D-Vitamin és omega-3 zsírsav-kiegészítők autizmus spektrum zavarban szenvedő gyermekeknél: faktoriális randomizált, kettős-vak, placebo-kontrollos vizsgálat vizsgálati protokollja

ez a vizsgálat két szakaszból áll: az 1.szakasz magában foglalja a toborzást és a szűrést, míg a 2. szakasz D-vitamin és n-3 lcpufa randomizált, kettős-vak, placebo-kontrollos vizsgálat (ábra. 1). A beavatkozás időtartama 12 hónap.

a tanulmány tervezésének sematikus rajza. 1vér biomarkerek: 25-hidroxi-D-vitamin (25 (OH) D), vörösvérsejt (RBC) zsírsavak, kalcium, albumin, vas vizsgálatok, B12-vitamin, folsav, teljes vérkép és a-vitamin.kérdőívek: szociodemográfia, kórtörténet, étkezési/étkezési szokások és étkezési napló. 2kérdések: szociokommunikációs működés, érzékszervi problémák és aberrált viselkedés (elsődleges eredmények); gastrointestinalis tünetek (másodlagos kimenetel), napozás és bőrszín. Antropometria: súly és magasság. 3vér biomarkerek: 25 (OH) D, vörösvértest-zsírsavak, kalcium és albumin. Kérdőívek: szociokommunikációs működés, érzékszervi problémák, aberrált viselkedés (elsődleges eredmények) és étkezési/étkezési szokások és az étrend minősége. Antropometria: súly és magasság. 4vér biomarkerek: 25 (OH)D, kalcium és albumin. * Gastrointestinalis tünetek (másodlagos eredmény), valamint a gyógyszeres kezelés / kiegészítő használat / a nemkívánatos események előfordulása / a kiegészítő megfelelés az egész vizsgálati időszak alatt figyelemmel kísérésre kerül

az 1. szakasz lehetőséget nyújt a vizsgálati populáció átfogó leírására a táplálkozási állapot (biokémiai indexek és étrendi bevitel), a demográfia és a kórtörténet tekintetében. A 2. szakasz bemutatja a D-vitamin, n-3 LCPUFAs vagy mindkettő kiegészítésének hatékonyságát az ASD tüneteinek csökkentésében.

résztvevők

ez a tanulmány a Massey Egyetem és az Új-zélandi Waitemata kerületi egészségügyi Testület (WDHB) közötti együttműködés. A vizsgálat kritériumainak megfelelő gyermekek gondozóit először a WDHB fejlesztési koordinátorai keresik meg.

kiszámítottuk, hogy 42 résztvevőre (legalább 34 résztvevőre, és 20% – os potenciális lemorzsolódási arányt tesz lehetővé) lenne szükség a vizsgálat minden karjára, hogy klinikailag szignifikáns különbséget mutasson 80% teljesítmény és 5% statisztikai szignifikancia mellett. A teljesítményszámítások a kiegészített csoportok és a placebo közötti 17 egységnyi különbségen alapultak a kiindulási értéktől a végpontig a szociális Válaszkészségi skála (SRS) teljes pontszámán , az átlagos SRS és a standard deviáció 105, illetve 24,7 egység volt ASD-ben szenvedő kezeletlen gyermekeknél (2015-ös kísérleti vizsgálatunkból, nem publikált). A minta méretét az alábbi képlet segítségével számítottuk ki :

ahol N A csoportonként szükséges mintaméret, az SD, k az állandó (7.A 9 a 80% − os teljesítményt és az 5% – os szignifikanciát jelöli), és (6-2-1) a csoportok közötti SRS teljes pontszám különbsége.

annak biztosítása érdekében, hogy a vizsgálat megfelelően működjön, vak időközi elemzés az eredetileg tervezett beiratkozás > 50% – ánál független harmadik fél végzi a potenciális mintanagyság növekedésének varianciájának becslésére.

