Giemsa-folt: elv, eljárás és eredmények

a Giemsa-folt a Romanowsky-folt egy típusa, amelyet Gustav Giemsa német kémikusról neveztek el, aki festékoldatot készített. Elsősorban a maláriás paraziták vérkenetben történő bemutatására tervezték, de a szövettanban is alkalmazzák a vérkenet rutinszerű vizsgálatára.

a Giemsa-folt felhasználása

a maláriás paraziták festésén kívül a Giemsa-foltnak számos alkalmazása van a mikrobiológiában és a patológiában:

• a Giemsa foltot a differenciális fehérvérsejtszám megszerzésére használják.
• azt is használják, hogy megkülönböztessék a nukleáris és citoplazmatikus morfológia a különböző vérsejtek, mint a vérlemezkék, vörösvértestek, WBC-k.
• a mikrobiológiában a Giemsa foltot a Chlamydia trachomatis, Borrelia Fajok befogadási testének festésére használják,és ha Wayson foltja nem áll rendelkezésre, a Yersinia pestis festésére. A Giemsa foltot Histoplasma capsulatum, Pneumocystis jiroveci, Klebsiella granulomatis, Penicillium marneffei és esetenként bakteriális kapszulák festésére is használják.
• ezt a foltot a citogenetikában is használják a kromoszómák festésére és a kromoszóma-rendellenességek azonosítására. Általában használják G-sávozás (Giemsa-sávozás)

a Giemsa folt elve

a Giemsa folt egy differenciális folt, amely azúrkék, metilénkék és eozin festék keverékét tartalmazza. Specifikus a DNS foszfátcsoportjaira, és ott kötődik, ahol nagy mennyiségű adenin-timin kötés van.

azúrkék és az eozin savas színezékek, amelyek változóan festik a sejtek alapvető összetevőit, például a citoplazmát, a granulátumot stb.

a metilénkék bázikus festékként működik, amely megfesti a savas komponenseket, különösen a sejtmagot.

metanol jár, mint egy fixáló, valamint a sejtes folt. A fixáló nem teszi lehetővé a sejtek további változását, és az üveglemezhez tapad.

a Giemsa-folt összetétele

a Giemsa-foltot házban készíthetjük Giemsa-foltpor felhasználásával, vagy kereskedelmi forgalomban is előállítható. Mindkettő alapvető összetevői azonosak; a felhasználástól függően azonban hígításokat lehet végezni.

eljárás

A. a folt házon belüli előkészítéséhez:

1. mérjük meg a szükséges mennyiségű porfoltot, és tegyük át egy tiszta, száraz, 1 literes palackba. Adjunk hozzá metanolt és jól keverjük össze.
2. mérje meg, Adjon hozzá glicerint, és jól keverje össze.
3. helyezze az üveg foltot vízfürdőbe 50-60 6CC-on vagy 37ccc-n 2 órán át, gyakori keverés mellett.
4. Címkézze fel a palackot és tárolja hűvös, sötét helyen, szilárd dugóval.

MEGJEGYZÉS: Ha a foltkészítés bármely lépése során víz kerül érintkezésbe, a folt elrontódik, ezért használja, szárítsa meg az üvegeszközöket, és tárolja olyan körülmények között, ahol vízzel nem érintkezne.

• szűrjük le a foltot a Whatman filterpaper No.1 segítségével, és hígítsuk fel 7,2 pH-ra pufferelt vízzel, hogy

B munkaoldatokat készítsünk. A tárgylemezek festéséhez

az alkalmazott festési, koncentrációs és időzítési módszer a céltól függően változik, például a vékony vérkenetek 1:20 arányban hígítják az alapanyagot, míg a vastag vérkenetek esetében 1:50 arányban hígítják.

Forhin Blood kenet

1. rögzítse a levegőn szárított fóliát abszolút metanolban úgy, hogy a fóliát rövid ideig (két merítéssel) abszolút metanolt tartalmazó Koplin edénybe meríti.
2. távolítsa el és hagyja megszáradni a levegőt.
3. folt hígított Giemsa folttal (1:20, térfogat / térfogat) 20 percig (1:20 hígítás után adjunk hozzá 2 ml Giemsa törzsanyagot 40 ml pufferelt vízhez egy Coplin edényben).
4. mossa le úgy, hogy a tárgylemezt rövid időre pufferelt vízbe mártja (egy vagy két merítés).
   megjegyzés: a túlzott mosás elszínezi a filmet.
5. hagyja a levegőt függőleges helyzetben megszáradni. Először 40x-es mikroszkóp alatt figyeljük meg, majd olajmerülő lencsével

vastag vérkenetek

1. hagyjuk a filmet alaposan megszáradni néhány órán keresztül vagy egy éjszakán át. Ne szárítsa a filmeket inkubátorban vagy hővel, mert ez rögzíti a vért és zavarja a vörösvértestek lizációját.
   Megjegyzés: Ha a malária gyors diagnosztizálására van szükség, a vastag filmeket a szokásosnál kissé vékonyabbá lehet tenni, 1 órán át száradni hagyni, majd megfesteni.
2. NEM JAVÍTHATÓ.
3. foltot hígított Giemsa folttal (1:50, térfogat/térfogat) 50 percig (1:50 arányú hígításhoz adjunk hozzá 1 ml törzs Giemsa-t 50 ml pufferelt vízhez egy Coplin edényben)
4. mossuk úgy, hogy a filmet pufferelt vízbe helyezzük 3-5 percre.
5. hagyja a levegőt függőleges helyzetben megszáradni, és először mikroszkóp alatt figyelje meg 40x-en, majd olajmerülő lencsével

a Chlamydia trachomatis

kövesse a fent említett lépéseket, de a hígított foltot 1:40 arányban hígítsa (adjon hozzá 0,5 ml törzs Giemsa oldatot 19,5 ml pufferelt vízhez), és hagyja a foltot 90-120 percig.

megfigyelés:

mikroszkópos megfigyelés során a sejtszervecskéket, baktériumokat és parazitákat morfológiájuk és színük alapján különböztetik meg;