Información técnica y Productos relacionados
Características del producto para la Peroxidasa de Rábano Picante nativa
Coeficiente de extinción: EmM = 100 cuando se mide a 403 nm.1
Peso molecular: (aprox. 44 kDa)
Incluye la cadena polipeptídica (33.890 Daltons), hemina más Ca2+ (aprox. 700 Daltons),
y carbohidratos (9400 Daltons).3
Punto isoeléctrico: Las isoenzimas varían de 3.0 a 9.0
Existen al menos siete isoenzimas de HRP.2
La peroxidasa de rábano picante (HRP) se aísla de raíces de rábano picante (Amoracia rusticana) y pertenece al grupo ferroprotoporfirina de las peroxidasas. HRP es un polipéptido de cadena única que contiene cuatro puentes de disulfuro. Es una glicoproteína que contiene un 18% de carbohidratos. La composición de carbohidratos consiste en galactosa, arabinosa, xilosa, fucosa, manosa, manosamina y galactosamina, dependiendo de la isoenzima específica.2
Especificidad de sustrato
HRP se combina fácilmente con peróxido de hidrógeno (H2O2), y el complejo resultante puede oxidar una amplia variedad de donantes cromogénicos de hidrógeno. También puede utilizar sustratos quimioluminiscentes como el luminol y el isoluminol, y sustratos fluorogénicos como la tiramina, el ácido homovanílico y el ácido 4–hidroxifenilacético.
El Índice de sustrato de Enzyme Explorer proporciona enlaces a varios donantes de hidrógeno cromogénico y quimioluminiscente utilizados para evaluar la actividad de la peroxidasa.
Inhibidores
Los siguientes compuestos son inhibidores de la peroxidasa de rábano picante: azida de sodio, cianuro, L–cistina, dicromato, etilenetiourea, hidroxilamina, sulfuro, vanadato, ácido p–aminobenzoico, Cd+2, Co+2, Cu+2, Fe+3, Mn+2, Ni+2, Pb+2.4
Dependencia del pH
El óptimo de pH de la HRP está en el rango de 6,0 a 6,5. La actividad a pH 7,5 es el 84% del máximo. La enzima es más estable en el rango de pH de 5.0 a 9.0.5
Aplicaciones
La peroxidasa de rábano picante se usa ampliamente como etiqueta para inmunoglobulinas en muchas aplicaciones inmunoquímicas diferentes, incluidas ELISA, inmunoblotting e inmunohistoquímica. La HRP se puede conjugar con anticuerpos por varios métodos diferentes, incluyendo glutaraldehído, oxidación periódica, a través de enlaces disulfuro, y también a través de entintadores cruzados dirigidos a amino y tiol. La HRP es la etiqueta más deseada para anticuerpos, ya que es la más pequeña y estable de las tres etiquetas enzimáticas más populares (HRP, fosfatasa alcalina y B-galactosidasa), y su glicosilación conduce a una menor unión inespecífica.6 Protocolos que describen las metodologías de conjugación de glutaraldehído y periodicidad pueden ser revisados en Harlow, E. et al.7
Ofrecemos varios reactivos de detección cromogénicos y quimioluminiscentes para aplicaciones de secante, histología y ELISA.
También ofrecemos una línea completa de anticuerpos conjugados HRP.
Instrucciones de preparación
La elección del disolvente dependerá de la aplicación prevista. Las enzimas en polvo son agua soluble o tampón de fosfato de 0,1 M, pH 6 (10 mg / ml). La suspensión (P6140) puede diluirse en agua.
Almacenamiento/estabilidad
Las peroxidasas en polvo deben refrigerarse a 2-8 °C. El almacenamiento en congelador también es aceptable, pero no es necesario. La suspensión (P6140) debe almacenarse a 2-8 °C. Si se almacena correctamente, estos productos tienen una vida útil de al menos dos años.
Estabilidad de temperatura de Polvos liofilizados
Estabilidad de temperatura de soluciones
Estabilidad de soluciones vs. pH
Estabilidad de soluciones vs. Concentración
Perfil RZ
RZ (Reinheitszahl): la relación de absorbancia A403/A275. Es una medida del contenido de hemina de la peroxidasa, no de la actividad enzimática. Incluso las preparaciones con un alto valor de RZ pueden tener una baja actividad enzimática. Para conjugar proteínas, como anticuerpos a la peroxidasa, elija una peroxidasa con un valor de RZ de al menos 3,0.
Spectrophotometric Method to Determine the RZ Value for Peroxidase
Peroxidase Enzymes for Labeling
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