Felvételi és kizárási kritériumok

gyermekek jogosultak erre a tanulmányra, ha 2 év közöttiek.5 és 8 éves, az ASD orvosi diagnózisát mind a fejlődési gyermekorvos megerősítette a mentális rendellenességek diagnosztikai és statisztikai kézikönyvének ötödik verziójában (DSM-5) felsorolt kritériumoknak megfelelően, és a tünetek 18 hónapos kor után jelentkeznek. A 2,5 éves alsó határt a pszichológiai értékelési eszközök életkori kritériumai alapján választották ki, a 8 éves felső határt pedig úgy választották meg, hogy elkerüljék a pubertás stádiumhoz kapcsolódó viselkedési változások zavaró hatását. A gondozó angol nyelvtudása követelmény (az eredményértékelő eszközök jellege miatt). Az önkénteseket kizárják, ha születésük óta fejlődési késéssel diagnosztizálták őket.

a vizsgálat további felvételi kritériumai a következők: májfunkció a normál tartományon belül (albumin 34-48 g/L) és szérum 25(OH)D <75 + 10 nmol/L, ha télen lépnek be a vizsgálatba, és < 105 nmol/L + 10 nmol/L, ha nyáron lépnek be a vizsgálatba. 10-nmol/L variációt választottunk a potenciális vizsgálati variabilitás miatt . Két különböző határértéket alkalmaztunk a kizáráshoz, mert a szérum 25(OH)D koncentrációjának nagy szezonális változása van Új-Zélandon 30 nmol/L-től 44 nmol/L-ig terjed .

Beállítás

a tanulmány az Új-zélandi Aucklandben zajlik. Nem éheztetett vérmintákat gyűjtenek az északi parton vagy a Waitakere kórházakban Auckland, Új Zéland. Kérdőívek és antropometria kerül sor Massey University, Auckland, Új-Zéland. Auckland Új-Zéland legnagyobb városa, lakossága alig több mint egymillió. Becslések szerint körülbelül 13 000 (32,5%) ASD-ben szenvedő személy lakik a nagy-Auckland régióban .

1.szakasz – szűrés

szűrés és toborzás (A vizsgálat 1. szakasza) 24 hónapos időszak alatt zajlik, amely 2015 januárjában kezdődött. Azok a gyermekek, akik megfelelnek a kezdeti felvételi kritériumoknak, vérvételt kapnak, és átvizsgálják a táplálkozási hiányosságokat. Lásd az 1. és a 2. táblázatot az eredménymérésekről, a vizsgálati módszerekről, valamint a beiratkozás, a beavatkozás és az értékelés ütemezéséről.

a beavatkozás előtti előkészítés

a randomizálás és a vizsgálatba való felvétel előtt a D-vitamin, a vas és a B12-vitamin hiányosságait kezelik. A táplálkozási hiányosságok felsorolását és az ebben a vizsgálatban alkalmazott kezelési stratégiákat lásd a 3.táblázatban.

2. szakasz-D-vitamin és n-3 lcpufa beavatkozás

a beavatkozás napi 2000 NE D3-vitaminból, napi 722 mg DHA-ból, 2000 NE D3-vitaminból, plusz napi 722 mg DHA-ból vagy placebóból áll, négy orális kapszula formájában. A kezelési anyagokat 750 mg-os gélkapszulákban szállítják, a Douglas Nutrition Ltd. által gyártott és szállított letéphető fúvókával., Auckland, Új Zéland. A vizsgálati kapszulák, A D-vitamin, az n-3 Lcpufa-k és a placebo megjelenésükben azonosak, íztelenek és színtelenek. A gyermeknek naponta négy kapszula tartalmát kell fogyasztania, amelyet a kívánt táplálékba kevernek, vagy szájon át fecskendővel. Az egyes kapszulák teljes napi bevitelét és tartalmát lásd a 4. táblázatban. A vizsgálati időszak alatt a gyermekek bármilyen terápiát vagy gyógyszert kaphatnak autizmus, valamint bármilyen kiegészítő, feltéve, hogy nem tartalmaz D-vitamint vagy omega-3-at.

