinische Laborwissenschaften der Universität Al Neelain durchgeführt. Von allen Patienten wurde eine schriftliche Einverständniserklärung eingeholt. Fünfzig amputierte Gliedmaßen, die von Mycetom betroffen waren, wurden gesammelt. Knochenbiopsien wurden mit einer geeigneten Säge in 5 mm dicke Stücke geschnitten und anschließend 48 Stunden in 10% iger Kochsalzlösung fixiert. Sie wurden 30 Minuten unter fließendem Leitungswasser gewaschen, um das Fixiermittel zu entfernen.

2.1. Konventionelles Entkalkungsverfahren

Drei Stücke von 5 mm dicken Abschnitten von Knochenbiopsien wurden in drei 250 ml Pyrex-Hockbecher getaucht, die jeweils 100 ml 5% ige wässrige Salzsäure (HCl), 5% ige wässrige Salpetersäure (HNO3) und 10% Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA) enthielten, die bei Raumtemperatur (durchschnittlich 28 ° C) platziert wurden, siehe Tabelle 1. Der Endpunkt der Entkalkung wurde für die beiden sauren Entkalker (5% HNO3 und 5% HCl) nach einem zweistündigen Intervall wie folgt mit der Calciumoxalatmethode überprüft: 5 ml der verwendeten Entkalkungsflüssigkeit wurden entnommen und in ein Reagenzglas gegeben, dann wurde Lackmuspapier zugegeben und Ammoniakhydroxid wurde tropfenweise zugegeben, bis sich das Lackmuspapier änderte, was darauf hinwies, dass die alkalische pH-Entkalkungsflüssigkeit klar war. Als die Entkalkungslösung trüb wurde, wurden 5 ml gesättigte Ammoniumoxalatlösung zugegeben, was auf das Vorhandensein von Kalzium im Knochengewebe hinweist, so dass die Entkalkungslösung durch eine neue Lösung ersetzt wurde, und der Vorgang wurde alle 30 Minuten bis zum Abschluss des Entkalkungsprozesses wiederholt. Für EDTA wurden physikalische Entkalkungstests verwendet, bei denen der Entkalkungsprozess als beendet angesehen wurde, wenn der Knochen leicht von einer Nadel durchdrungen wurde. Die durchschnittlichen Gesamtentkalkungszeiten betrugen 7 Stunden und 30 Minuten, 8 Stunden und 120 Stunden für 5% Salpetersäure, 5% HCl bzw. 10% EDTA.

2.2. Mikrowellenherdverfahren

Es wurde ein Hausmikrowellenherd (Midea Microwave 20L, 700W, Digital, EM720CFF) mit einer unbeweglichen rotierenden Platte verwendet. Ein Becherglas mit 100 ml destilliertem Wasser wurde 5 Sekunden vorgewärmt, um das Magnetron aufzuwärmen. Dieses wurde durch 100 ml frisches destilliertes Wasser ersetzt und bestrahlt, um die Temperatur bei etwa 41-43°C zu halten. Dies dauerte 15 Sekunden. Der Glasbecher wurde während der Bestrahlung an verschiedenen Stellen im Ofen zugeteilt, um die beste Position der Probe während der Mikrowellenentkalkung aufzulösen, da der verwendete Mikrowellenofen ein konstantes Timing, aber keine konstante Temperatur aufwies. Drei Stücke von 5 mm dicken Abschnitten von Knochenbiopsien wurden in 250 ml Pyrex-Hockbecher getaucht, die 100 ml 5% ige wässrige Salzsäure (HCl), 5% ige wässrige Salpetersäure (HNO3) und 10% EDTA enthielten. Dann wurden sie in den Mikrowellenofen überführt, und die Proben wurden für zehn Zyklen von jeweils zehn Sekunden (in 15-Minuten-Intervallen) für eine Gesamtzeit von 2-4 Stunden für saure Entkalker (5% HNO3 und 5% HCl) bestrahlt. Die Temperatur der Entkalkungslösung wurde bei etwa 41-43°C gehalten. Die Entkalkungslösung und der Entkalkungsendpunkt wurden überprüft und die Entkalkungslösung bis zum Abschluss der Entkalkung wiederholt gewechselt. Der Endpunkt der Entkalkung wurde mit Calciumoxalat und physikalischen Tests wie oben beschrieben überprüft. Die durchschnittlichen Gesamtentkalkungszeiten betrugen 3 Stunden und 45 Minuten, 5 Stunden und 30 Minuten und 29 Stunden und 4 Minuten für 5% Salpetersäure, 5% HCl bzw. 10% EDTA. Nach vollständiger Entkalkung wurden die Gewebe mit destilliertem Wasser gewaschen und zur Neutralisation der verwendeten Säure 5 Minuten in 0,3% ige Ammoniaklösung überführt.

