Vitamin-D- und Omega-3-Fettsäurepräparate bei Kindern mit Autismus-Spektrum-Störung: ein Studienprotokoll für eine faktorielle randomisierte, doppelblinde, placebokontrollierte Studie

Diese Studie besteht aus zwei Phasen: Stufe 1 umfasst Rekrutierung und Screening, während Stufe 2 eine randomisierte, doppelblinde, placebokontrollierte Vitamin-D- und n-3-LCPUFA-Studie -kontrollierte Studie (Abb. 1). Die Dauer der Intervention beträgt 12 Monate.

Schematische Darstellung des Studiendesigns. 1blutbiomarker: 25-Hydroxyvitamin D (25 (OH) D), Erythrozytenfettsäuren, Kalzium, Albumin, Eisenstudien, Vitamin B12, Folsäure, Vollblutbild und Vitamin A. Fragebögen: Soziodemografie, Krankengeschichte, Ess- / Essensverhalten und Ernährungstagebuch. 2fragen: soziokommunikatives Funktionieren, sensorische Probleme und abweichendes Verhalten (primäre Ergebnisse); gastrointestinale Symptome (sekundäres Ergebnis), Sonneneinstrahlung und Hautfarbe. Anthropometrie: Gewicht und Größe. 3blutbiomarker: 25 (OH) D, RBC-Fettsäuren, Calcium und Albumin. Fragebögen: soziokommunikatives Funktionieren, sensorische Probleme, abweichendes Verhalten (primäre Ergebnisse) und Ess- / Essensverhalten und Ernährungsqualität. Anthropometrie: Gewicht und Größe. 4blutbiomarker: 25 (OH) D, Calcium und Albumin. * Gastrointestinale Symptome (sekundäres Ergebnis) und Medikation / Verwendung von Nahrungsergänzungsmitteln / Inzidenz unerwünschter Ereignisse / Die Einhaltung von Nahrungsergänzungsmitteln wird während des gesamten Studienzeitraums überwacht

Stufe 1 bietet die Möglichkeit für eine umfassende Beschreibung der Studienpopulation in Bezug auf Ernährungszustand (biochemische Indizes und Nahrungsaufnahme), Demografie und Krankengeschichte. Stufe 2 zeigt die Wirksamkeit der Supplementierung mit Vitamin D, n-3-LCPUFAs oder beidem zur Verringerung der ASD-Symptome.

Teilnehmer

Diese Studie ist eine Zusammenarbeit zwischen der Massey University und dem Waitemata District Health Board (WDHB), Neuseeland. Betreuer von Kindern, die die Kriterien für die Studie erfüllen, werden in erster Linie von den WDHB-Entwicklungskoordinatoren angesprochen.

Wir berechneten, dass 42 Teilnehmer (mindestens 34 Teilnehmer und unter Berücksichtigung einer potenziellen Abbruchrate von 20%) für jeden Arm der Studie erforderlich wären, um einen klinisch signifikanten Unterschied bei 80% Leistung und 5% statistischer Signifikanz nachzuweisen. Die Leistungsberechnungen basierten auf einem Unterschied von 17 Einheiten zwischen ergänzten Gruppen und Placebo in der Veränderung vom Ausgangswert zum Endpunkt auf der Social Responsiveness Scale (SRS) -Gesamtpunktzahl , auf einer mittleren SRS und einer Standardabweichung von 105 bzw. 24,7 Einheiten bei unbehandelten Kindern mit ASD (aus unserer Pilotstudie 2015, unveröffentlicht). Die Stichprobengröße wurde unter Verwendung der folgenden Formel berechnet :

wobei N die pro Gruppe erforderliche Stichprobengröße ist, α die SD ist, K die Konstante ist (7.9 bezeichnet 80% Leistung und 5% Signifikanz) und (μ2 − μ1) ist der Unterschied in der SRS-Gesamtpunktzahl zwischen den Gruppen.

Um sicherzustellen, dass die Studie ausreichend unterstützt wird, a verblindete Zwischenanalyse bei > 50% der ursprünglich geplanten Einschreibung wird von einem unabhängigen Dritten durchgeführt, um die Varianz für die potenzielle Stichprobengrößenerhöhung abzuschätzen.