a 2000 NE D3-vitaminnal történő kiegészítés biztonságos dózisnak bizonyult csecsemőknél, és a francia gyermekgyógyászati társaság napi 1000-1200 NE-t javasol szoptatott csecsemőknél . A vizsgálatunkban a 2,5–8 éves gyermekek testtömege lényegesen nagyobb lesz, mint a csecsemőké, ami tovább csökkenti a nemkívánatos események kockázatát. Ezenkívül a napi 2000 NE kevesebb, mint az IOM által javasolt 2500, illetve 3000 NE/nap biztonságos felső határ 1-3, illetve 4-8 éves korcsoportok számára .

a napi 722 mg-os DHA-dózis fiziológiailag releváns és étrenden keresztül elérhető (körülbelül heti három adag zsíros halnak felel meg), és hasonló az n-3 Lcpufák viselkedésre és tanulásra gyakorolt hatását vizsgáló más, gyermekeken végzett vizsgálatokban alkalmazott dózisokhoz . 600 mg DHA/nap dózisú gyermekeknél nem jelentettek mellékhatásokat .

randomizálás, vakítás és rejtett allokáció

a gyermekeket véletlenszerűen osztják ki a négy csoport egyikébe, miután rétegezték az ASD életkorát és súlyosságát. Az aktív/placebo kapszulák randomizálása, a randomizált szekvencia lista és a csoport hozzárendelése teljes mértékben rejtve lesz a kutatók, a gyermekek és a gondozók számára a teljes vizsgálat során, beleértve az adatelemzést is. Egy harmadik fél, aki nem vesz részt a vizsgálat egyik aspektusában, véletlenszerű blokktervet generál négy-nyolc blokkból a Randomization.com (http://www.randomization.com/). A harmadik fél hozzárendel egy kezelési kódot egy gyermekhez, miután a beavatkozásra való jogosultságuk megerősítést nyert, és a gondozó beleegyezését megkapta. Vészhelyzetben, amikor a vizsgálati vak megtörésére lesz szükség, tervek lesznek érvényben a vezető nyomozó számára, hogy vegye fel a kapcsolatot a randomizációért felelős harmadik féllel, hogy felfedje az adott résztvevő kezelési hozzárendelését.

adatgyűjtés

a résztvevők (gondozók és gyermekek) részt vesznek az emberi táplálkozási kutató egységben (Hnru) a Massey Egyetemen két alkalommal: alapvonal és 12 hónap. Miután felvették a 2. stádiumba, és mielőtt 4 hónapos táplálékkiegészítőt kaptak volna, a gondozók kitöltenek néhány kérdőívet az ASD alapvető tüneteiről (szociokommunikatív működési és szenzoros problémák), valamint az aberrált viselkedésről, mint a vizsgálat elsődleges eredménymérője, valamint a gyomor-bélrendszeri tünetekről, mint másodlagos eredménymérőről. Miután a beavatkozás befejeződött (12 hónap), az ASD alapvető tüneteinek alapértékelése a gondozók által kitöltött rendellenes magatartások megismétlődnek. A gondozók heti gyomor-bélrendszeri tünetnaplókat is kitöltenek a vizsgálati időszak alatt.

további információkat gyűjtünk a vizsgálati populáció jellemzőinek leírására a kiinduláskor. Ez az információ magában foglalja az étkezési / étkezési szokásokat, az étkezési naplókat, a napsugárzást, a bőrszínt és az antropometriát (súly és magasság). Az utolsó látogatás során az étkezési/étkezési szokások alapértékelését megismételjük, a gyermekek súlyát/magasságát pedig megmérjük. Az eredményméréseket és a vizsgálati módszereket lásd az 1.táblázatban.

