Glideklemmer finnes i alle livets domener og er avgjørende for effektiv DNA-replikasjon, som kreves hver gang en celle deler seg, samt for å koordinere trafikk PÅ DNA. Escherichia coli (E. coli) beta‐clamp er et ringformet protein bestående av to identiske monomerer kodet av dnaN-genet som forbinder MED DNA-polymerase III og letter den høye grad av prosessivitet som kreves FOR DNA-replikasjon. Glidende klemmeproteiner åpnes og lastes på spesifikke DNA-strukturer av klemmelastere i NÆRVÆR AV ATP. Vi tar sikte på å få innsikt i bidrag fra ulike domener til funksjonen til beta ved hjelp av en koblet beta-klemme som begrenser homodimeren på ett av to grensesnitt. Vanligvis gjør den homo-dimere strukturen til beta-klemmen det til å fungere som et molekylært verktøybelte, som binder mer enn ett protein samtidig på bestemte proteininteraksjonssteder på klemmen. Dermed vil en bedre forståelse av glideklemmenes rolle i PROSESSEN MED DNA-skadetoleranse bli samlet ved å undersøke om ett grensesnitt eller bindingssted er tilstrekkelig FOR DNA-lasting eller for andre proteininteraksjoner. For å lage denne konstruksjonen ble linkerlengden og sekvensen, samt uttrykksbetingelsene, optimalisert. De koblede beta-proteinene ble karakterisert gjennom en termisk denatureringsanalyse, og viste sammenlignbar termisk stabilitet til villtype beta. I En atpase-analyse ble lignende mengder uorganisk fosfat detektert i reaksjoner som inneholdt enten koblet beta eller villtype beta, noe som indikerer at klemmelasteren kan interagere med begge versjoner av beta-klemmen. For tiden, vi undersøker om koblet og vill‐type beta forbedre prosessivitet av en polymerase i en primer forlengelse assay. Vi bygger nå og karakteriserer varianter av villtype beta og koblet beta for å teste betydningen av rester på bare ett av grensesnittene eller partnerproteinbindingsstedene.
