Les pinces coulissantes se retrouvent dans tous les domaines de la vie et sont essentielles à une réplication efficace de l’ADN, qui est nécessaire à chaque fois qu’une cellule se divise, ainsi qu’à la coordination du trafic sur l’ADN. L’Escherichia coli (E. coli) beta-clamp est une protéine en forme d’anneau constituée de deux monomères identiques codés par le gène dnaN qui s’associe à l’ADN polymérase III et facilite le degré élevé de processivité requis pour la réplication de l’ADN. Les protéines de serrage coulissantes s’ouvrent et sont chargées sur des structures d’ADN spécifiques par des chargeurs de serrage en présence d’ATP. Nous visons à mieux comprendre les contributions de différents domaines à la fonction de bêta à l’aide d’une pince bêta liée qui contraint l’homodimère à l’une des deux interfaces. Habituellement, la structure homo-dimérique de la pince bêta lui permet d’agir comme une ceinture d’outils moléculaires, liant plusieurs protéines simultanément à des sites d’interaction protéiques spécifiques sur la pince. Ainsi, une meilleure compréhension du rôle des pinces coulissantes dans le processus de tolérance aux dommages de l’ADN sera recueillie en étudiant si une interface ou un site de liaison est adéquat pour le chargement de l’ADN ou pour d’autres interactions protéiques. Pour créer cette construction, la longueur et la séquence de l’éditeur de liens, ainsi que les conditions d’expression, ont été optimisées. Les protéines bêta liées ont été caractérisées par un test de dénaturation thermique et ont montré une stabilité thermique comparable à celle des bêta de type sauvage. Dans un essai d’ATPase, des quantités similaires de phosphate inorganique ont été détectées dans des réactions contenant soit du bêta lié, soit du bêta de type sauvage, indiquant que le chargeur de pince peut interagir avec les deux versions de la pince bêta. Actuellement, nous étudions si les bêta liés et de type sauvage améliorent la processivité d’une polymérase dans un test d’extension d’amorce. Nous construisons et caractérisons maintenant des variantes de bêta de type sauvage et de bêta‐lié pour tester l’importance des résidus sur une seule des interfaces ou des sites de liaison aux protéines partenaires.