vérmintavétel és elemzés

a gyermekek vérmintáit három alkalommal veszik, kiindulási (1.szakasz – szűrés), 6 hónap (biztonsági intézkedések) és 12 hónap (végpont). Lásd az 1. táblázatot a táplálkozási biomarkerekről és a vizsgálati módszerekről. A nem éhgyomri vérmintákat gyermekgyógyászati személyzet felügyelete alatt gyűjtik össze, majd a Wdhb laboratóriumi szolgálat északi partján vagy Waitakere kórházaiban dolgozzák fel. A táplálkozási biomarkereket vénás vérmintából vizsgáljuk. Ezek a következők: 25 (OH) D, RBC zsírsavak, kalcium, albumin, vas vizsgálatok, B12-vitamin és folát, teljes vérkép és a-vitamin. Az RBC zsírsavakat a Wollongong Egyetem, NSW, Ausztrália, az A-vitamint pedig a Massey Egyetem, Auckland, Új-Zéland.

kérdőívek

az elsődleges eredménymérők az ASD alapvető tüneteinek és az egyidejűleg előforduló problémás viselkedések pszichológiai értékelése, amelyeket az 1.táblázat részletez. A másodlagos eredménymérés a gyomor-bélrendszeri problémák értékelése. Szabványosított utasításokat kapnak minden gondozó számára a kérdőívek kitöltéséről a HNRU-n tett látogatásuk során. Mielőtt a résztvevő elhagyja a HNRU kutatóit, ellenőrizze az összes választ a teljesség érdekében.

társadalmi válaszkészség skála, második kiadás (SRS-2) : az SRS-2 verziók a 2,5–4,5 és a 4,5-18 év közötti korcsoportokra vonatkoznak. Az SRS-2 azonosítja az ASDs-hez kapcsolódó társadalmi károsodást, és számszerűsíti annak súlyosságát a társadalmi tudatosság, a társadalmi információfeldolgozás, a kölcsönös társadalmi kommunikáció, a szociális szorongás/elkerülés és a sztereotip viselkedés/korlátozott érdekek területén . Az SRS-2 klinikai érvényességét és érzékenységét ASD-ben szenvedő populációkban határozták meg .

szenzoros feldolgozási intézkedések (spm) : a 2-5 és 5-12 éves korcsoportokra jellemző SPM verziókat kell használni. Az SPM értékeli az érzékszervi feldolgozást, tervezést és ötleteket (praxis) és a gyermekek társadalmi részvételét. A skálák mérik a társadalmi részvételt, a látást, a hallást, az érintést, a testtudatot (propriocepció), az egyensúlyt és a mozgást (vestibularis funkció), valamint a tervezést és ötleteket (praxis) . Ezt az eszközt szabványosították, validálták és ASD-ben szenvedő gyermekeknél alkalmazták .

Aberrant behavior Checklist (ABC) : az ABC a viselkedési problémák sokféleségét méri, nevezetesen az ingerlékenységet, a társadalmi visszahúzódást, a sztereotip viselkedést, a hiperaktivitást és a nem megfelelő beszédet . ASD-ben szenvedő gyermekeknél validálták, és széles körben alkalmazták az ASD kezelési kimenetelének vizsgálataiban .

gastrointestinalis tünetek kérdőív: a gastrointestinalis tünetek kérdőív kifejezetten ehhez a vizsgálathoz készült, és tartalmazza az ASD-ben szenvedő gyermekeknél leggyakrabban jelentett gastrointestinalis jeleket és tüneteket . A vizsgálat résztvevőinek gondozóit heti online naplókkal látják el, és felkérik, hogy rögzítsék, hogy a gyermeknek volt-e székrekedés, hasmenés, puffadás, hasi fájdalom, hányás/hányinger, hasi puffadás, megmagyarázhatatlan nappali ingerlékenység vagy/és megmagyarázhatatlan éjszakai ébredés az elmúlt héten, és ha igen, hányszor fordultak elő ezek. A gyomor-bélrendszeri tünetek kérdőívet nem validálták, de kérdéseket tartalmaz az ASD populációkban leggyakrabban jelentett gyomor-bélrendszeri tünetekről, vagy olyan viselkedésekről, amelyek a gyomor-bélrendszeri tünetek következményei lehetnek. Nem ismerünk validált eszközt az autista gyermekek gyomor-bélrendszeri tüneteinek értékelésére, és biztosan nem Új-Zélandon.

