Prueba de Sulfuro de hidrógeno: Principio, Procedimiento, Usos e Interpretación

Algunos microorganismos tienen la capacidad de reducir los compuestos que contienen azufre (azufre) a sulfuro de hidrógeno durante el metabolismo, lo que se emplea comúnmente como medida de prueba para su identificación en laboratorios. Se utilizan numerosos métodos para detectar la producción de H2S por microorganismos que varían según la fuente de azufre y las sales metálicas utilizadas para indicar la formación de H2S. El SIM es más sensible en la detección de H2S que el TSI o el KIA, debido a su naturaleza semisólida, su falta de carbohidratos interferentes y el uso de hierro peptonizado como indicador. Sin embargo, el papel de acetato de plomo es 10 veces más sensible que otros medios.

Objetivos

Para determinar si el microbio reduce los compuestos que contienen azufre a sulfuros para producir gas sulfuro de hidrógeno.

Principio

Un compuesto de hierro y un compuesto de azufre se incluyen en el medio de prueba para probar la producción de gas sulfuro de hidrógeno. El sulfuro de hidrógeno se produce si el compuesto de azufre es reducido por la cepa bacteriana. Por lo tanto, esta prueba determina si el microbio reduce los compuestos que contienen azufre a sulfuros durante el proceso de metabolismo. El H2S es producido por ciertas bacterias a través de la reducción de aminoácidos que contienen azufre como la cistina, la metionina o a través de la reducción de compuestos inorgánicos de azufre como los tiosulfatos, sulfatos o sulfitos durante la degradación de las proteínas o cuando la respiración anaeróbica transporta los electrones al azufre en lugar de al oxígeno. En cualquier caso, se produce H2S (gas sulfuro de hidrógeno) que reacciona con el compuesto de hierro para formar el precipitado negro de sulfuro férrico. El color negro actúa como indicador de la presencia de sulfuro de hidrógeno. Detección de gas de sulfuro de hidrógeno (H2S) producido por un organismo. se utiliza principalmente para ayudar en la identificación de ese organismo en particular.

Medios:

Esta prueba se puede realizar con el uso de varios medios, incluidos el Hierro de triple azúcar (TSI), el Agar de hierro de Kligler (KIA), el medio SIM y el papel de acetato de plomo.

• Medio de motilidad de indol sulfito (SIM) para detectar H2S
  Este medio contiene sulfato de amonio ferroso y tiosulfato de sodio, que juntos sirven como indicadores para la producción de sulfuro de hidrógeno. La producción de sulfuro de hidrógeno se puede detectar cuando se produce sulfuro ferroso, un precipitado negro, como resultado de la reacción de sulfato de amonio ferroso con gas H2S.

Composición:

Extracto de carne de vacuno 3,0 g de Peptona 30,0 g de sulfato de amonio ferroso 0,2 g de tiosulfato de sodio 0,025 g de Agar 3,0 g de pH final (a 25°C) 7,3±0.2 Agares de hierro de agua destilada de 1000 ml

• para detectar H2S
  Este medio es adecuado para detectar la producción de H2S por enterobacterias. H2S es detectado por el citrato férrico contenido en el medio
• Prueba de papel de acetato de plomo para detectar H2S
  Cuando se requiere una técnica sensible para detectar la producción de H2S, se recomienda la prueba de papel de acetato de plomo.

Procedimiento

I. En medio de motilidad de indol sulfito (SIM)

1. Inocular el organismo en un tubo etiquetado mediante inoculación de puñalada.
2. Incubar los tubos inoculados a 37°C durante 24-48 horas.
3. Observar la formación de precipitado negro en el medio.

II. En agar de hierro Kligler (KIA) y Agar de Hierro de Triple Azúcar (TSIA)

1. Inocular el organismo de ensayo en KIA e incubarlo a la temperatura adecuada durante la noche.
2. Observe el ennegrecimiento del medio.

III. Prueba de papel acetato de plomo

1. Inocule un tubo o botella de agua de peptona estéril o caldo de nutrientes con el organismo de prueba.
2. Inserte una tira de papel de acetato de plomo en el cuello de la botella o tubo por encima del medio, y tape bien.
3. Incubar el medio inoculado a 35-37oC y examinar diariamente para detectar un ennegrecimiento de la parte inferior de la tira.

Resultados

• resultado Positivo:Ennegrecimiento del medio
• resultado Negativo:Sin ennegrecimiento en el medio

Usos

• Se utiliza principalmente para ayudar en la identificación de miembros de la familia Enterobacteriaceae y ocasionalmente para diferenciar otras bacterias como Bacteroidessp y Brucella sps.
• El test ayuda a la identificación y diferenciación de miembros de Enterobacteriaceae (entéricos) de otros bacilos Gram.
• Es especialmente útil para identificar especies de Salmonella, Francisella y Proteus.

Limitaciones

• La producción de H2S puede verse inhibida en la ETI para organismos que utilizan sacarosa y suprimen el mecanismo enzimático que da lugar a la producción de H2S.
• El acetato de plomo es tóxico para las bacterias y puede inhibir el crecimiento de algunas bacterias. No permita que los medios de comunicación toquen la tira.
• Se recomienda realizar pruebas bioquímicas, inmunológicas, moleculares o de espectrometría de masas en colonias de cultivo puro para una identificación completa.

1. Tille, P. M., & Forbes, B. A. (2014). Bailey & Scott’s diagnostic microbiology (Decimotercera edición.). San Louis, Missouri: Elsevier.
2. Cappuccino J. G. and Sherman N. 2008. Microbiology: A Laboratory Manual, 8th ed. Pearson Benjamin Cummings, San Francisco, CA, Estados Unidos.
3. www.vumicro.com/vumie/help/VUMICRO/Hydrogen_Sulfide_Production_Test.htm
4. mic.microbiologyresearch.org/content/journal/micro/10.1099/00221287-8-3-397
5. https://microbenotes.com/hydrogen-sulfide-h2s-production-test/
6. www.microbiologyresearch.org/docserver/fulltext/micro/8/3/mic-8-3-397.pdf?expires=1543332392&id=id&accname=guest&checksum=C42277C712F05E5951241893FC8EC3F7
7. spot.pcc.edu/~jvolpe/b/bi234/lab/differentialMedia/H2Sproduction.html
8. https://senthilprabhu.blogspot.com/2017/10/hydrogen-sulphide-h2s-production-test.html
9. https://jb.asm.org/content/jb/10/5/439.full.pdf