N-terminal sequencingは、しばしばEdman sequencingまたはEdman degradationと呼ばれ、タンパク質研究において重要な技術であり、新しいタンパク質配列データを得ることができるユニークなアプローチである。 それはまた速い蛋白質の表現の確認のための好まれた技術です。
このアプローチの化学は、1950年にスウェーデンのルンド大学のP.Edmanによって最初に導入され、オーストラリアのメルボルンでの研究中にさらに発展し、最初の自動化されたペプチド配列決定装置であると考えられているものになった。
エドマンの化学
図1. N末端タンパク質配列決定のためのエドマン分解化学。
加水分解されたN末端標識アミノ酸を生成する化学反応を図1に示す。 各サイクルには基本的に3つのステップが含まれます:
- フェニルイソチオシアネート（ＰＩＴＣ，Ｅｄｍａｎ試薬）を塩基性条件下でポリペプチド鎖のα-アミンにカップリングしてフェニルチオカルバミル（ＰＴＣ）部分を形成する。
- 穏やかな酸性条件の下の開裂はポリペプチドおよびanilinothiazolinone(ATZ)の付加されたアミノ酸の自由なアミノの末端を発生させます。
- 後者は抽出され、さらにより安定なフェニルチオヒダントイン（PTH）誘導体に変換される。 ＜５ ８ ２ ９＞得られたＰＴＨ残基を、ＨＰＬＣおよび標準のｐｔｈアミノ酸と比較した保持時間によって分析する。
副反応および副生成物
シーケンスサイクル化学およびワークアップはよく制御され、完全に定義された種をもたらし、分析中に検出される副生
図2に示すように、それらは主にサイクル中のPITC加水分解およびメタン分解に由来し、ジフェニルチオ尿素（DPTU）、N-フェニル、O-メチルチオカーボネート（PMTC）およびジフェニルウレア（DPU）、PTH-アミノ酸と共抽出および共溶出する副生成物が含まれる。