Einschluss- und Ausschlusskriterien

Kinder sind für diese Studie berechtigt, wenn sie zwischen 2 Jahren alt sind.5 und 8 Jahre, haben eine medizinische Diagnose von ASD von beiden bestätigt ein Entwicklungspädiater gemäß den Kriterien des Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders, Version five (DSM-5) , und Auftreten der Symptome nach 18 Monaten. Die untere Grenze von 2,5 Jahren wurde auf der Grundlage der Alterskriterien der psychologischen Bewertungsinstrumente gewählt, und die obere Grenze von 8 Jahren wurde gewählt, um den störenden Effekt von Verhaltensänderungen im Zusammenhang mit dem Pubertätsstadium zu vermeiden. Die Englischkenntnisse der Pflegekraft sind erforderlich (aufgrund der Art der Ergebnisbewertungsinstrumente). Freiwillige sind ausgeschlossen, wenn bei ihnen eine Entwicklungsverzögerung seit der Geburt diagnostiziert wurde.

Zusätzliche Einschlusskriterien für die Studie sind: Leberfunktion im Normalbereich (Albumin 34-48 g / l) und Serum 25 (OH) D < 75 + 10 nmol / L, wenn sie im Winter in die Studie aufgenommen werden, und <105 nmol / L + 10 nmol / L, wenn sie im Sommer in die Studie aufgenommen werden. Eine 10-nmol /L-Variation wurde wegen der möglichen Assay-Variabilität gewählt . Wir haben zwei verschiedene Grenzwerte für den Ausschluss angewendet, da es in Neuseeland eine große saisonale Variation der Serum-25 (OH) D-Konzentrationen im Bereich von 30 nmol / l bis 44 nmol / l gibt .

Die Studie findet in Auckland, Neuseeland, statt. Nicht nüchterne Blutproben werden an der North Shore oder Waitakere Krankenhäuser in Auckland, Neuseeland. Fragebögen und Anthropometrie werden an der Massey University in Auckland, Neuseeland, durchgeführt. Auckland ist Neuseelands größte Stadt mit knapp über einer Million Einwohnern. Es wurde geschätzt, dass ungefähr 13,000 (32.5%) Personen mit ASD in der Region Greater Auckland leben .

Stufe 1 – Screening

Screening und Rekrutierung (Stufe 1 der Studie) wird über einen Zeitraum von 24 Monaten stattfinden, der im Januar 2015 begann. Kinder, die die anfänglichen Einschlusskriterien erfüllen, werden einer Blutentnahme unterzogen und auf Ernährungsmängel untersucht. Siehe Tabellen 1 und 2 für Ergebnismessungen, Testmethoden und Zeitplan für Einschreibung, Intervention und Bewertung.

Vorbereitung vor der Intervention

Vor der Randomisierung und Aufnahme in die Studie werden Vitamin-D-, Eisen- und Vitamin-B12-Mängel behandelt. In Tabelle 3 finden Sie eine Liste der Ernährungsmängel und der in dieser Studie angewandten Managementstrategien.

Stufe 2 – Vitamin D- und n-3-LCPUFA-Intervention

Die Intervention besteht aus 2000 IE Vitamin D3 pro Tag, 722 mg DHA pro Tag, 2000 IE Vitamin D3 plus 722 mg DHA pro Tag oder Placebo in Form von vier oralen Kapseln. Die Behandlungsmaterialien werden in 750-mg-Gelkapseln mit einer Abreißdüse geliefert, die von Douglas Nutrition Ltd. hergestellt und geliefert wird., Auckland, Neuseeland. Die Studienkapseln, Vitamin D, n-3 LCPUFAs und Placebo sind identisch im Aussehen und alle sind geschmacks- und farblos. Das Kind muss den Inhalt von vier Kapseln pro Tag zu sich nehmen, die in die bevorzugte Nahrung oder durch orale Verabreichung per Spritze gemischt werden. Siehe Tabelle 4 für die tägliche Gesamtaufnahme und den Inhalt jeder Kapsel. Während des gesamten Studienzeitraums dürfen Kinder jede Therapie oder Medikation gegen Autismus sowie jede Ergänzung erhalten, sofern diese kein Vitamin D oder Omega-3 enthält.

