G418

G418 (Geneticin, Invitrogen): oldjuk fel vízben 200 mg/ml, szűrjük sterilizálni, és tárolja a aliquots a 4 db C.

clonNAT (nourseothricin, Werner BioAgents, Jena, Németország): oldjuk fel vízben 100 mg/ml, szűrjük sterilizálni, és tárolandó alikvotokban 4 db C.

Kanavanin (l-Kanavanin-szulfát só, szigma, C-9758): oldjuk fel vízben 100 mg/ml-en, szűrjük sterilizáljuk, és alikvotokban tároljuk 4 db C.

tializin (s-(2-aminoetil)-L-cisztein-hidroklorid, Sigma, a-2636): Dissolve in water at 100 mg/ml, filter sterilize, and store in aliquots at 4 °C.

Amino acids supplement powder mixture for synthetic media (complete): Contains 3 g adenine (Sigma), 2 g uracil (ICN), 2 g inositol, 0.2 g para-aminobenzoic acid (Acros Organics), 2 g alanine, 2 g arginine, 2 g asparagine, 2 g aspartic acid, 2 g cysteine, 2 g glutamic acid, 2 g glutamine, 2 g glycine, 2 g histidine, 2 g isoleucine, 10 g leucine, 2 g lysine, 2 g methionine, 2 g phenylalanine, 2 g proline, 2 g serine, 2 g threonine, 2 g tryptophan, 2 g tyrosine, and 2 g valine (Fisher). A Drop-out (DO) porkeverék a fenti összetevők kombinációja, levonva a megfelelő kiegészítést. Két gramm DO por keveréket használunk literenként.

aminosavak kiegészítése sporulációs közeghez: 2 g hisztidint, 10 g leucint, 2 g lizint, 2 g uracilt tartalmaz; 0,1 g aminosav-kiegészítő porkeveréket használunk liter sporulációs közegre.

glükóz (dextróz, Fisher): készítsen elő 40% – os oldatot, autoklávot, és szobahőmérsékleten tárolja.

YEPD: Adjunk hozzá 120 mg adenint (Sigma), 10 g élesztőkivonatot, 20 g peptont, 20 g bacto agart (BD Difco) 950 ml vízhez egy 2 literes lombikban. Autoklávozás után adjunk hozzá 50 ml 40% – os glükóz oldatot, alaposan keverjük össze, hűtsük le ~ 65 6CC-ra, majd öntsük a lemezeket.

YEPD + G418: hűtsük le a yepd táptalajt ~ 65 C-ig, adjunk hozzá 1 ml G418 törzsoldatot (végső koncentráció 200 mg/l), alaposan keverjük össze, és öntsük a lemezeket.

YEPD + clonNAT: hűtsük le a yepd táptalajt ~ 65 C-ig, adjunk hozzá 1 ml clonNAT törzsoldatot (végső koncentráció 100 mg/l), alaposan keverjük össze, és öntsük a lemezeket.

YEPD + G418 / clonNAT: Hűtsük le a YEPD táptalajt ~ 65 C-ig, adjunk hozzá 1 ml G418-at (végső koncentráció 200 mg/l) és 1 ml clonNAT-ot (végső koncentráció 100 mg/l) törzsoldatot, alaposan keverjük össze, és öntsük a lemezeket.

dúsított sporuláció: adjunk hozzá 10 g kálium-acetátot (Fisher), 1 g élesztőkivonatot, 0,5 g glükózt, 0,1 g aminosavakat kiegészítő porkeveréket sporulációhoz, 20 g bacto agart 1 liter vízhez egy 2 literes lombikban. Autoklávozás után hűtsük le a közeget ~ 65 6CC-ra, adjunk hozzá 250 ml G418 törzsoldatot (végső koncentráció: 50 mg/l), alaposan keverjük össze, majd öntsük a tányérokat.

(SD/MSG)-his/Arg/Lys + kanavanin/tializin/G418: adjunk hozzá 1,7 g élesztő nitrogén bázist aminosavak vagy ammónium − szulfát (BD Difco) nélkül, 1 g MSG (l-glutaminsav nátriumsó-hidrát, Sigma), 2 g aminosav kiegészítő porkeverék (DO-His/Arg/Lys), 100 ml víz egy 250 ml-es lombikban. Adjunk hozzá 20 g bacto agart 850 ml vízhez egy 2 literes lombikban. Autokláv külön. Keverjük össze az autoklávozott oldatokat, adjunk hozzá 50 ml 40% – os glükózt, hűvös közeget ~ 65 CA-hoz, adjunk hozzá 0,5 ml kanavanint (50 mg/l), 0,5 ml tializint (50 mg/l) és 1 ml G418 (200 mg/l) törzsoldatot, alaposan keverjük össze, és öntsük a lemezeket. Az ammónium-szulfát gátolja a G418 és a clonNAT működését. Ezért ezeket az antibiotikumokat tartalmazó szintetikus táptalajt nitrogénforrásként mononátrium-glutaminsavval készítik (Cheng et al., 2000).

