Tinción de Giemsa: Principio, Procedimiento y resultados

La tinción de Giemsa es un tipo de tinción de Romanowsky, que lleva el nombre de Gustav Giemsa, un químico alemán que creó una solución de tinte. Fue diseñado principalmente para la demostración de parásitos de malaria en frotis de sangre, pero también se emplea en histología para el examen de rutina de frotis de sangre.

Usos de la tinción de Giemsa

Además de la tinción de parásitos de la malaria, la tinción de Giemsa tiene una variedad de aplicaciones en Microbiología y Patología:

• La tinción de Giemsa se utiliza para obtener recuentos diferenciales de glóbulos blancos.
• También se utiliza para diferenciar la morfología nuclear y citoplasmática de las diversas células sanguíneas como plaquetas, glóbulos rojos, glóbulos blancos.
• En Microbiología, la tinción de Giemsa se utiliza para teñir cuerpos de inclusión en Chlamydia trachomatis, especies de Borrelia y, si la tinción de Wayson no está disponible, para teñir Yersinia pestis. La tinción de Giemsa también se utiliza para teñir Histoplasma capsulatum, Pneumocystis jiroveci, Klebsiella granulomatis, Penicillium marneffei y ocasionalmente cápsulas bacterianas.
• Esta tinción también se utiliza en citogenética para teñir los cromosomas e identificar aberraciones cromosómicas. Se usa comúnmente para bandas G (Giemsa-Banding)

Principio de la tinción de Giemsa

La tinción de Giemsa es una tinción diferencial y contiene una mezcla de colorante Azul, azul de metileno y Eosina. Es específico para los grupos fosfato del ADN y se adhiere a donde hay altas cantidades de unión adenina-timina.

Azure y eosina son tintes ácidos que tiñen de forma variable los componentes básicos de las células, como el citoplasma, los gránulos, etc.

El azul de metileno actúa como tinte básico, que tiñe los componentes ácidos, especialmente el núcleo de la célula.

El metanol actúa como fijador y como tinción celular. El fijador no permite ningún cambio adicional en las celdas y hace que se adhieran al portaobjetos de vidrio.

Composición de la tinción de Giemsa

La tinción de Giemsa se puede preparar en casa utilizando el polvo de tinción de Giemsa o se puede obtener comercialmente. Los ingredientes básicos de ambos son los mismos; sin embargo, se pueden hacer diluciones dependiendo del uso.

PROCEDIMIENTO

A. Para la preparación interna de manchas:

1. Pese la cantidad necesaria de mancha de polvo y transfiérala a una botella limpia y seca de 1 litro de capacidad. Añadir el metanol y mezclar bien.
2. Mida y agregue glicerol y mezcle bien.
3. Coloque la botella de mancha en baño de agua a 50-60 ° C o a 37°C durante un máximo de 2 horas con mezcla frecuente.
4. Etiquete el frasco y guárdelo en un lugar fresco y oscuro con un tapón firme.

NOTA: Si el agua entra en contacto durante cualquier paso de preparación de la mancha, la mancha se estropea, por lo tanto, use, seque la cristalería y almacénela en condiciones donde no hubiera contacto con el agua.

• Filtre la mancha con el papel filtrante no.1 de Whatman y diluya con agua tamponada a pH 7.2 para obtener soluciones de trabajo

B. Para la tinción de los portaobjetos

El método de tinción, la concentración y el momento de la tinción utilizados varían según el propósito, por ejemplo, para frotis de sangre fina se utiliza una dilución de material de 1:20, mientras que para frotis de sangre gruesa se utiliza una dilución de 1:50.

Para frotis de sangre

1. Fije la película seca al aire en metanol absoluto sumergiendo la película brevemente (dos inmersiones) en un frasco de Coplín que contenga metanol absoluto.
2. Retirar y dejar secar al aire.
3. Tinción con tinción de Giemsa diluida (1:20, vol/vol) durante 20 min (Para un 1:20 diluciones, añadir 2 ml de caldo de Giemsa a 40 ml de agua tamponada en un frasco de Coplin).
4. Lave sumergiendo brevemente el portaobjetos dentro y fuera de un frasco de Coplín con agua tamponada (una o dos inmersiones).
   Nota: El lavado excesivo decolorará la película.
5. Deje secar al aire en posición vertical. Observe bajo el microscopio primero a 40X y luego use lentes de inmersión en aceite

Para frotis de sangre rápidos

1. Permita que la película se seque completamente al aire durante varias horas o durante la noche. No seque las películas en una incubadora o por calor, ya que esto fijará la sangre e interferirá con el lisado de los glóbulos rojos.
   Nota: Si se necesita un diagnóstico rápido de malaria, se pueden hacer películas gruesas ligeramente más delgadas de lo habitual, dejar secar durante 1 hora y luego teñir.
2. NO SE ARREGLA.
3. Teñir con tinción de Giemsa diluida (1: 50, vol/vol) durante 50 min (Para una dilución de 1:50, añadir 1 ml de Giemsa en stock a 50 ml de agua tamponada en un frasco Coplin)
4. Lavar colocando la película en agua tamponada durante 3 a 5 min.
5. Deje secar al aire en posición vertical y observe bajo el microscopio primero a 40X y luego use una lente de inmersión en aceite

Para Chlamydia trachomatis

Siga los pasos mencionados anteriormente, pero con la tinción diluida de dilución de 1:40 (agregue 0,5 ml de solución de Giemsa en stock a 19,5 ml de agua tamponada) y deje la tinción durante 90-120 minutos.

OBSERVACIÓN:

En la observación microscópica, los orgánulos celulares, las bacterias y los parásitos se distinguen en función de su morfología y color;