2.3. Gewebeverarbeitung und Färbung

Die Proben wurden einer automatischen Gewebeverarbeitung unter Verwendung der folgenden Protokolle unterzogen: Die Knochenbiopsien wurden eine Stunde lang in 10% ige Kochsalzlösung gegeben. Dann, 50% alkohol eine stunde, 70% alkohol eine stunde, 90% alkohol eine stunde, gefolgt von 100% alkohol drei änderungen jeder zwei stunden jeder, xylol zwei änderungen, jeder für eine und halbe stunde, schließlich paraffin wachs zwei änderungen jeder für zwei stunden. Die Gewebe wurden in Paraffinblöcke eingebettet und mit einem Rotationsmikrotom auf eine Dicke von 5-6 µm geschnitten. Schnitte wurden mit Mayers Hämatoxylin gefärbt, wie von Mayer 1903 beschrieben, und der Gegenfleck in jedem war 1% Eosin (HE) . Gridleys Fleck wurde für Pilze verwendet (wie von Gridley 1953 beschrieben); nach Deparaffinierung und Rehydratation wurden Gewebeschnitte für 30 Minuten in 2% ige Chromsäure gegeben. Sie wurden dann gut mit Leitungswasser gewaschen, mit destilliertem Wasser gespült und dann für 20 Minuten in Schiffs Reagenz gegeben. Anschließend wurden sie 10 Minuten in fließendem Leitungswasser gewaschen und mit 70%igem Ethanol und anschließend mit 95% igem Ethanol gespült. Sie wurden eine Minute lang mit Metanilgelb gegengefärbt und gut mit destilliertem Wasser gespült. Anschließend wurden sie in Xylol entwässert und in Styrol, einem Weichmacher und Xylol (DPX) montiert. Anschließend wurden die Schnitte unter einem Mikroskop untersucht . Es wurde auch die Grocott-Hexamin-Silber-Methode für Pilze verwendet, wie sie 1955 von Grocott beschrieben wurde, bei der Abschnitte eine Stunde lang mit 4% iger wässriger Chromsäure oxidiert, einige Sekunden in Wasser gewaschen, eine Minute lang mit 1% Natriummetabisulfit behandelt, 3 Minuten lang in fließendem Leitungswasser gewaschen, gründlich in destilliertem Wasser gespült, 20 Minuten lang in vorgewärmter Arbeitssilberlösung in einem Wasserbad bei 60 ° C platziert, gut in destilliertem Wasser gespült, 5 Minuten lang mit fließendem Leitungswasser gewaschen und 15 Minuten lang in Arbeitslichtgrün gegengefärbt wurden sekunden, dehydriert und in Xylol gelöscht und montiert in DPX und schließlich unter einem Mikroskop untersucht.

2.4. Auswertung der Ergebnisse

Die Schnitte wurden von einem erfahrenen Histopathologen ausgewertet. Die Qualität des Entkalkungsverfahrens und des Färbeergebnisses wurden ebenfalls anhand der Faustregel bewertet und bewertet, und die Qualität der Entkalkung wurde anhand der folgenden Kriterien bewertet: der Zeitpunkt der Entkalkung, die morphologische Erhaltung der Gewebemorphologie und Madurella mycetomatis-Pilze von HE; Die Methenamin-Silber-Färbung von Gridley und Grocott wurde von 1 bis 4 bewertet (1: schlecht, 2: fair, 3: gut und 4: ausgezeichnet) .

