Las abrazaderas deslizantes se encuentran en todos los dominios de la vida y son esenciales para la replicación eficiente del ADN, que se requiere cada vez que una célula se divide, así como para coordinar el tráfico en el ADN. La Escherichia coli (E. coli) la abrazadera beta es una proteína en forma de anillo que consiste en dos monómeros idénticos codificados por el gen dnaN que se asocia con la polimerasa de ADN III y facilita el alto grado de processividad requerido para la replicación del ADN. Las proteínas de abrazadera deslizante se abren y se cargan en estructuras de ADN específicas mediante cargadores de abrazadera en presencia de ATP. Nuestro objetivo es obtener información sobre las contribuciones de diferentes dominios a la función de beta utilizando una abrazadera beta vinculada que restringe el homodímero en una de las dos interfaces. Por lo general, la estructura homodimérica de la abrazadera beta le permite actuar como un cinturón de herramientas moleculares, uniendo más de una proteína simultáneamente en sitios específicos de interacción de proteínas en la abrazadera. Por lo tanto, se obtendrá una mejor comprensión del papel de las abrazaderas deslizantes en el proceso de tolerancia al daño del ADN investigando si una interfaz o sitio de unión es adecuado para la carga de ADN o para otras interacciones de proteínas. Para crear esta construcción, se optimizaron la longitud y secuencia del enlazador, así como las condiciones de expresión. Las proteínas beta enlazadas se caracterizaron a través de un ensayo de desnaturalización térmica y mostraron una estabilidad térmica comparable a la beta de tipo salvaje. En un ensayo de ATPasa, se detectaron cantidades similares de fosfato inorgánico en reacciones que contenían beta enlazada o beta de tipo salvaje, lo que indica que el cargador de pinza puede interactuar con ambas versiones de la pinza beta. Actualmente, estamos investigando si la beta ligada y salvaje mejora la processividad de una polimerasa en un ensayo de extensión de imprimación. Ahora estamos construyendo y caracterizando variantes de beta de tipo salvaje y beta vinculada para probar la importancia de los residuos en solo una de las interfaces o sitios asociados de unión a proteínas.