a gyermekek étkezési indexe (kocka): a DICE egy egyszerű étrend-minőségértékelő eszköz, amelyet a kutatócsoport fejlesztett ki az Új-zélandi Egészségügyi Minisztérium élelmiszer-és táplálkozási irányelvei alapján az egészséges gyermekek és fiatalok számára . Ezt az eszközt Új-Zéland egészséges, 2-8 éves (publikálatlan) gyermekeinek kohorszában validálták, és ebben a tanulmányban ASD gyermekeknél validálják a 4 napos becsült étkezési naplóval és biokémiai markerekkel szemben.

viselkedési gyermekgyógyászati etetési értékelési skála (Bpfas): a BPFAS egy egyszerű értékelési eszköz, amely méri a gyermek étkezési viselkedését, valamint a szülők hozzáállását és viselkedését. Ez egy 35 tételes skála kérdőív, amely 25 likert-skála (5 pont) kérdéseket tartalmaz a gyermek viselkedéséről és 10 dichotóm kérdést a szülők hozzáállásáról és viselkedéséről. A közelmúltban meghatározták a BPFA-K határértékeit . A BPFAS a legmegbízhatóbb szülő által beadott etetési kérdőív, jó belső érvényességgel és teszt-újra teszt megbízhatósággal .

négynapos becsült élelmiszernapló: az étrendi beviteli adatokat egy 4 napos becsült étkezési napló gyűjti össze, beleértve egy hétvégi napot. Az élelmiszer-napló pontos kitöltésére vonatkozó utasításokat az élelmiszer-napló tartalmazza. A résztvevők ingyenes postát kapnak, előre címzett boríték A füzet visszaküldéséhez. Az átlagos makro-és mikrotápanyag-bevitelt négy jelentett nap alatt értékelik a FoodWorks Professional Edition 7 használatával (Xryis Software, Brisbane, QLD, Ausztrália, 2012).

ebben a tanulmányban egy 4 napos étkezési naplót választottak a válaszadók magas terhelése és a hosszabb étkezési naplók, például a 7 napos étkezési napló időigényes jellemzői miatt. A tápanyagbevitel magas személyen belüli változása miatt ajánlott hosszabb ideig rögzíteni az étrendi bevitelt, hogy nagyon pontos becslést kapjunk a bevitelről. Ha azonban egy 4 napos étkezési napló véletlenszerűen fedi le a különböző napokat, akkor pontos becslést adhat az étrendi bevitelről .

a napsugárzással és a bőr színével, az étrend-kiegészítőkkel és az esetleges speciális étrenddel kapcsolatos információkat a kérdőívek kifejezetten a jelenlegi vizsgálat céljára tervezték. A napozás kérdőív tartalmaz egy kérdést a gondozó meggyőződéséről és a napsugárzással kapcsolatos attitűdjeiről, valamint a terhesség alatti lakóhely országáról és városáról, a születési idényről és a gyermek hőmérséklet-és fényérzékenységéről.

a gyógyszeres kezelés betartása/a vizsgálati protokoll betartása

a gondozók heti e-maileket kapnak, amelyek tartalmazzák az online Megfelelőségi és gyomor-bélrendszeri problémák naplójának linkjét, valamint egy tippet/tényt az autizmusról és a táplálkozási kérdésekről. A gondozókat telefonon veszik fel a kapcsolatot 1, 3, 6 és 9 hónapon keresztül morális célokra és a megfelelés ösztönzésére. A gondozók negyedéves próba hírleveleket is kapnak. A hírlevelek tartalmazzák a tanulmány frissítését, az ASD általános témáit, a gondozó tapasztalatait az adott témával kapcsolatban, valamint szórakoztatásokat/versenyeket a tanuló gyermekek számára.

