Műszaki információk és kapcsolódó termékek
a natív torma-peroxidáz termékjellemzői
kihalási együttható: EmM = 100 403 nm-en mérve.1
Molekulatömeg: (kb. 44 kDa)
tartalmazza a polipeptidláncot (33 890 Dalton), a hemint plusz Ca2+ (kb. 700 Dalton),
és szénhidrát (9400 Dalton).3
izoelektromos pont: az izoenzimek 3,0 – 9,0
között vannak, legalább hét HRP izoenzim létezik.2
a Tormaperoxidázt (HRP) a tormagyökérből (Amoracia rusticana) izolálják, és a peroxidázok ferroprotoporfirin csoportjába tartozik. A HRP egyláncú polipeptid, amely négy diszulfidhidat tartalmaz. Ez egy glikoprotein, amely 18% szénhidrátot tartalmaz. A szénhidrát összetétele galaktózból, arabinózból, xilózból, fukózból, mannózból, mannozaminból és galaktózaminból áll, az adott izozimtól függően.2
szubsztrát specificitás
HRP könnyen kombinálható hidrogén-peroxiddal (H2O2), és az így kapott komplex sokféle kromogén hidrogéndonort oxidálhat. Kemilumineszcens szubsztrátokat, például luminolt és izoluminolt, valamint fluorogén szubsztrátokat, például tiramint, homovanillinsavat és 4–hidroxifenil-ecetsavat is használhat.
az enzim Explorer szubsztrát indexe számos kromogén és kemilumineszcens hidrogén donorhoz kapcsolódik, amelyeket a peroxidáz aktivitás vizsgálatára használnak.
inhibitorok
a következő vegyületek a torma–peroxidáz inhibitorai: nátrium–azid, cianid, L-cisztin, dikromát, etilén-tiokarbamid, hidroxil-amin, szulfid, vanadát, p-amino-benzoesav, Cd+2, Co+2, Cu+2, Fe+3, Mn+2, Ni+2, Pb+2.4
pH-függőség
a pH optimális a HRP 6,0-6,5 tartományban van. A 7,5 pH-értékű aktivitás a maximális érték 84% – a. Az enzim a legstabilabb az 5,0-9,0 pH-tartományban.5
Alkalmazások
a torma-peroxidázt széles körben használják az immunglobulinok címkéjeként számos különböző immunokémiai alkalmazásban, beleértve az ELISA-t, az immunoblottingot és az immunhisztokémiát. A HRP számos különböző módszerrel konjugálható antitestekkel, beleértve a glutáraldehidet, a periodát oxidációt, diszulfidkötéseken keresztül, valamint amino-és tiol-irányított kereszt-inkereken keresztül. A HRP az antitestek legkívánatosabb címkéje, mivel ez a legkisebb és legstabilabb a három legnépszerűbb enzimcímke közül (HRP, alkalikus foszfatáz és B-galaktozidáz), glikozilezése pedig alacsonyabb nem-specifikus kötődést eredményez.6 a glutáraldehid és a periodát konjugációs módszereket leíró protokollok áttekinthetők Harlow, E. et al.7
számos kromogén és kemilumineszcens detektáló reagenst kínálunk blotting, szövettani és ELISA alkalmazásokhoz.
HRP konjugált antitestek teljes sorát is kínáljuk.
előkészítési utasítások
az oldószer kiválasztása a tervezett alkalmazástól függ. A porított enzimek oldható víz vagy 0,1 M foszfátpuffer, pH 6 (10 mg/mL). A szuszpenzió (P6140) vízzel hígítható.
Tárolás/stabilitás
a porított peroxidázokat hűtőben kell tartani 2-8 C. A fagyasztó tárolása szintén elfogadható, de nem szükséges. A szuszpenziót (P6140) 2-8 kb C. megfelelő tárolás esetén ezeknek a termékeknek az eltarthatósága legalább két év.
liofilizált porok hőmérsékleti stabilitása
oldatok hőmérsékleti stabilitása
oldatok stabilitása vs.pH
oldatok stabilitása vs. koncentráció
RZ profil
RZ (Reinheitszahl): az abszorbancia Arány A403/a275. Ez a peroxidáz hemin tartalmának mértéke, nem pedig az enzimaktivitás. Még a magas RZ értékű készítmények is alacsony enzimaktivitással rendelkezhetnek. A fehérjék, például a peroxidáz elleni antitestek konjugálásához válasszon legalább 3,0 RZ értékű peroxidázt.
Spectrophotometric Method to Determine the RZ Value for Peroxidase
Peroxidase Enzymes for Labeling
« menü