2.5. Statistische Analyse

Die Datenanalyse wurde mit dem SPSS-Programm durchgeführt. Mittels Einweg-ANOVA wurde die Wirkung der drei Entkalkungslösungen auf die quantitative Analyse der Schnittqualität und Pilzkonservierung nachgewiesen. Der Kruskal-Wallis-Test wurde durchgeführt, um festzustellen, ob es einen signifikanten Unterschied zwischen den getesteten Lösungen für jeden der zusammen mit den beiden Experimenten bewerteten Parameter gab. Unterschiede mit wurden als statistisch signifikant interpretiert.

3. Ergebnisse

Fünfzig Fälle von Madurella mycetomatis mit schwarzem Korn wurden in die Studie aufgenommen. Die Füße waren in 48 Fällen (96%) die am stärksten betroffene anatomische Region und zwei Fälle (4, 0%) in der Hand. In Bezug auf die Entkalkungszeit in verschiedenen Experimenten dauerte unter den drei getesteten Lösungen die Entkalkung mit 10% EDTA (pH 7,4) für die herkömmliche Methode am längsten (bis zu 120 Stunden im Vergleich zu 29 Stunden mit der Mikrowelle) und die Verwendung einer Säureentkalkungslösung dauerte die kürzeste Zeit im Bereich von 8 Stunden bis 3 Stunden für verschiedene Entkalkungsmethoden. Die Qualität der Gewebemorphologie verschiedener Arten von Entkalkungslösung unter Verwendung der Entkalkungsmikrowellenmethode im Vergleich zur herkömmlichen Methode mit Mayers Hämatoxylin- und Eosin-Färbung hinsichtlich des Kern- und zytoplasmatischen Aussehens erzielte variable Ergebnisse. Auch 10% EDTA-entkalkter Knochen schien ein signifikant überlegenes Ergebnis zu haben (P-Wert mit Chi-Quadrat-Test: 0,023) im Vergleich zu 5% HNO3 und 5% HCl. Ausgezeichnete Färbung Bericht war 43 (86%). 32 (64%), 42 (84%) gegenüber 18 (36%) und 33 (66%) gegenüber 1 (2%). Die Grocott-Methenamin-Silber-Färbemethode wurde für den Nachweis des Madurella mycetomatis-Erregers bezüglich der Morphologie und Helligkeit von Pilzen verwendet, und Gewebeschnitte, die mit 10% EDTA, 5% HNO3 und 5% HCl mit konventionellen und Mikrowellenmethoden entkalkt wurden, zeigten eine signifikant bessere Pilzmorphologie (P-Wert mit Chi-Quadrat-Test: 0,001) wie folgt: 33 (66%) gegenüber 32 (64%), 33 (66%) gegenüber 39 (78%) und 22 (44%) gegenüber 31 (62%). Die andere Pilzfärbung, die für Madurella mycetomatis verwendet wurde, war eine Gridley-Färbung bezüglich Pilzmorphologie und Färbequalität von Knochen, die mit 10% EDTA, 5% HNO3 und 5% HCl unter Verwendung der konventionellen und Mikrowellenmethoden entkalkt wurden, die signifikant bessere Befunde zeigten (P-Wert mit Chi-Quadrat-Test: 0,003) wie folgt: 43 (86%) gegenüber 41 (82%), 32 (64%) gegenüber 34 (68%) und 23 (46%) gegenüber 35 (70%). Diese Ergebnisse sind in Tabelle 2 zusammengefasst. Abbildung 1 zeigt die Färbeergebnisse unter Verwendung verschiedener Entkalkungsmittel und -bedingungen.

Abbildung 1

Demonstration der Färbeergebnisse unter Verwendung verschiedener Entkalkungsmittel und -bedingungen.

