Informations techniques et produits connexes
Caractéristiques du produit pour la Peroxydase de raifort native
Coefficient d’extinction: EmM = 100 lorsqu’il est mesuré à 403 nm.1
Poids moléculaire: (env. 44 kDa)
Comprend la chaîne polypeptidique (33 890 Daltons), l’hémine plus le Ca2+ (env. 700 Daltons),
et glucides (9400 Daltons).3
Point isoélectrique: Les isoenzymes varient de 3,0 à 9,0
Il existe au moins sept isoenzymes de HRP.2
La peroxydase de raifort (HRP) est isolée des racines de raifort (Amoracia rusticana) et appartient au groupe des peroxydases ferroprotoporphyrines. HRP est un polypeptide à chaîne unique contenant quatre ponts disulfures. C’est une glycoprotéine contenant 18% de glucides. La composition glucidique se compose de galactose, d’arabinose, de xylose, de fucose, de mannose, de mannosamine et de galactosamine, en fonction de l’isozyme spécifique.2
Spécificité du substrat
HRP se combine facilement avec le peroxyde d’hydrogène (H2O2), et le complexe résultant peut oxyder une grande variété de donneurs d’hydrogène chromogènes. Il peut également utiliser des substrats chimioluminescents tels que le luminol et l’isoluminol, et des substrats fluorogènes tels que la tyramine, l’acide homovanillique et l’acide 4–hydroxyphénylacétique.
L’indice de substrat de l’Enzyme Explorer fournit des liens vers plusieurs donneurs d’hydrogène chromogènes et chimioluminescents utilisés pour mesurer l’activité de la peroxydase.
Inhibiteurs
Les composés suivants sont des inhibiteurs de la peroxydase de raifort: azoture de sodium, cyanure, L–cystine, dichromate, éthylènethiourée, hydroxylamine, sulfure, vanadate, acide p–aminobenzoïque, Cd + 2, Co + 2, Cu + 2, Fe + 3, Mn + 2, Ni + 2, Pb + 2.4
Dépendance au pH
L’optimum de pH de HRP est de l’ordre de 6,0 à 6,5. L’activité à pH 7,5 est de 84% du maximum. L’enzyme est la plus stable dans la plage de pH de 5,0 à 9,0.5
Applications
La peroxydase de raifort est largement utilisée comme étiquette pour les immunoglobulines dans de nombreuses applications d’immunochimie différentes, notamment ELISA, immunoblot et immunohistochimie. La HRP peut être conjuguée aux anticorps par plusieurs méthodes différentes, y compris le glutaraldéhyde, l’oxydation du periodate, par des liaisons disulfures, ainsi que par des encreurs croisés dirigés vers les amino et les thiols. La HRP est l’étiquette la plus recherchée pour les anticorps, car elle est la plus petite et la plus stable des trois étiquettes enzymatiques les plus populaires (HRP, phosphatase alcaline et B-galactosidase), et sa glycosylation conduit à une liaison non spécifique plus faible.6 Protocoles décrivant les méthodologies de conjugaison du glutaraldéhyde et du periodate peuvent être examinés dans Harlow, E. et al.7
Nous proposons plusieurs réactifs de détection chromogènes et chimiluminescents pour les applications de buvardage, d’histologie et d’ELISA.
Nous proposons également une gamme complète d’anticorps conjugués HRP.
Instructions de préparation
Le choix du solvant dépendra de l’application prévue. Les enzymes en poudre sont de l’eau soluble ou du tampon phosphate 0,1 M, pH 6 (10 mg/mL). La suspension (P6140) peut être diluée dans de l’eau.
Stockage/stabilité
Les peroxydases en poudre doivent être réfrigérées à une température comprise entre 2 et 8 °C. L’entreposage au congélateur est également acceptable, mais n’est pas requis. La suspension (P6140) doit être conservée à une température comprise entre 2 et 8 °C. Si elle est correctement stockée, ces produits ont une durée de conservation d’au moins deux ans.
Stabilité en température des Poudres Lyophilisées
Stabilité en Température des Solutions
Stabilité des Solutions par rapport au pH
Stabilité des Solutions par rapport à la Concentration
Profil RZ
RZ (Reinheitszahl): le rapport d’absorbance A403 / A275. C’est une mesure de la teneur en hémine de la peroxydase, pas de l’activité enzymatique. Même les préparations à haute valeur RZ peuvent avoir une faible activité enzymatique. Pour conjuguer des protéines telles que des anticorps contre la peroxydase, choisissez une peroxydase avec une valeur RZ d’au moins 3,0.
Spectrophotometric Method to Determine the RZ Value for Peroxidase
Peroxidase Enzymes for Labeling
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