Die Supplementierung mit 2000 IE Vitamin D3 hat sich bei Säuglingen als sichere Dosis erwiesen , und die französische Gesellschaft für Pädiatrie empfiehlt 1000 bis 1200 IE pro Tag bei gestillten Säuglingen . Die Körpermasse von 2,5-8-Jährigen in unserer Studie wird erheblich größer sein als die von Säuglingen, was das Risiko unerwünschter Ereignisse weiter verringern sollte. Darüber hinaus sind 2000 IE pro Tag weniger als die sichere Obergrenze von 2500 und 3000 IE / Tag, die von der IOM für die Altersgruppen von 1-3 bzw. 4-8 Jahren vorgeschlagen wurde .

Die DHA-Dosis von 722 mg / Tag ist physiologisch relevant und über die Nahrung erreichbar (entspricht etwa drei Portionen fettem Fisch pro Woche) und ist vergleichbar mit den Dosen, die in anderen Studien bei Kindern verwendet wurden, in denen die Auswirkungen von n-3-LCPUFAs auf Verhalten und Lernen untersucht wurden . Bei Kindern mit einer Dosis von 600 mg DHA/ Tag wurden keine Nebenwirkungen berichtet .

Randomisierung, Verblindung und verdeckte Zuordnung

Kinder werden nach dem Zufallsprinzip einer von vier Gruppen zugeordnet, die nach Alter und Schweregrad der ASD geschichtet wurden. Die Randomisierung der Aktiv- / Placebo-Kapseln, die randomisierte Sequenzliste und die Gruppenzuweisung werden vollständig verborgen von den Forschern, Kindern und Betreuern für die gesamte Studie, einschließlich der Datenanalyse. Ein Dritter, der an keinem Aspekt der Studie beteiligt ist, generiert ein zufälliges Blockdesign in Blöcken von vier und acht mit Randomization.com (http://www.randomization.com/). Der Dritte weist einem Kind einen Behandlungscode zu, sobald seine Berechtigung für die Intervention bestätigt ist und die Zustimmung der Pflegekraft eingegangen ist. In einer Notfallsituation, in der eine Unterbrechung der Studienblindheit erforderlich ist, ist geplant, dass der Principal Investigator den für die Randomisierung verantwortlichen Dritten kontaktiert, um die Behandlungszuweisung für einen bestimmten Teilnehmer offenzulegen.

Datenerfassung

Teilnehmer (Betreuer und Kinder) besuchen die Human Nutrition Research Unit (HNRU) an der Massey University bei zwei Gelegenheiten: Baseline und 12 Monate. Nach der Rekrutierung in Stadium 2 und vor der Verabreichung einer 4-monatigen Supplementversorgung füllen die Betreuer einige Fragebögen zu den Kernsymptomen von ASD (soziokommunikative Funktion und sensorische Probleme) und aus abweichendes Verhalten als primäre Endpunktmaße der Studie und zu gastrointestinalen Symptomen als sekundäre Endpunktmaße. Sobald die Intervention abgeschlossen ist (12 Monate), Baseline-Bewertungen der Kernsymptome von ASD und aberrantes Verhalten, das von den Betreuern abgeschlossen wurde, wird wiederholt. Die Pflegekräfte füllen auch wöchentliche gastrointestinale Symptomtagebücher über den Studienzeitraum aus.

Weitere Informationen werden gesammelt, um die Merkmale der Studienpopulation zu beschreiben zu Studienbeginn. Diese Informationen umfassen das Ess- / Essensverhalten, Ernährungstagebücher, Sonneneinstrahlung, Hautfarbe und Anthropometrie (Gewicht und Größe). Beim letzten Besuch wird die Basisbewertung des Essens / Essensverhaltens wiederholt und das Gewicht / die Größe der Kinder wird gemessen. Siehe Tabelle 1 für Ergebnismessungen und Testmethoden.

