Giemsa Stain：原理、手順、および結果

Giemsa stainは、染料溶液を作成したドイツの化学者Gustav Giemsaにちなんで命名されたRomanowsky stainの一種です。 それは主に血の塗抹標本のマラリアの寄生虫のデモンストレーションのために設計されていたが、また血の塗抹標本の定期的な検査のための組織学

ギムサ染色の用途

マラリア原虫の染色とは別に、ギムサ染色は微生物学および病理学において様々な用途があります:

• Giemsaの汚れが差動白血球の計算を得るのに使用されています。
• また、血小板、赤血球、白血球などの様々な血液細胞の核および細胞質形態を区別するためにも使用されます。
• 微生物学では、Giemsa染色はChlamydia trachomatis、Borrelia種の封入体を染色するために使用され、Waysonの染色が利用できない場合は、yersinia pestisを染色するために使用されます。 またGiemsaの汚れがHistoplasma capsulatum、Pneumocystis jiroveci、Klebsiella granulomatis、Penicillium marneffeiおよび時折細菌のカプセルを汚すのに使用されています。
• この染色は、染色体を染色し、染色体異常を同定するための細胞遺伝学にも使用されています。 それはGバンディング（Giemsaバンディング）のために一般的です)

ギムサ染色の原理

ギムサ染色は、差動染色であり、紺碧、メチレンブルー、およびエオシン染料の混合物を含有する。 それはDNAの隣酸塩グループのために特定で、アデニン-チミンの結合の多量があるところにそれ自身を付けます。

紺碧およびeosinは細胞質、微粒等のような細胞の基本的な部品を可変的に汚す酸性染料です。

メチレンブルーは塩基性染料として作用し、酸性成分、特に細胞の核を染色する。

メタノールは細胞染色と同様に固定剤として作用する。 固定剤は細胞のそれ以上の変更を可能にしないし、ガラススライドに付着させる。

Giemsa染色の組成

Giemsa染色は、Giemsa染色粉末を用いて社内で調製することができ、または商業的に得ることができる。 両方の基本的な成分は同じですが、用途に応じて希釈することができます。

手順

a.汚れの社内準備のため:

1. 粉の汚れの必須量の重量を量り、きれいな、乾燥した1litre容量のびんに移して下さい。 メタノールを加えてよく混ぜる。
2. グリセロールを加えてよく混ぜる。
3. 汚れのボトルを50-60℃または37℃の水浴に2時間まで入れ、頻繁に混合します。
4. ボトルにラベルを付け、しっかりとしたストッパーで冷暗所に保管してください。

注:水が汚れの準備のあらゆるステップの間に接触して得れば、汚れは水接触がない条件で台無しになる、従って使用、乾燥したガラス製品および店。

• Whatman filterpaper no.1を使用して汚れをろ過し、働く解決を作るためにpH7.2に緩衝される水と薄くして下さい

B。 染色スライド

染色方法、濃度、染色のタイミングは目的によって異なり、例えば薄い血液塗抹標本はストックの1:20希釈を使用し、厚い血液塗抹標本は1:50希釈を使用する。

血液塗抹標本

1. 絶対メタノールを含むコプリンジャーにフィルムを短時間浸漬することにより、空気乾燥フィルムを絶対メタノールに固定する。
2. 取り外して空気を乾燥させます。
3. 希釈ギムサステイン(1:20,vol/vol)を20分間使用したステイン(A1:20希釈し、コプリンジャー内の緩衝水40mlに2mlのストックギムサを加える）。
4. 緩衝水のコプリン瓶の内外にスライドを簡単に浸漬して洗浄する（一つまたは二つの浸漬）。
   注:過度の洗浄は、フィルムを脱色します。
5. 垂直位置で空気を乾燥させます。 まず顕微鏡下で40倍で観察し、次に油浸レンズ

を使用して、血液塗抹標本

1. を使用して、フィルムを数時間または一晩完全に空気乾燥させます。 これは血液を固定し、赤血球の溶解を妨げるので、インキュベーターまたは熱でフィルムを乾燥させないでください。
   注:マラリアの迅速な診断が必要な場合は、厚膜を通常よりもわずかに薄くし、1時間乾燥させた後、染色することができます。
2. 修正しないでください。
3. 希釈Giemsa染色(1:50,vol/vol)で50分間染色(1:50希釈の場合は、コプリンジャー内の緩衝水50mlにストックGiemsa1mlを加える)
4. フィルムを緩衝水に3-5分間入れて洗浄する。
5. 空気を垂直方向に乾燥させ、最初に顕微鏡下で40倍で観察し、油浸レンズ

クラミジアトラコマチス

を使用して上記の手順に従いますが、1:40希釈の希薄染色（0.5mlの原液ギムサ溶液を19.5mlの緩衝水に加える）で染色を90-120分間放置します。

観察:

顕微鏡観察では、細胞小器官、細菌、寄生虫は、その形態と色に基づいて区別されます;