G418

G418(Geneticin,Invitrogen):200mg/mlで水に溶解し、濾過滅菌し、アリコート中に4℃で保存する。

2

clonNAT(nourseothricin,Werner BioAgents,Jena,Germany):100mg/mlで水に溶解し、濾過滅菌し、4℃で保存する。

2

clonNAT(nourseothricin,Werner BioAgents,Jena,Germany):100mg/mlで水に溶解し、濾過滅菌し、4℃で保存する。<3 9 6 6>3<4 1 7 8>カナバニン(L−Canavanine Sulfate Salt、Sigma、C−9 7 5 8):1 0 0mg/mlの水に溶解し、濾過滅菌し、アリコート中4℃で保存する。<3 9 6 6>4<4 1 7 8>チアリシン(S−(2−aminoethyll)−L−システイン塩酸塩、Sigma、A−2 6 3 6): Dissolve in water at 100 mg/ml, filter sterilize, and store in aliquots at 4 °C.

5

Amino acids supplement powder mixture for synthetic media (complete): Contains 3 g adenine (Sigma), 2 g uracil (ICN), 2 g inositol, 0.2 g para-aminobenzoic acid (Acros Organics), 2 g alanine, 2 g arginine, 2 g asparagine, 2 g aspartic acid, 2 g cysteine, 2 g glutamic acid, 2 g glutamine, 2 g glycine, 2 g histidine, 2 g isoleucine, 10 g leucine, 2 g lysine, 2 g methionine, 2 g phenylalanine, 2 g proline, 2 g serine, 2 g threonine, 2 g tryptophan, 2 g tyrosine, and 2 g valine (Fisher). ドロップアウト(DO)粉末混合物は、上記の成分から適切なサプリメントを引いた組み合わせです。 DO粉末混合物の2グラムは、培地のリットル当たり使用されます。

6

sporulation媒体のためのアミノ酸の補足:2gのヒスチジン、10gのロイシン、2gのリジン、2gのウラシルを含んでいます;アミノ酸の補足の粉の混合物の0.1gはsporulation媒体のリットルごとに使用されます。

7

グルコース(デキストロース、フィッシャー):40%溶液を調製し、オートクレーブし、室温で保存する。

8

: 2lフラスコ中の水9 5 0mlに、1 2 0mgのアデニン(Sigma)、1 0gの酵母抽出物、2 0gのペプトン、2 0gのバクト寒天(B D Difco)を加える。 オートクレーブに入れた後、50mlの40%グルコース溶液を加え、十分に混合し、〜65℃に冷却し、プレートを注ぐ。

9

YEPD+G418:YEPD培地を~65°Cに冷却し、1mlのG418原液(最終濃度200mg/l)を加え、よく混合し、プレートを注ぎます。

10

YEPD+clonNAT:yepd培地を~65℃に冷却し、clonNAT原液1ml(最終濃度100mg/l)を加え、よく混合し、プレートを注ぎます。

11

YEPD+G418/clonNAT: YEPD培地を〜65℃に冷却し、1mlのG418(最終濃度200mg/l)および1mlのclonNAT(最終濃度100mg/l)ストック溶液を加え、十分に混合し、プレートを注ぎます。

12

濃縮胞子形成:10g酢酸カリウム(フィッシャー)、1g酵母エキス、0.5gグルコース、胞子形成のための0.1gアミノ酸補充粉末混合物、20gバクト寒天を1l オートクレーブに入れた後、培地を〜65°Cに冷却し、250μ lのG418原液(最終濃度50mg/l)を加え、完全に混合し、プレートを注ぎます。

13

(SD/MSG)−His/Arg/Lys+canavanine/thialysine/G418:1.7gの酵母窒素ベースw/oアミノ酸または硫酸アンモニウム(BD Difco)、1gのMSG(l-グルタミン酸ナトリウム塩水和物、Sigma)、2gのアミノ酸サプリメントパウダー混合物(DO−His/Arg/Lys)、100mlの水を250mlのフラスコに加える。 20gのバクト寒天を850mlの水に2lフラスコで加えます。 別のオートクレーブ。 オートクレーブに入れた溶液を混ぜ合わせ、50mlの40%グルコースを加え、培地を~65°Cに冷却し、0.5mlのカナバニン(50mg/l)、0.5mlのチアリシン(50mg/l)、および1mlのG418(200mg/l)ストック溶液を加え、十分に混合し、プレートを注ぐ。 硫酸アンモニウムはG418およびclonNATの機能を妨げます。 したがって、これらの抗生物質を含有する合成培地は、グルタミン酸ナトリウムを窒素源として作製される(Cheng e t a l., 2000).