Blutentnahme und Analyse

Bei Kindern werden dreimal Blutproben entnommen, zu Studienbeginn (Stadium 1 – Screening), 6 Monate (Sicherheitsmaßnahmen) und 12 Monate (Endpunkt). Siehe Tabelle 1 für ernährungsphysiologische Biomarker und Testmethoden. Die nicht nüchternen Blutproben werden unter Aufsicht von pädiatrischem Personal entnommen und verarbeitet North Shore oder Waitakere Krankenhäuser des WDHB Laboratory Service. Ernährungsbiomarker werden aus einer venösen Blutprobe analysiert. Dazu gehören die folgenden: 25 (OH) D, Erythrozytenfettsäuren, Kalzium, Albumin, Eisenstudien, Vitamin B12 und Folsäure, Vollblutbild und Vitamin A. Mit Ausnahme von Erythrozytenfettsäuren und Vitamin A werden alle Biomarker im North Shore Hospital analysiert. RBC-Fettsäuren werden an der University of Wollongong, NSW, Australien, und Vitamin A in einem Labor an der Massey University, Auckland, Neuseeland, analysiert.

Fragebögen

Die primären Endpunktmaße sind psychologische Bewertungen der Kernsymptome von ASD und gleichzeitig auftretende Problemverhalten, die in Tabelle 1 aufgeführt sind. Das sekundäre Ergebnismaß ist die Beurteilung von Magen-Darm-Problemen. Allen Pflegekräften werden standardisierte Anweisungen zum Ausfüllen der Fragebögen während ihres Besuchs in der HNRU gegeben. Bevor der Teilnehmer abreist, überprüfen die HNRU-Forscher alle Antworten auf Vollständigkeit.

Social Responsiveness Scale ™, Second Edition (SRS-2): Es werden die SRS-2–Versionen für die Altersgruppen 2,5-4,5 und 4,5 bis 18 Jahre verwendet. SRS-2 identifiziert soziale Beeinträchtigungen im Zusammenhang mit ASDs und quantifiziert deren Schweregrad in den Bereichen soziales Bewusstsein, soziale Informationsverarbeitung, gegenseitige soziale Kommunikation, soziale Angst / Vermeidung und stereotypes Verhalten / eingeschränkte Interessen . Die klinische Validität und Sensitivität von SRS-2 wurde in Populationen mit ASD bestimmt .

Sensory Processing Measures™ (SPM) : Es werden die SPM-Versionen für die Altersgruppen 2-5 und 5-12 Jahre verwendet. SPM bewertet sensorische Verarbeitung, Planung und Ideen (Praxis) und soziale Teilhabe bei Kindern. Die Skalen messen soziale Teilhabe, Sehen, Hören, Berühren, Körperbewusstsein (Propriozeption), Gleichgewicht und Bewegung (vestibuläre Funktion) sowie Planung und Ideen (Praxis) . Dieses Tool wurde standardisiert, validiert und bei Kindern mit ASD angewendet .

Checkliste Abweichendes Verhalten (ABC) : Das ABC misst die Vielfalt der Verhaltensprobleme, nämlich Reizbarkeit, sozialer Rückzug, stereotypes Verhalten, Hyperaktivität und unangemessene Sprache . Es wurde bei Kindern mit ASD validiert und wurde häufig in Behandlungsergebnisstudien zu ASD eingesetzt .

Fragebogen zu gastrointestinalen Symptomen: Der Fragebogen zu gastrointestinalen Symptomen wurde speziell für diese Studie entwickelt und enthält gastrointestinale Anzeichen und Symptome am häufigsten bei Kindern mit ASD berichtet . Betreuer der Studienteilnehmer erhalten wöchentliche Online-Tagebücher und werden gebeten, aufzuzeichnen, ob das Kind Verstopfung hatte, Durchfall, Blähungen, Bauchschmerzen, Erbrechen / Übelkeit, Blähungen, unerklärliche Reizbarkeit am Tag oder / und unerklärliches nächtliches Erwachen in der vergangenen Woche und wenn ja, wie oft diese aufgetreten sind. Der Fragebogen zu gastrointestinalen Symptomen wurde nicht validiert, enthält jedoch Fragen zu gastrointestinalen Symptomen, über die in ASD-Populationen am häufigsten berichtet wird, oder Verhaltensweisen, die eine Folge von gastrointestinalen Symptomen sein könnten. Uns ist kein validiertes Instrument zur Beurteilung der gastrointestinalen Symptome bei autistischen Kindern bekannt, und schon gar nicht in Neuseeland.