új intervenciós anyagokat küldünk ki a résztvevőknek 4 havonta, a gondozókat pedig felkérjük, hogy helyezzék el az előző hónapok palackjait félre, a fel nem használt kapszulákkal együtt, amelyeket a következő látogatásukkor (6 vagy 12 hónap) vissza kell küldeni, amelyben a fel nem használt kapszulákat megszámolják és rögzítik. A kezelésnek való megfelelést úgy elemezzük, hogy megszámoljuk az egyes résztvevők fennmaradó kiegészítéseit, miután befejezték a beavatkozást.

nemkívánatos események

minden résztvevőt 6 hónapon belül visszahívnak vérvizsgálatra a D hipervitaminózis (szérum 25(OH)d >225 nmol/L) és a hiperkalcémia (szérum Ca > 2,7 mmol/L) ellenőrzésére. Az eredményeket egy harmadik fél ellenőrzi, aki nem vak (de nem vesz részt az eredmények elemzésében). A harmadik fél azonosítja a vérvizsgálati eredményeket, és elküldi azokat a vizsgálati gyermekgyógyásznak és a vezető nyomozónak felülvizsgálatra és ajánlásra, ha a gyermek szérum 25(OH)D vagy kalciumszintje meghaladja a biztonságos felső határt. Ha a 25 (OH)D koncentráció 225 nmol/L-nél van vagy közeledik, vagy ha hypercalcaemia van jelen, az adagot módosítani kell.

A Compliance és a gastrointestinalis tünetek naplóit hetente ellenőrzik, és minden mellékhatást rögzítenek a nemkívánatos események naplójában, hogy nyomon kövessék a gyermek általános egészségi állapotát és viselkedési reakcióit. Abban az esetben, ha bármilyen nemkívánatos események, a gyermek egészségügyi lesz szigorúbban ellenőrzik három-négy egymást követő héten, ha a kedvezőtlen esemény fennáll, a jelentések említett, a tárgyalás gyerekorvos, valamint nyomozót további vizsgálat.

az eredmények terjesztése

az élelmiszernapló kézhezvételét és elemzését, valamint a biokémiai vizsgálatok szűréskor történő befejezését követően minden résztvevő visszajelzési űrlapot kap. Antropometriai mérések, eredmények (vas tanulmányok, B12-vitamin, folsav, valamint teljes vérkép) is tartalmazza. Egyszer felvételi a tárgyalás befejeződött, a résztvevők, akik nem folytatódott a tárgyalás kap értesítést a D-vitamin, valamint RBC zsírsav szintje.

befejezésekor a tárgyalás, a résztvevőket tájékoztatni kell a kezelés megkezdése előtt, majd a végén a D-vitamin, valamint RBC zsírsav állapota, valamint, hogy viszik a hatóanyag vagy placebo adag. Ők is kap egy összefoglaló a pszichológiai vizsgálat eredményét SRS-2 SPM.

Résztvevők, illetve egyéb érdekelt (például egészségügyi szakemberek, a kerületi egészségügyi tanácsok, elsődleges egészségügyi szervezetek, ASD támogató csoportok) kap hozzáférést a tanulmány megállapításait. Az eredményeket nemzeti és nemzetközi tudományos konferenciákon mutatják be, előkészítik a lektorált folyóiratokban való közzétételre, és eljuttatják a médiába.

adatkezelés és statisztikai elemzés

a név és a cím adatait a Microsoft Excel tárolja. Jelölőnégyzetek rögzíti a fejlődés egy résztvevő keresztül a tanulmány. Az összes többi adatot egyetlen Microsoft Excel táblázatba kell beírni, a résztvevőket csak egyedi Tárgyszámuk alapján azonosítják. A kérdőívek pontozásait a pszichológus és a kutató kétszer ellenőrzi. Az összes bejegyzést a kutatócsoport egy másik tagja kétszer ellenőrzi. Minden dokumentumot biztonságosan, bizalmas körülmények között tárolunk és 5 évig archiválunk.

