Certains microorganismes ont la capacité de réduire les composés contenant du soufre (Soufre) en sulfure d’hydrogène au cours du métabolisme, ce qui est couramment utilisé comme mesure d’essai pour leur identification dans les laboratoires. De nombreuses méthodes sont utilisées pour détecter la production de H2S par des micro-organismes qui varient avec la source de soufre et les sels métalliques utilisés pour indiquer la formation de H2S. SIM est plus sensible à la détection du H2S que TSI ou KIA, en raison de sa nature semi-solide, de son manque de glucides interférents et de l’utilisation du fer peptonisé comme indicateur. Cependant, le papier acétate de plomb est 10 fois plus sensible que les autres supports.
Objectifs
Déterminer si le microbe réduit les composés contenant du soufre en sulfures pour produire du gaz sulfuré d’hydrogène.
Principe
Un composé de fer et un composé de soufre sont inclus dans le milieu d’essai pour tester la production de sulfure d’hydrogène gazeux. Le sulfure d’hydrogène est produit si le composé soufré est réduit par la souche bactérienne. Ce test détermine ainsi si le microbe réduit les composés soufrés en sulfures au cours du processus de métabolisme. Le H2S est produit par certaines bactéries par réduction d’acides aminés soufrés tels que la cystine, la méthionine ou par réduction de composés soufrés inorganiques tels que les thiosulfates, les sulfates ou les sulfites lors de la dégradation des protéines ou lorsque la respiration anaérobie fait passer les électrons au soufre plutôt qu’à l’oxygène. Dans les deux cas, il se produit du H2S (gaz sulfuré d’hydrogène) qui réagit avec le composé du fer pour former le précipité noir de sulfure ferrique. La couleur noire agit comme un indicateur de la présence de sulfure d’hydrogène. La détection du gaz sulfuré d’hydrogène (H2S) produit par un organisme. est utilisé principalement pour aider à l’identification de cet organisme particulier.
Support:
Ce test peut être effectué à l’aide de plusieurs supports, dont le Fer Triple Sucre (TSI), la Gélose au fer de Kligler (KIA), le support SIM et le Papier Acétate de plomb.
- Milieu de motilité indole de sulfite (SIM) pour détecter H2S
Ce milieu contient du sulfate d’ammonium ferreux et du thiosulfate de sodium, qui servent alors ensemble d’indicateurs pour la production de sulfure d’hydrogène. La production de sulfure d’hydrogène peut être détectée lorsque du sulfure ferreux, un précipité noir, est produit à la suite de la réaction du sulfate d’ammonium ferreux avec le gaz H2S.
Composition:
Extrait de bœuf 3,0 g de Peptone 30,0 g de sulfate d’ammonium ferreux 0,2 g de thiosulfate de sodium 0,025 g de gélose 3,0 g de pH final (à 25 ° C) 7,3± 0.2 Eau distillée 1000ml
- Géloses au fer pour détecter H2S
Ce milieu convient à la détection de la production de H2S par les entérobactéries. H2S est détecté par le citrate ferrique contenu dans le milieu - Test de papier acétate de plomb pour détecter H2S
Lorsqu’une technique sensible de détection de la production de H2S est requise, le test de papier acétate de plomb est recommandé.
Procédure
I. Dans un milieu de motilité indole au sulfite (SIM)
- Inoculer l’organisme dans un tube marqué au moyen d’une inoculation par coup de couteau.
- Incuber les tubes inoculés à 37°C pendant 24 à 48 heures.
- Observez la formation de précipité noir sur le milieu.
II. Dans la gélose au fer Kligler (KIA) et la Gélose au Fer Triple Sucre (TSIA)
- Inoculer l’organisme à tester dans KIA et l’incuber à une température appropriée pendant la nuit.
- Observer le noircissement du milieu.
III. Essai sur papier d’acétate de plomb
- Inoculer un tube ou une bouteille d’eau peptonique stérile ou de bouillon nutritif avec l’organisme à tester.
- Insérez une bande de papier d’acétate de plomb dans le goulot de la bouteille ou du tube au-dessus du support et obturez bien.
- Incuber le milieu inoculé à 35-37oC, et examiner quotidiennement pour un noircissement de la partie inférieure de la bandelette.
Résultats
- Résultat positif : Noircissement sur le milieu
- Résultat négatif:Pas de noircissement sur le milieu
Utilisations
- Il est utilisé principalement pour aider à l’identification des membres de la famille des Enterobacteriaceae et occasionnellement pour différencier d’autres bactéries telles que Bacteroidessps et Brucella sps.
- Le test aide à l’identification et à la différenciation des membres des entérobactéries (entériques) par rapport aux autres bacilles à Gram.
- Il est particulièrement utile pour identifier les espèces de Salmonella, Francisella et Proteus.
Limitations
- La production de H2S peut être inhibée sur la STI pour les organismes qui utilisent le saccharose et suppriment le mécanisme enzymatique qui entraîne la production de H2S.
- L’acétate de plomb est toxique pour les bactéries et peut inhiber la croissance de certaines bactéries. Ne laissez pas le support toucher la bande.
- Il est recommandé d’effectuer des tests biochimiques, immunologiques, moléculaires ou de spectrométrie de masse sur des colonies issues de culture pure pour une identification complète.
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- www.vumicro.com/vumie/help/VUMICRO/Hydrogen_Sulfide_Production_Test.htm
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- https://microbenotes.com/hydrogen-sulfide-h2s-production-test/
- www.microbiologyresearch.org/docserver/fulltext/micro/8/3/mic-8-3-397.pdf ?expires=1543332392&id=id&accname=guest&checksum=C42277C712F05E5951241893FC8EC3F7
- spot.pcc.edu/~jvolpe/b/bi234/lab/differentialMedia/H2Sproduction.html
- https://senthilprabhu.blogspot.com/2017/10/hydrogen-sulphide-h2s-production-test.html
- https://jb.asm.org/content/jb/10/5/439.full.pdf