4. Diskussion

Die histopathologische Identifizierung des Erregers von Madurella mycetomatis ist als Goldstandardverfahren gut etabliert; Hartgewebe und Knochen erfordern jedoch eine spezielle Entkalkung, um die Gewebestruktur und die Morphologie des Erregers zu erhalten. Die Erreger können mit Haematoxylin und Eosin (HE) und speziellen Flecken identifiziert werden, so dass der Knochen ein Standard-Entkalkungsprotokoll erfordert, das Gewebe, Erreger-Morphologie und Färbefähigkeit bewahrt. Knochenentkalkung ist eine mühsame Technik. Es dauert Wochen, und die Erhaltung der Gewebekonfiguration hängt von der Exzellenz und Geschwindigkeit des Entkalkungsverfahrens ab. Zur Beschleunigung des Entkalkungsprozesses wurde ein neuartiges Verfahren unter Verwendung eines Mikrowellenofens realisiert. Die Auswahl des Entkalkungsmittels und der Art und Weise wird im Wesentlichen durch den Ernst der Methode bestimmt , und die möglichen Verwendungen von Mikrowellenenergie in histologischen Techniken wurden erstmals 1970 von Mayers dokumentiert. Dieses System der nichtionisierenden Emissionsmethode soll den Entkalkungsprozess beschleunigen. Die molekulare Kinetik bewirkt dann die Erzeugung einer Energieänderung, die so lange anhält, bis die Strahlung aufhört . In dieser Studie wurden Entkalkungszeiten für die mikrowellenverstärkte Entkalkung und das konventionelle Entkalkungsverfahren angegeben waren 29 und 120 Stunden mit 10% EDTA (pH 7,4), drei Stunden und sieben Stunden mit 5% Salpetersäure und fünf bzw. acht Stunden mit 5% HCl. Es ist klar, dass die Mikrowellen-Entkalkungsmethode für Knochengewebe, das von einer Mycetominfektion betroffen ist, signifikant schneller war als die herkömmliche Methode. Außerdem hatte 5% Salpetersäure eine schnellere Entkalkungsfähigkeit, gefolgt von 5% Salzsäure und dann EDTA (pH 7,4) für beide Methoden. In: Pitol et al. verwendete einen Mikrowellenherd für zu Hause zur Entfernung von Kalzium aus dem Rattenknochen durch 8,5% ige EDTA-Lösung und zeigte eine Verringerung der Probezeit von 45 Tagen im herkömmlichen Verfahren auf 48 Stunden im mikrowellenunterstützten Verfahren. In dieser Arbeit dauerte die 10% ige EDTA-Lösung 120 Stunden in der konventionellen Methode und 29 Stunden mit Mikrowellen, um eine vollständige Entkalkung des von einer Mycetominfektion betroffenen Knochengewebes zu erreichen. Die Konzentration von EDTA in unserem Experiment war mehr als Pitol et al.Studie. Neben Größenunterschieden, Dicke, und Arten des Knochens, Dies können mögliche Erklärungen für die Zunahme der Entkalkungszeit in Pitol et al.’s Studie, die in unserer Einstellung reduziert wurden. Darüber hinaus dauerte die Entkalkung des von einer Mycetominfektion betroffenen Knochens mit der herkömmlichen Methode mit 5% iger Salpetersäure sieben Stunden, während die Mikrowellenmethode drei Stunden dauerte. Vergleichbare Ergebnisse wurden von Balaton und Loget erzielt . Darüber hinaus wurden in dieser Studie die Entkalkungszeiten aus anderen Studien reduziert. Die für konventionelle und Mikrowellenmethoden angegebenen Entkalkungszeiten reichten von einem Tag und vier Stunden bis zu 5 Tagen und gelten als niedrig im Vergleich zu anderen Studien am Nagetierknochen, die Zeiten zwischen 2 und 7 Tagen mit sauren Entkalkungslösungen bzw. 10% EDTA (pH 7,4) angegeben haben . Shibata und seine Gruppe berichteten über fast ähnliche Entkalkungszeiten, die von 1 Tag bis 7 Tagen mit 10% HCl, 10% Salpetersäure und 10% EDTA variierten. Sie verwendeten jedoch saure Entkalker mit höheren Konzentrationen . Uma et al. bewertete die Auswirkungen von vier verschiedenen Entkalkungsflüssigkeiten unter Verwendung der Mikrowellenentkalkung im Rattenknochen und berichtete über 1 bis 1,5 Tage für 5% Salpetersäure und 7% HCl / 2% EDTA. 10% EDTA dauerte jedoch je nach Knochentyp 14 bis 26 Tage . In diesen Studien variierten und unterschieden sich Knochentyp, Art und Größe von den hier analysierten. Das Entkalkungsverfahren war ein wesentlicher Grund für die Überlegenheit des Gewebeschnitts und die Präzision der Färbung. In: Philipp et al. (2019) beschrieben, dass die Entkalkungsmethode signifikante morphologische Veränderungen verursacht, die die Proteinstruktur verändern und die Färbefähigkeit des Gewebes beeinflussen . In unserer Studie wurde der Knochen mit 5% Salpetersäure mit der routinemäßigen manuellen Methode behandelt, und es gab Schwellungen im Weichgewebe und Verlust von Kern- und Pilzfärbungen im Vergleich zur mikrowellenunterstützten Entkalkung. Säureentkalkungsmittel stören in der Regel die Knochen- und Weichteilkonstanz. Diese Spezialeffekte in 5% iger Salpetersäure sind auf den Zeitraum und den Säuregehalt der Lösung zurückzuführen. Daher führt eine schnellere Entkalkung zu größeren Verletzungen und größeren Auswirkungen bei H & E und Pilzspezialfärbungen. Mehrere Pilze können mit einem histologischen Schnitt unter Verwendung histochemischer Färbungen wie Grocotts Methenamin-Silber (GMS) -Färbung und / oder Gridley (GS) -Färbung nachgewiesen werden . Einige Pilze lassen sich anhand morphologischer Strukturen im Gewebe exakt nachweisen; die Erkennungswirksamkeit neigte jedoch nach längerer Fixierung und Entkalkung mit herkömmlichen Methoden dazu, abzunehmen. In dieser Studie ergab die mikrowellenunterstützte Entkalkung eine überlegene Färbung im Vergleich zur herkömmlichen Methode für die Morphologie unter Verwendung von H & E und Pilzspezialfärbung, wobei 10% EDTA die Lösung war, die die Gewebestrukturen und die Pilzfärbefähigkeit am besten bewahrte, obwohl die Entkalkung lange dauerte.

