egyes mikroorganizmusok képesek a ként (ként) tartalmazó vegyületeket hidrogén-szulfiddá redukálni az anyagcsere során, amelyet általában laboratóriumi azonosításuk tesztmérőjeként alkalmaznak. Számos módszert alkalmaznak a mikroorganizmusok H2S termelésének kimutatására, amelyek a kén forrásától és a H2S képződésének jelzésére használt fémsóktól függően változnak. A SIM érzékenyebb a H2S kimutatásában, mint a TSI vagy a KIA, félszilárd jellege, a zavaró szénhidrátok hiánya, valamint a peptonizált vas indikátorként való használata miatt. Az ólom-acetát papír azonban 10-szer érzékenyebb, mint más adathordozók.
célok
annak meghatározása, hogy a mikroba kéntartalmú vegyületeket szulfidokká redukál-e hidrogén-szulfid gáz előállításához.
elv
egy vasvegyületet és egy kénvegyületet tartalmaz a vizsgálati közegben a hidrogén-szulfid gáz előállításának vizsgálatára. Hidrogén-szulfid keletkezik, ha a kénvegyületet a baktériumtörzs csökkenti. Ez a teszt tehát meghatározza, hogy a mikroba a kéntartalmú vegyületeket szulfidokká redukálja-e az anyagcsere folyamata során. A H2S-t bizonyos baktériumok állítják elő kéntartalmú aminosavak, például cisztin, metionin redukciójával vagy szervetlen kénvegyületek redukciójával, például tioszulfátokkal, szulfátokkal vagy szulfitokkal a fehérje lebomlása során, vagy amikor az anaerob légzés az elektronokat oxigén helyett kénre irányítja. Mindkét esetben H2S keletkezik (hidrogén-szulfid gáz), amely a vasvegyülettel reagálva a vas-szulfid fekete csapadékát képezi. A fekete szín a hidrogén-szulfid jelenlétének indikátora. Egy szervezet által termelt hidrogén-szulfid (H2S) gáz kimutatása. elsősorban az adott szervezet azonosításának elősegítésére szolgál.
Média:
ez a teszt több közeg használatával is elvégezhető, beleértve a tripla cukor vasat (TSI), a Kligler vas agart (KIA), a SIM médiumot és az ólom-acetát papírt.
- szulfit-indol motilitás (SIM) közeg a H2S kimutatására
ez a közeg vas-ammónium-szulfátot és nátrium-tioszulfátot tartalmaz, amelyek együttesen a hidrogén-szulfid előállításának indikátoraként szolgálnak. Hidrogén-szulfid előállítása kimutatható, ha vas-szulfidot, fekete csapadékot állítanak elő vas-ammónium-szulfát H2S gázzal reagálva.
összetétel:
Marhahúskivonat 3, 0 g pepton 30, 0 g vas-ammónium-szulfát 0, 2 g Nátrium-tioszulfát 0, 025 g Agar 3, 0 g végső pH ( 25 C-on) 7, 3 0.2 desztillált víz 1000ml
- vas agarok a H2S kimutatására
ez a közeg alkalmas a H2S enterobaktériumok általi termelésének kimutatására. A H2S-t a - közegben lévő vas-citráttal detektáljuk ólom-acetát papír teszt a H2S
kimutatásához ha érzékeny technika szükséges a H2S termelés kimutatására, az ólom-acetát papír teszt ajánlott.
eljárás
I. szulfit indol motilitás (SIM) táptalajban
- szúrásos beoltással oltsuk be a szervezetet jelölt csőbe.
- inkubáljuk a beoltott csöveket 37cc hőmérsékleten 24-48 órán keresztül.
- figyeljük meg a fekete csapadék képződését a közegben.
II. Kligler vasagarban (KIA) és Triplacukor Vasagarban (TSIA)
- a vizsgált szervezetet be kell oltani a KIA-ba, és megfelelő hőmérsékleten kell inkubálni egy éjszakán át.
- figyelje meg a közeg feketedését.
III. ólom-acetát papír teszt
- oltsunk be egy csövet vagy palackot steril pepton vízzel vagy táptalajjal a vizsgált organizmussal.
- helyezzen egy ólom-acetát papírcsíkot a palack vagy a cső nyakába a közeg fölé, és jól dugja be.
- inkubáljuk az oltott táptalajt 35-37oC-on, és naponta vizsgáljuk meg, hogy a csík alsó része nem feketedett-e el.
eredmények
- pozitív eredmény: feketedés a táptalajon
- negatív eredmény:Nincs feketedés a táptalajon
- főleg az Enterobacteriaceae család tagjainak azonosítását segíti elő, és alkalmanként más baktériumok, például Bacteroidessps és Brucella sps megkülönböztetésére szolgál.
- a vizsgálat segíti az Enterobacteriaceae (enterics) tagjainak azonosítását és megkülönböztetését más Gram – bacillusoktól.
- különösen hasznos a szalmonella, a Francisella és a Proteus Fajok azonosításában.
korlátozások
- a szacharózt használó és a H2S termelését eredményező enzimmechanizmust elnyomó szervezetekre vonatkozó ÁME-ben a H2S termelése gátolható.
- az ólom-acetát mérgező a baktériumokra, és gátolhatja egyes baktériumok szaporodását. Ne engedje, hogy a Média megérintse a szalagot.
- a teljes azonosítás érdekében ajánlott biokémiai, immunológiai, molekuláris vagy tömegspektrometriás vizsgálatot végezni tiszta tenyészetből származó kolóniákon.
- Tille, P. M., & Forbes, Ba (2014). Bailey & Scott diagnosztikai mikrobiológiája (tizenharmadik kiadás.). St. Louis, Missouri: Elsevier.
- Cappuccino J. G. és Sherman N. 2008. Mikrobiológia: laboratóriumi kézikönyv, 8. kiadás. Pearson Benjamin Cummings, San Francisco, Kalifornia, USA.
- www.vumicro.com/vumie/help/VUMICRO/Hydrogen_Sulfide_Production_Test.htm
- mic.microbiologyresearch.org/content/journal/micro/10.1099/00221287-8-3-397
- https://microbenotes.com/hydrogen-sulfide-h2s-production-test/
- www.microbiologyresearch.org/docserver/fulltext/micro/8/3/mic-8-3-397.pdf?expires=1543332392&id=id&accname=guest&checksum=C42277C712F05E5951241893FC8EC3F7
- spot.pcc.edu/~jvolpe/b/bi234/lab/differentialMedia/H2Sproduction.html
- https://senthilprabhu.blogspot.com/2017/10/hydrogen-sulphide-h2s-production-test.html
- https://jb.asm.org/content/jb/10/5/439.full.pdf
