Teinture Giemsa: Principe, Procédure et résultats

La teinture Giemsa est un type de teinture Romanowsky, nommé d’après Gustav Giemsa, un chimiste allemand qui a créé une solution de teinture. Il a été principalement conçu pour la démonstration des parasites du paludisme dans les frottis sanguins, mais il est également utilisé en histologie pour l’examen de routine des frottis sanguins.

Utilisations de la teinture Giemsa

Outre la coloration des parasites du paludisme, la teinture Giemsa a diverses applications en microbiologie et en pathologie:

• La teinture Giemsa est utilisée pour obtenir une numération différentielle des globules blancs.
• Il est également utilisé pour différencier la morphologie nucléaire et cytoplasmique des différentes cellules sanguines comme les plaquettes, les CBR, les CBW.
• En microbiologie, la teinture de Giemsa est utilisée pour colorer les corps d’inclusion chez Chlamydia trachomatis, les espèces de Borrelia et, si la teinture de Wayson n’est pas disponible, pour colorer Yersinia pestis. La teinture Giemsa est également utilisée pour colorer Histoplasma capsulatum, Pneumocystis jiroveci, Klebsiella granulomatis, Penicillium marneffei et parfois des capsules bactériennes.
• Cette tache est également utilisée en cytogénétique pour colorer les chromosomes et identifier les aberrations chromosomiques. Il est couramment utilisé pour le G-banding (Giemsa-Banding)

Principe de la teinture Giemsa

La teinture Giemsa est une teinture différentielle qui contient un mélange de colorant azuré, de bleu de méthylène et d’éosine. Il est spécifique des groupes phosphate de l’ADN et se fixe là où il y a de grandes quantités de liaison adénine-thymine.

L’azur et l’éosine sont des colorants acides qui colorent de manière variable les composants de base des cellules comme le cytoplasme, les granules, etc.

Le bleu de méthylène agit comme colorant de base, qui colore les composants acides, en particulier le noyau de la cellule.

Le méthanol agit comme fixateur ainsi que comme colorant cellulaire. Le fixateur ne permet aucun changement supplémentaire dans les cellules et les fait adhérer à la lame de verre.

Composition de la teinture Giemsa

La teinture Giemsa peut être préparée en interne avec de la poudre de teinture Giemsa ou peut être obtenue dans le commerce. Les ingrédients de base des deux sont les mêmes; cependant, des dilutions peuvent être faites en fonction de l’utilisation.

PROCÉDURE

A. Pour la préparation interne de la tache:

1. Peser la quantité requise de tache de poudre et transférer dans une bouteille propre et sèche d’une capacité de 1 litre. Ajouter le méthanol et bien mélanger.
2. Mesurer et ajouter le glycérol et bien mélanger.
3. Placer le flacon de teinture au bain-marie à 50-60°C ou à 37°C jusqu’à 2 heures avec un mélange fréquent.
4. Étiquetez la bouteille et conservez-la dans un endroit frais et sombre avec un bouchon ferme.

REMARQUE: Si de l’eau entre en contact lors des étapes de préparation de la tache, la tache se gâte, utilisez donc, séchez la verrerie et conservez-la dans des conditions où il n’y aurait pas de contact avec l’eau.

• Filtrer la tache à l’aide du papier filtre Whatman no.1 et diluer avec de l’eau tamponnée à pH 7,2 pour obtenir des solutions de travail

B. Pour les lames de coloration

La méthode de coloration, la concentration et le moment de la coloration utilisés varient en fonction de l’objectif, par exemple, les frottis sanguins minces utilisent une dilution de stock de 1: 20 alors que pour les frottis sanguins épais, une dilution de 1: 50 est utilisée.

Pour un frottis sanguin

1. Fixer le film séché à l’air dans du méthanol absolu en plongeant brièvement le film (deux trempettes) dans un pot de coplin contenant du méthanol absolu.
2. Retirer et laisser sécher à l’air.
3. Teinture avec teinture Giemsa diluée (1:20, vol/vol) pendant 20 min (Pour un 1:20 dilution, ajouter 2 ml de stock Giemsa à 40 ml d’eau tamponnée dans un pot de Coplin).
4. Laver en plongeant brièvement la lame dans et hors d’un pot de Coplin d’eau tamponnée (une ou deux trempettes).
   Remarque: Un lavage excessif décolorera le film.
5. Laisser sécher à l’air en position verticale. Observez d’abord au microscope à 40X, puis à l’aide d’une lentille à immersion dans l’huile

Pour des frottis sanguins épais

1. Laissez le film sécher complètement à l’air libre pendant plusieurs heures ou pendant la nuit. Ne séchez pas les films dans un incubateur ou à la chaleur, car cela fixera le sang et interférera avec la lyse des RBC.
   Remarque: Si un diagnostic rapide du paludisme est nécessaire, des films épais peuvent être légèrement plus fins que d’habitude, laissés sécher pendant 1 heure, puis colorés.
2. NE PAS RÉPARER.
3. Teinture avec de la teinture Giemsa diluée (1:50, vol/ vol) pendant 50 min (Pour une dilution 1:50, ajouter 1 ml de stock Giemsa à 50 ml d’eau tamponnée dans un bocal en Coplin)
4. Laver en plaçant le film dans de l’eau tamponnée pendant 3 à 5 min.
5. Laissez sécher à l’air en position verticale et observez d’abord au microscope à 40X, puis à l’aide d’une lentille à immersion dans l’huile

Pour Chlamydia trachomatis

Suivez les étapes susmentionnées mais avec la tache diluée de dilution 1: 40 (ajoutez 0,5 ml de solution de stock Giemsa à 19,5 ml d’eau tamponnée) et laissez la tache pendant 90-120 minutes.

OBSERVATION:

En observation microscopique, les organites cellulaires, les bactéries et les parasites se distinguent en fonction de leur morphologie et de leur couleur;