(SD/MSG) − His/Arg/Lys + kanavanin/tializin/clonNAT: adjunk hozzá 1,7 g élesztő nitrogén bázist aminosavak vagy ammónium-szulfát nélkül, 1 g MSG, 2 g aminosav kiegészítő porkeverék (DO-His/Arg/Lys), 100 ml vizet egy 250 ml-es lombikban. Adjunk hozzá 20 g bacto agart 850 ml vízhez egy 2 literes lombikban. Autokláv külön. Kombinálja az autoklávozott oldatokat, adjon hozzá 50 ml 40% glükózt, hűvös közeget ~ 65cc-hez, adjon hozzá 0-t.5 ml kanavanin (50 mg/l), 0,5 ml tializin (50 mg/l) és 1 ml klonnát (100 mg/l) törzsoldat, alaposan keverjük össze, és öntsük a lemezeket.

(SD / MSG) − his/Arg/Lys + kanavanin/tializin/G418/clonNAT: adjunk hozzá 1,7 g élesztő nitrogénbázist aminosavak vagy ammónium-szulfát nélkül, 1 g MSG, 2 g aminosav-kiegészítő porkeveréket (DO-His/Arg/Lys), 100 ml vizet egy 250 ml-es lombikban. Adjunk hozzá 20 g bacto agart 850 ml vízhez egy 2 literes lombikban. Autokláv külön. Kombinálja az autoklávozott oldatokat, adjon hozzá 50 ml 40% glükózt, hűvös közeget ~ 65 C-ig, adjon hozzá 0,5 ml Kanavanint (50 mg/l), 0.5 ml tializin (50 mg/l), 1 ml G418 (200 mg/l) és 1 ml clonNAT (100 mg/l) törzsoldat, alaposan keverjük össze, és öntsük a lemezeket.

(SD/MSG) teljes: adjunk hozzá 1,7 g élesztő nitrogén bázist aminosavak vagy ammónium-szulfát nélkül, 1 g MSG, 2 g aminosav-kiegészítő porkeveréket (teljes), 100 ml vizet egy 250 ml-es lombikban. Adjunk hozzá 20 g bacto agart 850 ml vízhez egy 2 literes lombikban. Autokláv külön. Kombináljuk az autoklávozott oldatokat, adjunk hozzá 50 ml 40% – os glükózt, alaposan keverjük össze, hűtsük le a közeget ~ 65 6c-ra, és öntsük a lemezeket.

SD-His / Arg / Lys + kanavanin / tializin: Add 6.7 g élesztő nitrogén bázis aminosavak nélkül (BD Difco), 2 g aminosav kiegészítő por keverék (DO − His/Arg/Lys), 100 ml víz egy 250 ml-es lombikban. Adjunk hozzá 20 g bacto agart 850 ml vízhez egy 2 literes lombikban. Autokláv külön. Keverjük össze az autoklávozott oldatokat, adjunk hozzá 50 ml 40% – os glükózt, hűvös közeget ~ 65 C-ig, adjunk hozzá 0,5 ml kanavanint (50 mg/l) és 0,5 ml tializint (50 mg/l) törzsoldatokat, alaposan keverjük össze, és öntsük a lemezeket. Ez a táptalaj nem tartalmaz olyan antibiotikumokat, mint a G418 vagy a clonNAT, ezért ammónium-szulfátot használnak nitrogénforrásként.

SD-Leu/Arg / Lys + kanavanin / tializin: adjunk hozzá 6,7 g élesztő nitrogén bázist aminosavak nélkül, 2 g aminosav − kiegészítő porkeveréket (DO-Leu/Arg/Lys), 100 ml vizet egy 250 ml-es lombikban. Adjunk hozzá 20 g bacto agart 850 ml vízhez egy 2 literes lombikban. Autokláv külön. Keverjük össze az autoklávozott oldatokat, adjunk hozzá 50 ml 40% – os glükózt, hűvös közeget ~ 65 C-ig, adjunk hozzá 0,5 ml kanavanint (50 mg/l) és 0,5 ml tializint (50 mg/l) törzsoldatokat, alaposan keverjük össze, és öntsük a lemezeket.