G418

G418 (Geneticin, Invitrogen): Oppløs i vann ved 200 mg/ml, filtrer steriliser og lagre i alikvoter ved 4 °C.

clonNAT (nourseothricin, Werner BioAgents, Jena, Tyskland): Oppløs i vann ved 100 mg/ml, filtrer steriliser, og oppbevares i alikvoter på 4 °c.

Canavanine (L-Canavanine Sulfate Salt, Sigma, C-9758): Oppløs I Vann ved 100 mg/ml, filtrer steriliser og oppbevar i alikvoter ved 4 °c.

thialysine (s-(2-aminoethyl)-L-Cysteinhydroklorid, Sigma, A-2636): Dissolve in water at 100 mg/ml, filter sterilize, and store in aliquots at 4 °C.

Amino acids supplement powder mixture for synthetic media (complete): Contains 3 g adenine (Sigma), 2 g uracil (ICN), 2 g inositol, 0.2 g para-aminobenzoic acid (Acros Organics), 2 g alanine, 2 g arginine, 2 g asparagine, 2 g aspartic acid, 2 g cysteine, 2 g glutamic acid, 2 g glutamine, 2 g glycine, 2 g histidine, 2 g isoleucine, 10 g leucine, 2 g lysine, 2 g methionine, 2 g phenylalanine, 2 g proline, 2 g serine, 2 g threonine, 2 g tryptophan, 2 g tyrosine, and 2 g valine (Fisher). Drop-out (DO) pulverblanding er en kombinasjon av ovennevnte ingredienser minus riktig supplement. To gram AV DO-pulverblandingen brukes per liter medium.

Aminosyretilskudd for sporuleringsmedium: Inneholder 2 g histidin, 10 g leucin, 2 g lysin, 2 g uracil; 0,1 g av aminosyretilskuddspulverblandingen brukes per liter sporuleringsmedium.

Glukose (Dekstrose, Fisher): Forbered 40% oppløsning, autoklav og oppbevar ved romtemperatur.

YEPD: Tilsett 120 mg adenin (Sigma), 10 g gjærekstrakt, 20 g peptonpulver, 20 g bacto agar (Bd Difco) til 950 ml vann i en 2 l kolbe. Etter autoklavering, tilsett 50 ml 40% glukoseoppløsning, bland godt sammen, avkjøl til ~ 65 °C og hell plater.

YEPD + G418: Kjølig YEPD medium til ~ 65 °C, tilsett 1 ml g418 oppløsning (endelig konsentrasjon 200 mg / l), bland godt og hell plater.

YEPD + clonNAT: Kjølig yepd medium til ~ 65 °C, tilsett 1 ml clonNAT stamoppløsning (endelig konsentrasjon 100 mg / l), bland godt og hell plater.

YEPD + G418 / clonNAT: Cool YEPD medium til ~ 65 °C, tilsett 1 ml G418 (endelig konsentrasjon 200 mg / l) og 1 ml clonNAT (endelig konsentrasjon 100 mg/l) lageroppløsninger, bland godt og hell plater.

Beriket sporulering: Tilsett 10 g kaliumacetat (Fisher), 1 g gjærekstrakt, 0,5 g glukose, 0,1 g aminosyretilskudd pulverblanding for sporulering, 20 g bacto agar til 1 l vann i en 2 l kolbe. Etter autoklavering, kjølig medium til ~ 65 °C, tilsett 250 µ av G418 lageroppløsning (endelig konsentrasjon 50 mg / l), bland godt og hell plater.

(SD/MSG) − His / Arg / Lys + canavanine / thialysine / G418: Tilsett 1,7 g gjær nitrogen base w/o aminosyrer eller ammonium sulfate (Bd Difco), 1 g MSG (l-glutaminsyre natrium salt hydrat, Sigma), 2 g aminosyrer supplement pulver blanding (Do-His / Arg / Lys), 100 ml vann i en 250 ml kolbe. Tilsett 20 g bacto agar til 850 ml vann i en 2 l kolbe. Autoklav separat. Kombiner autoklaverte oppløsninger, tilsett 50 ml 40% glukose, kjølig medium til ~ 65 °c, tilsett 0,5 ml canavanin (50 mg/l), 0,5 ml thialysin (50 mg/l) og 1 ml G418 (200 mg/l) lageroppløsninger, bland godt og hell plater. Ammoniumsulfat hindrer Funksjonen Til G418 og clonNAT. Derfor er syntetisk medium som inneholder disse antibiotika laget med mononatriumglutaminsyre som en nitrogenkilde (Cheng et al., 2000).

