大腸菌ベータクランプの動態とDNA負荷への影響

スライディングクランプは、生命のすべての領域に見られ、細胞が分裂するたびに必要とされる効率的なDNA複製、およびDNA上のトラフィックの調整に不可欠です。 大腸菌(Escherichia coli)は、大腸菌(E. 大腸菌)ベータクランプはdnaポリメラーゼIIIと関連付け、DNAの複製に必要なprocessivityの高度を促進するdnaNの遺伝子によってコードされる二つの同一の単量体から スライディングクランプタンパク質は開き、ATPの存在下でクランプローダーによって特定のDNA構造上にロードされます。 我々は、二つのインターフェイスのいずれかでホモ二量体を制約リンクベータクランプを使用してベータの機能に異なるドメインの貢献への洞察を得る 通常、ベータクランプのホモ二量体構造は、それがクランプ上の特定のタンパク質相互作用部位で同時に複数のタンパク質に結合し、分子ツールベルトとし したがって、DNA損傷耐性の過程におけるスライディングクランプの役割のより良い理解は、一つのインターフェイスまたは結合部位がDNAロードまたは他の この構築物を作成するために、リンカーの長さおよび配列、ならびに発現条件を最適化した。 結合β蛋白質を熱変性アッセイにより特性化し,野生型βと同等の熱安定性を示した。 Atpアーゼアッセイでは、無機リン酸塩の同様の量は、クランプローダーは、ベータクランプの両方のバージョンと相互作用することができることを示す、リンクベー 現在、我々は、リンクされた野生型ベータ版は、プライマー拡張アッセイにおけるポリメラーゼのプロセスを改善するかどうかを検討しています。 我々は現在、インターフェイスまたはパートナータンパク質結合部位のいずれかでの残基の重要性をテストするために、野生型ベータとリンクベータの変異体を構築し、特性化しています。



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