14

(SD/MSG)−His/Arg/Lys+canavanine/thialysine/clonNAT:1.7g酵母窒素ベースw/oアミノ酸または硫酸アンモニウム、1g MSG、2gアミノ酸補足粉末混合物(DO−His/Arg/Lys)、100mlの水を250mlフラスコに 20gのバクト寒天を850mlの水に2lフラスコで加えます。 別のオートクレーブ。 オートクレーブに入れられた解決を結合して下さい、50のml40%のブドウ糖、~65°Cへの涼しい媒体を加えて下さい、0を加えて下さい。5mlのカナバニン(50mg/l)、0.5mlのチアリシン(50mg/l)、および1mlのclonNAT(100mg/l)原液をよく混合し、プレートを注ぐ。

15

(SD/MSG)−His/Arg/Lys+canavanine/thialysine/G418/clonNAT:1.7gの酵母窒素ベースw/oアミノ酸または硫酸アンモニウム、1gのMSG、2gのアミノ酸補給粉末混合物(DO−His/Arg/Lys)、100mlの水を250mlのフラ 20gのバクト寒天を850mlの水に2lフラスコで加えます。 別のオートクレーブ。 オートクレーブに入れられた解決を結合して下さい、50ml40%のブドウ糖を、~65°Cに涼しい媒体加えて下さい、0.5mlのCanavanineを加えて下さい(50mg/l)、0。5mlのチアリシン(50mg/l)、1mlのG418(200mg/l)および1mlのclonNAT(100mg/l)原液を、十分に混合し、版を注ぎなさい。

16

(SD/MSG)完了:1.7g酵母窒素ベースw/oアミノ酸または硫酸アンモニウム、1g MSG、2gアミノ酸サプリメント粉末混合物(完了)、100mlの水を250mlフラスコに 20gのバクト寒天を850mlの水に2lフラスコで加えます。 別のオートクレーブ。 オートクレーブに入れられた解決を結合し、40%のブドウ糖の50のmlを加え、完全に混合し、~65°cに媒体を冷却し、そして版を注ぎなさい。

17

SD−His/Arg/Lys+canavanine/thialysine:Add6.7gの酵母窒素ベースw/oアミノ酸(BD Difco)、2gのアミノ酸補足粉末混合物(DO−His/Arg/Lys)、250mlのフラスコ中の水100ml。 20gのバクト寒天を850mlの水に2lフラスコで加えます。 別のオートクレーブ。 オートクレーブに入れられた解決を結合し、50ml40%のブドウ糖を加え、~65°cに媒体を冷却し、0.5ml canavanine(50mg/l)および0.5ml thialysine(50mg/l)原液を加え、完全に混合し、そして版 この媒体はG418のような抗生物質を含んでいませんまたはclonNATおよび従ってアンモニウムの硫酸塩は窒素の源として使用されます。<3966>18<4178>SD−Leu/Arg/Lys+カナバニン/チアリシン:6.7gの酵母窒素ベースw/oアミノ酸、2gのアミノ酸サプリメント粉末混合物(DO−Leu/Arg/Lys)、100mlの水を250ml 20gのバクト寒天を850mlの水に2lフラスコで加えます。 別のオートクレーブ。 オートクレーブに入れられた解決を結合し、50ml40%のブドウ糖を加え、~65°cに媒体を冷却し、0.5ml canavanine(50mg/l)および0.5ml thialysine(50mg/l)原液を加え、完全に混合し、そして版



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