(SD/MSG) − Hans / Arg / Lys + canavanine / thialysine / clonNAT: Tilsett 1,7 g gjær nitrogen base uten aminosyrer eller ammonium sulfate, 1 g MSG, 2 g aminosyrer supplement pulver blanding (Gjør-Hans / Arg / Lys), 100 ml vann i en 250 ml kolbe. Tilsett 20 g bacto agar til 850 ml vann i en 2 l kolbe. Autoklav separat. Kombiner autoklaverte løsninger, tilsett 50 ml 40% glukose, kjølig medium til ~ 65 °C, tilsett 0.5 ml canavanin (50 mg / l), 0,5 ml thialysin (50 mg / l) og 1 ml klonnat (100 mg/l) lageroppløsninger, bland godt og hell plater.

(SD/MSG) − Hans / Arg / Lys + canavanine / thialysine / G418 / clonNAT: Tilsett 1,7 g gjær nitrogen base uten aminosyrer eller ammonium sulfate, 1 g MSG, 2 g aminosyrer supplement pulver blanding (Gjør-Hans / Arg / Lys), 100 ml vann i en 250 ml kolbe. Tilsett 20 g bacto agar til 850 ml vann i en 2 l kolbe. Autoklav separat. Kombiner autoklaverte oppløsninger, tilsett 50 ml 40% glukose, kjølig medium til ~ 65 °C, tilsett 0,5 ml Canavanin (50 mg / l), 0.5 ml thialysin (50 mg / l), 1 ml G418 (200 mg/l) og 1 ml klonnat (100 mg/l) lageroppløsninger, bland godt og hell plater.

(SD/MSG) Komplett: Tilsett 1,7 g gjær nitrogen base uten aminosyrer eller ammonium sulfate, 1 g MSG, 2 g aminosyrer supplement pulver blanding (komplett), 100 ml vann i en 250 ml kolbe. Tilsett 20 g bacto agar til 850 ml vann i en 2 l kolbe. Autoklav separat. Kombiner autoklaverte løsninger, tilsett 50 ml 40% glukose, bland godt, kjølig medium til ~ 65 °C og hell plater.

SD − His/Arg/Lys + canavanine/thialysine: Legg til 6.7 g gjær nitrogen base uten aminosyrer (Bd Difco), 2 g aminosyrer supplement pulver blanding (DO-His / Arg / Lys), 100 ml vann i en 250 ml kolbe. Tilsett 20 g bacto agar til 850 ml vann i en 2 l kolbe. Autoklav separat. Kombiner autoklaverte oppløsninger, tilsett 50 ml 40% glukose, kjølig medium til ~ 65 °c, tilsett 0,5 ml canavanin (50 mg / l) og 0,5 ml thialysin (50 mg/l) lageroppløsninger, bland godt og hell plater. Dette mediet inneholder ingen antibiotika Som G418 eller clonNAT, og derfor brukes ammoniumsulfat som nitrogenkilde.

SD-Leu/Arg / Lys + canavanin / thialysin: Tilsett 6,7 g gjær nitrogen base uten aminosyrer, 2 g aminosyrer supplement pulver blanding (DO-Leu / Arg / Lys), 100 ml vann i en 250 ml kolbe. Tilsett 20 g bacto agar til 850 ml vann i en 2 l kolbe. Autoklav separat. Kombiner autoklaverte oppløsninger, tilsett 50 ml 40% glukose, kjølig medium til ~ 65 °c, tilsett 0,5 ml canavanin (50 mg / l) og 0,5 ml thialysin (50 mg/l) lageroppløsninger, bland godt og hell plater.