Ernährungsindex der Ernährung von Kindern (DICE): das DICE ist ein einfaches Tool zur Bewertung der Ernährungsqualität, das vom Forschungsteam basierend auf den Richtlinien des neuseeländischen Ministeriums für gesunde Ernährung und Ernährung für gesunde Kinder und Jugendliche entwickelt wurde . Dieses Tool wurde in einer Kohorte von Neuseeland validiert gesunde Kinder im Alter von 2 bis 8 Jahren (unveröffentlicht) und wird in ASD-Kindern in dieser Studie gegen das geschätzte 4-Tage-Ernährungstagebuch und biochemische Marker validiert.

Bewertungsskala für verhaltensbezogene pädiatrische Ernährung (BPFAS): das BPFAS ist ein einfaches Bewertungsinstrument, das das Essensverhalten eines Kindes und die Einstellungen und Verhaltensweisen der Eltern misst. Es handelt sich um einen Fragebogen auf einer Skala von 35 Punkten, der 25 Fragen auf der Likert-Skala (5 Punkte) zum Verhalten von Kindern und 10 dichotome Fragen zu Einstellungen und Verhalten von Eltern enthält. Cut-off-Scores für die BPFAS wurden kürzlich festgelegt . Der BPFAS ist der zuverlässigste von Eltern verabreichte Fütterungsfragebogen mit guter interner Validität und Test-Retest-Zuverlässigkeit .

Viertägiges geschätztes Ernährungstagebuch: die Daten zur Nahrungsaufnahme werden durch ein geschätztes 4-tägiges Ernährungstagebuch einschließlich eines Wochenendtages gesammelt. Anweisungen zum genauen Ausfüllen des Ernährungstagebuchs finden Sie im Ernährungstagebuch. Die Teilnehmer erhalten einen kostenlosen, voradressierten Umschlag für die Rücksendung der Broschüre. Die durchschnittliche Makro- und Mikronährstoffaufnahme wird über vier Berichtstage mit bewertet FoodWorks Professional Edition 7 (Xryis Software, Brisbane, QLD, Australien, 2012).

In der vorliegenden Studie wurde ein 4-tägiges Ernährungstagebuch aufgrund der hohen Belastung der Befragten und der zeitaufwändigen Eigenschaften längerer Ernährungstagebücher wie eines 7-tägigen Ernährungstagebuchs ausgewählt. Aufgrund der hohen Variation der Nährstoffaufnahme innerhalb der Person wird empfohlen, die Nahrungsaufnahme über einen längeren Zeitraum aufzuzeichnen, um eine hochgenaue Schätzung der Aufnahme zu erhalten. Wenn jedoch ein 4-tägiges Ernährungstagebuch zufällig verschiedene Tage abdeckt, kann es genaue Schätzungen der Nahrungsaufnahme liefern .

Informationen zur Sonnenexposition und Hautfarbe, Nahrungsergänzungsmittel und spezielle Ernährungsregime, die befolgt werden, werden durch Fragebögen gesammelt, die speziell für den Zweck der aktuellen Studie entwickelt wurden. Der Fragebogen zur Sonnenexposition enthält eine Frage zu den Überzeugungen und Einstellungen der Pflegekraft zur Sonnenexposition sowie Fragen zu Land und Stadt des Wohnsitzes in der Schwangerschaft, Geburtszeit und Empfindlichkeit des Kindes gegenüber Temperatur- und Lichtextremen.

Einhaltung der Medikation / Einhaltung des Studienprotokolls

Betreuer erhalten wöchentlich E-Mails mit einem Link zum Online-Tagebuch zu Compliance- und Magen-Darm-Problemen sowie einem Tipp / einer Tatsache zu Autismus und Ernährung Angelegenheiten. Die Betreuer werden nach 1, 3, 6 und 9 Monaten telefonisch kontaktiert Zwecke der Moral und zur Förderung der Compliance. Pflegekräfte erhalten auch vierteljährliche Test-Newsletter. Die Newsletter enthalten ein Update zur Studie, allgemeine Themen zu ASD, die Erfahrung einer Pflegekraft in Bezug auf dieses Thema und Unterhaltungen / Wettbewerbe für die Studienkinder.