5. Schlussfolgerung und Empfehlungen

Die durch die Verwendung eines Mikrowellenofens verbesserte Entkalkung ist eine neue Technik zur Entkalkung. Diese Technik wurde in Knochengewebe untersucht, das von einer Madurella mycetomatis-Infektion betroffen war, wobei 10% EDTA, 5% Salpetersäure und 5% Salzsäure als Entkalkungsflüssigkeiten verwendet wurden. Dies wurde mit der konventionellen Entkalkung bei Raumtemperatur verglichen, um die Geschwindigkeit der Entkalkung und die Gewebemorphologie unter Verwendung von Mayers Hämatoxylin- und Eosin-Färbung für die Knochenstruktur und Grocott- und Gridley-Färbungen für die Pilzmorphologie zu bestimmen. Sowohl in der Zellmorphologie als auch bei Pilzsporen und -hyphen mit verminderter Pilzhelligkeit bei Raumtemperatur wurden gegenüber der konventionellen Methode bessere Ergebnisse erzielt. Dieser Befund kann helfen, geeignete Protokolle für die Analyse von Knochengewebe zu entwickeln, das von einer Mycetominfektion betroffen ist.

6. Einschränkungen der vorliegenden Studie

Eine größere Stichprobengröße hätte schlüssigere Ergebnisse geliefert. Auch sind die Zeiten für die Entkalkung wahrscheinlich unterschiedlich, wenn andere Knochengewichte und Knochenproben als Hände verwendet werden, da die Entkalkungszeit von der Größe und strukturellen Dichte des Hartgewebes abhängt. Da wir schließlich einen Haushaltsmikrowellenherd verwendet haben, waren unsere Temperaturaufzeichnungen möglicherweise nur annähernd.

Datenverfügbarkeit

Die in der aktuellen Studie generierten Datensätze sind auf Anfrage beim korrespondierenden Autor erhältlich.

Ethische Zulassung

Diese Studie wurde vom Institutional Review Board der Fakultät für medizinische Laborwissenschaften der Universität Al Neelain genehmigt.

Interessenkonflikte

Der Autor erklärt, dass keine Interessenkonflikte bestehen.

Danksagung

Der Autor möchte den Mitarbeitern des Mycetoma Research Centre der Universität Khartum, Khartum, Sudan, und den Professoren Ahmed Hassan Fahal und Ahmed Mohammed El Hassan, dem emeritierten Professor für Pathologie, für ihre Unterstützung seinen aufrichtigen Dank aussprechen.

Ergänzende Materialien

Die Materialien und Reagenzien, die zur Unterstützung der Ergebnisse dieser Studie verwendet wurden, sind in den ergänzenden Informationen enthalten. (Ergänzende Materialien)