Giemsa Stain: Prinsipp, Prosedyre Og Resultater

Giemsa stain Er En Type Romanowsky stain, oppkalt etter Gustav Giemsa, en tysk kjemiker som skapte en fargestoff løsning. Det ble primært designet for demonstrasjon av malarial parasitter i blodutstryk, men det er også ansatt i histologi for rutinemessig undersøkelse av blodutstryk.

Bruk Av Giemsa Flekken

Bortsett fra farging malarial parasitter, Giemsa flekken har en rekke anvendelser I Mikrobiologi Og Patologi:

• Giemsa flekken brukes til å oppnå differensial hvite blodlegemer.
• Det brukes også til å skille mellom nukleær og cytoplasmisk morfologi av de forskjellige blodcellene som blodplater, Rbc, Wbc.
• I Mikrobiologi Brukes Giemsa-flekk til farging av inklusjonsorganer i Chlamydia trachomatis, Borrelia-arter, og Hvis Waysons flekk ikke er tilgjengelig, for å flekke Yersinia pestis. Giemsa stain brukes også Til å flekke Histoplasma capsulatum, Pneumocystis jiroveci, Klebsiella granulomatis, Penicillium marneffei og noen ganger bakterielle kapsler.
• denne flekken brukes også i cytogenetikk for å flekke kromosomene og identifisere kromosomavvik. Det er ofte brukt For G-banding (Giemsa-Banding)

Prinsipp For Giemsa-Flekk

Giemsa-flekk er en differensiell flekk og inneholder en blanding Av Azurblå, Metylenblå og eosin-fargestoff. DET er spesifikt FOR fosfatgruppene AV DNA og festes til hvor det er store mengder adenin-tyminbinding.

Azure og eosin er sure fargestoff som variabelt flekker de grunnleggende komponentene i cellene som cytoplasma, granulater etc.

Metylenblått fungerer som grunnfargen, som flekker de sure komponentene, spesielt kjernen i cellen.

Metanol fungerer som et fikseringsmiddel så vel som den cellulære flekken. Fikseringsmiddelet tillater ikke ytterligere endring i cellene og gjør at de holder seg til glassglasset.

Sammensetning Av Giemsa Flekken

Giemsa flekken kan fremstilles i huset Ved Hjelp Av Giemsa flekken pulver eller kan oppnås kommersielt. De grunnleggende ingrediensene i begge er de samme; fortynninger kan imidlertid gjøres avhengig av bruk.

PROSEDYRE

A. For intern forberedelse av flekk:

1. Vei den nødvendige mengden pulverflekk, og overfør til en ren, tørr flaske med 1 liter kapasitet. Tilsett metanol og bland godt.
2. Mål og tilsett glyserol og bland godt.
3. Plasser flasken med beis i vannbad ved 50-60°C eller ved 37°C i opptil 2 timer med hyppig blanding.
4. Merk flasken Og oppbevar den på et kjølig, mørkt sted med en fast propp.

MERK: hvis vann kommer i kontakt under noen trinn av klargjøring av flekken, flekken blir bortskjemt, derfor bruk, tørr glass og lagre i forhold der det ikke ville være vannkontakt.

• Filtrer flekken Med Whatman filterpaper no.1 og fortynn med vann bufret til pH 7.2 for å lage arbeidsløsninger

B. For farging lysbilder

metoden for farging, konsentrasjon og timing av flekken brukes varierer i henhold til formålet, for eksempel tynne blod utstryk bruke 1: 20 fortynning av lager mens for tykt blod smøre 1: 50 fortynning brukes.

Fortynn blodutstryk

1. Fest lufttørket film i absolutt metanol ved å dyppe filmen kort (to dips) i En koplinkrukke som inneholder absolutt metanol.
2. Fjern og la luften tørke.
3. Beis med fortynnet Giemsa beis (1:20, vol/vol) i 20 min (for en 1:20 fortynning, tilsett 2 ml Lager Giemsa til 40 ml bufret vann i En Coplin krukke).
4. Vask ved kort dyppe lysbildet inn og ut av En Coplin krukke med bufret vann(en eller to dips).
   Merk: Overdreven vask vil avfarge filmen.
5. La luften tørke i vertikal stilling. Observere under mikroskopet først PÅ 40X og deretter bruke olje nedsenking linse

Fortykk blod utstryk

1. La filmen lufttørke grundig i flere timer eller over natten. Ikke tørk filmer i en inkubator eller ved varme, fordi dette vil fikse blodet og forstyrre lysingen Av RBCs.
   Merk: hvis en rask diagnose av malaria er nødvendig, kan tykke filmer gjøres litt tynnere enn vanlig, la tørke i 1 time og deretter farget.
2. IKKE FIKSE.
3. Beis med fortynnet Giemsa beis (1:50, vol/vol) i 50 min (for en 1:50 fortynning, tilsett 1 ml Lager Giemsa til 50 ml bufret vann i En Coplin krukke)
4. Vask ved å plassere filmen i bufret vann i 3 til 5 min.
5. La luften tørke i vertikal stilling og observere under mikroskopet først VED 40X og deretter bruke olje nedsenking linse

For Chlamydia trachomatis

Følg de nevnte trinnene, Men med fortynnet flekken av 1: 40 fortynning (tilsett 0,5 ml lager Giemsa løsning til 19,5 ml bufret vann) og la flekken i 90-120 minutter.

OBSERVASJON:

på mikroskopisk observasjon skilles celleorganeller, bakterier og parasitter ut basert på deres morfologi og farge;