Alle 4 Monate werden neue Interventionsmaterialien an die Teilnehmer gesendet, und die Pflegekräfte werden gebeten, die Flaschen aus den vorherigen Monaten mit unbenutzten Kapseln beiseite zu legen, um sie bei ihrem nächsten Besuch (6 oder 12 Monate) zurückzugeben. Die Einhaltung der Behandlung wird analysiert, indem die verbleibenden Ergänzungen jedes Teilnehmers gezählt werden, sobald sie die Intervention abgeschlossen haben.

Unerwünschte Ereignisse

Alle Teilnehmer werden nach 6 Monaten zu einem Bluttest zurückgerufen, um auf Hypervitaminose D (Serum 25 (OH) D > 225 nmol / l) und Hyperkalzämie (Serum Ca > 2,7 mmol / l). Die Ergebnisse werden von einem Dritten überprüft, der nicht blind ist (aber keine Beteiligung an der Analyse der Ergebnisse hat). Der Dritte identifiziert die Ergebnisse des Bluttests und sendet sie zur Überprüfung und Empfehlung an den Studienpädiater und leitenden Prüfer, wenn der Serum-25 (OH) D- oder Calciumspiegel des Kindes über der sicheren Obergrenze liegt. Wenn die 25 (OH) D-Konzentrationen 225 nmol / l erreichen oder sich diesem nähern oder wenn eine Hyperkalzämie vorliegt, wird die Dosisverabreichung angepasst.

Compliance und gastrointestinale Symptomtagebücher werden wöchentlich überwacht und alle Nebenwirkungen werden im Protokoll über unerwünschte Ereignisse aufgezeichnet, um den allgemeinen Gesundheitszustand und die Verhaltensreaktionen des Kindes zu verfolgen. Im Falle unerwünschter Ereignisse wird die Gesundheit des Kindes drei bis vier Wochen hintereinander genauer überwacht Wochen, und wenn das unerwünschte Ereignis anhält, werden die Berichte zur weiteren Untersuchung an den Studienpädiater und leitenden Prüfer überwiesen.

Verbreitung der Ergebnisse

Nach Erhalt und Analyse des Ernährungstagebuchs und Abschluss der biochemischen Assays beim Screening erhält jeder Teilnehmer ein Feedback-Formular. Anthropometrische Messungen und Blutergebnisse (Eisenstudien, Vitamin B12, Folsäure und Vollblutbild) werden ebenfalls einbezogen. Sobald die Rekrutierung in die Studie abgeschlossen ist, erhalten Teilnehmer, die nicht an der Studie teilgenommen haben, eine Benachrichtigung über ihre Vitamin-D- und Erythrozyten-Fettsäurespiegel.

Nach Abschluss der Studie werden die Teilnehmer über ihren Vitamin-D- und ERYTHROZYTEN-Fettsäurestatus zu Beginn und am Ende informiert und ob sie die aktive oder Placebo-Dosis einnahmen. Sie erhalten auch eine Zusammenfassung der psychologischen Bewertungsergebnisse von SRS-2 und SPM.

Teilnehmer und andere Interessengruppen (z. B. Angehörige der Gesundheitsberufe, Distriktgesundheitsbehörden, Organisationen der primären Gesundheit, ASD-Selbsthilfegruppen) erhalten Zugang zu den Ergebnissen der Studie. Die Ergebnisse werden auf nationalen und internationalen wissenschaftlichen Konferenzen vorgestellt, zur Veröffentlichung in Fachzeitschriften vorbereitet und in den Medien verbreitet.

Datenverarbeitung und statistische Analyse

Name und Adresse werden in Microsoft Excel gepflegt. Kontrollkästchen zeichnen den Fortschritt eines Teilnehmers durch die Studie auf. Alle anderen Daten werden in eine einzige Microsoft Excel-Tabelle eingegeben, in der die Teilnehmer nur durch ihre eindeutige Betreffnummer identifiziert werden. Die Bewertung der Fragebögen wird vom Psychologen und vom Forscher überprüft. Alle Beiträge werden von einem anderen Mitglied des Forschungsteams überprüft. Alle Dokumente werden unter vertraulichen Bedingungen sicher aufbewahrt und 5 Jahre lang archiviert.