a statisztikai elemzést az IBM SPSS 21.0 verziójával végezzük (IBM Corp; megjelent 2012-ben. IBM SPSS statisztikák A Windows 21.0 verzióhoz. Armonk, NY, USA). A statisztikai elemzés megkezdése előtt az adatokat megtisztítják és ellenőrzik a kódolási hibák szempontjából. Az adatok hitelességét a pontosság és teljesség véletlenszerű ellenőrzésével, valamint a forrásadatok összevetésével ellenőrizzük. A változókat a Kolmogorov-Smirnov teszt, a Shapiro-Wilk teszt és a normalitás parcellák segítségével teszteljük. A nem normálisan elosztott adatokat logaritmikus transzformációkkal közelítő normál eloszlásokká alakítják át. Az adatokat megfelelően jelentik átlagként (szórás) a normálisan elosztott adatok esetében; a transzformált adatokat az összefoglaló statisztikákból geometriai átlagokká (95% CI) alakítják át, a nem normálisan elosztott adatokat mediánként (25., 75. percentilis), a kategorikus adatokat pedig gyakoriságként írják le.

a résztvevők kiindulási jellemzőit összehasonlítjuk a csoportok között varianciaanalízis (ANOVA) a paraméteres adatokhoz és a Kruskal-Wallis teszt a nem paraméteres adatokhoz. Az elsődleges elemzés, összehasonlítva a kezelés hatásait az autizmus tüneteire 12 hónap alatt, általánosított lineáris vegyes modellek alkalmazásával hajtják végre eljárás. A kezelések és az idő rögzített hatásokként szerepelnek, és a beavatkozások és az idő közötti kölcsönhatásokat tesztelik. Ha jelentős fő hatások vagy interakciós hatások figyelhetők meg, post-hoc elemzést végeznek Bonferroni kiigazításokkal. Lehetséges zavaró tényezők és hatásmódosítók (pl. kiindulási 25 (OH) D és RBC zsírsavak, az autizmus tünetei a kiinduláskor, életkor és nem) a modellen belül vizsgálják. Logisztikai regressziót fogunk használni a multiplikatív interakció tesztelésére. Rothman szinergiaindexe, amely egyenlő lenne az additivitás alatti egységgel, és kevesebb, mint az egység, amikor antagonizmusra utal, felhasználható a D-vitamin és az omega-3 Lcpufák feltételezett interakciós hatásának vizsgálatára az ASD alapvető tüneteire.

a másodlagos elemzés, összehasonlítva a kezelés hatását a gyomor-bélrendszeri tünetekre 12 hónap alatt ugyanazzal az eljárással hajtják végre. Lehetséges zavaró tényezők és hatásmódosítók (pl. bármely gyomor-bélrendszeri tünet és gyógyszer/kiegészítő alkalmazás kiindulási diagnózisa) a modellen belül meg kell vizsgálni.

a résztvevők közötti különbségeket, akik befejezik és kilépnek a vizsgálatból, független t–teszt vagy a Mann-Whitney teszt segítségével elemezzük folyamatos változók (pl. életkor) és Chi-négyzet kategorikus változók (pl. nem).

az ASD-tünetek súlyossága és a táplálkozási állapot (különösen a D-vitamin, a vörösvértest-zsírsavak, a vas és a B12-vitamin) közötti összefüggéseket a kiinduláskor regresszióanalízissel kell értékelni. Az információkat a kezelésre adott válasz értékelésére használják táplálkozási állapotú tercilek szerint, amelyek jelentős kapcsolatot mutatnak az ASD súlyosságával.

mind a kezelési szándék, mind a protokollonkénti elemzéseket felhasználják, bár az elsődleges elemzési módszer a kezelési szándék lesz. A statisztikai szignifikancia Kétfarkú teszteken alapul, p <0,05 szignifikánsnak tekinthető.