Die statistische Analyse wird mit IBM SPSS Version 21.0 (IBM Corp; veröffentlicht 2012. IBM SPSS Statistics für Windows, Version 21.0. Armonk, NY, USA). Vor Beginn der statistischen Analyse werden die Daten bereinigt und auf Codierungsfehler überprüft. Die Daten werden stichprobenartig auf Richtigkeit und Vollständigkeit plausibilisiert und mit Quelldaten abgeglichen. Die Variablen werden mit dem Kolmogorov-Smirnov-Test auf Normalität getestet, der Shapiro-Wilk-Test und Normalitätsdiagramme. Nicht normalverteilte Daten werden durch logarithmische Transformationen in ungefähre Normalverteilungen umgewandelt. Die Daten werden angemessen als Mittelwert (Standardabweichung) für normalverteilte Daten gemeldet; transformierte Daten werden von der Zusammenfassung zurücktransformiert Statistiken in geometrisches Mittel (95 % CI), nicht normalverteilte Daten werden als Median (25., 75.

Die Basismerkmale der Teilnehmer werden unter Verwendung von Gruppen verglichen Varianzanalyse (ANOVA) für parametrische Daten und der Kruskal-Wallis-Test für nichtparametrische Daten. Die primäre Analyse, Vergleich der Auswirkungen der Behandlung auf Symptome von Autismus über 12 Monate, wird unter Verwendung eines generalisierten linearen Mixed-Models-Verfahrens durchgeführt. Behandlungen und Zeit werden als feste Effekte einbezogen und die Wechselwirkungen zwischen Interventionen und Zeit werden getestet. Wenn signifikante Haupteffekte oder Interaktionseffekte beobachtet werden, wird eine Post-hoc-Analyse mit Bonferroni-Anpassungen durchgeführt. Mögliche Störfaktoren und Effektmodifikatoren (z. B. 25 (OH) D- und Erythrozytenfettsäuren zu Studienbeginn, Symptome von Autismus zu Studienbeginn, Alter und Geschlecht) werden innerhalb des Modells untersucht. Logistische Regression wird verwendet, um die multiplikative Interaktion zu testen. Rothmans Synergieindex, der unter Additivität der Einheit entspricht und unter der Einheit liegt, wenn ein Antagonismus vorgeschlagen wird, wird verwendet, um den postulierten Interaktionseffekt von Vitamin D und Omega-3-LCPUFAs auf die Kernsymptome von ASD zu untersuchen.

Die Sekundäranalyse zum Vergleich der Auswirkungen der Behandlung auf gastrointestinale Symptome über 12 Monate wird mit dem gleichen Verfahren durchgeführt. Mögliche Störfaktoren und Effektmodifikatoren (z. B. Grundliniendiagnose von gastrointestinalen Symptomen und Verwendung von Medikamenten / Nahrungsergänzungsmitteln) werden innerhalb des Modells untersucht.

Unterschiede zwischen Teilnehmern, die die Studie abschließen und abbrechen, werden mit einem unabhängigen t–Test analysiert oder der Mann-Whitney-Test für kontinuierliche Variablen (z. B. Alter) und Chi-Quadrat für kategoriale Variablen (z. B. Geschlecht).

Assoziationen zwischen Schweregrad der ASD-Symptome und Ernährungszustand (insbesondere Vitamin D, Erythrozyten) Fettsäuren, Eisen und Vitamin B12) zu Studienbeginn werden unter Verwendung von bewertet Regressionsanalyse. Die Informationen werden verwendet, um das Ansprechen auf die Behandlung nach Tertilen des Ernährungszustands zu bewerten zeigt eine signifikante Beziehung zum Schweregrad der ASD.

Sowohl Intention-to-Treat- als auch Per-Protocol-Analysen werden verwendet, obwohl die primäre Methode der Analyse wird sein Intention-to-Treat. Die statistische Signifikanz basiert auf zweischwänzigen Tests mit P < 0,05 als signifikant angesehen.