Vitamin d-og omega-3-fettsyretilskudd Hos barn Med autismespekterforstyrrelse: en studieprotokoll for en faktoriell randomisert, dobbeltblind, placebokontrollert studie

denne studien består av to trinn: fase 1 vil omfatte rekruttering og screening, mens fase 2 er en vitamin D og n-3 lcpufa randomisert, dobbeltblind.blind, placebokontrollert studie (fig. 1). Varigheten av intervensjonen er 12 måneder.

Skjematisk diagram av studiedesign. 1blodbiomarkører: 25-hydroksyvitamin D (25 (OH) D), røde blodlegemer (RBC) fettsyrer, kalsium, albumin, jernstudier, vitamin B12, folat, full blodtelling og vitamin A. Spørreskjemaer: sosiodemografi, medisinsk historie, spise/måltider og matdagbok. 2spørsmål: sosiokommunikativ funksjon, sensoriske problemer og avvikende atferd (primære utfall); gastrointestinale symptomer( sekundært utfall), soleksponering og hudfarge. Antropometri: vekt og høyde. 3blodbiomarkører: 25 (OH) D, rbc fettsyrer, kalsium og albumin. Spørreskjemaer: sosiokommunikativ funksjon, sensoriske problemer ,avvikende atferd (primære utfall) og spise / måltider og diettkvalitet. Antropometri: vekt og høyde. 4blodbiomarkører: 25 (OH)D, kalsium og albumin. * Gastrointestinale symptomer (sekundært utfall) og bruk av medisiner/tilskudd/forekomst av bivirkninger/supplement compliance vil bli overvåket gjennom hele studieperioden

Fase 1 vil gi mulighet for en omfattende beskrivelse av studiepopulasjonen med hensyn til ernæringsstatus (biokjemiske indekser og diettinntak), demografi og medisinsk historie. Stage 2 vil demonstrere effekten av tilskudd med vitamin d, n-3 LCPUFAs eller begge på å redusere ASD symptomer.

Deltakere

denne studien er et samarbeid Mellom Massey University og Waitemata District Health Board (WDHB), New Zealand. Omsorgspersoner for barn som oppfyller kriteriene for studien vil bli kontaktet i første omgang AV Wdhb Utviklingskoordinatorer.

vi beregnet at 42 deltakere (minimum 34 deltakere, og tillater en 20% potensiell frafallsrate) ville være nødvendig for hver arm i studien for å demonstrere en klinisk signifikant forskjell ved 80% effekt og 5% statistisk signifikans. Effektberegninger var basert på en 17-enhetsforskjell mellom supplerte grupper og placebo i endring fra baseline til endepunkt på SOSIAL Responsiveness Scale (SRS) total score , på en gjennomsnittlig SRS og standardavvik på henholdsvis 105 og 24,7 enheter hos ubehandlede barn med ASD (fra vår 2015 pilotstudie, upublisert). Prøvestørrelsen ble beregnet ved hjelp av formelen nedenfor :

Hvor N er utvalgsstørrelsen som kreves per gruppe, er α SD, K er konstanten (7.9 betegner 80% effekt og 5% signifikans), og (μ2 − μ1) er differansen I SRS totale poengsum mellom gruppene.

for å sikre at studien er tilstrekkelig drevet, vil en blindet interimanalyse på >50% av den opprinnelig planlagte innmeldingen bli utført av en uavhengig tredjepart for å estimere variansen for potensiell utvalgsstørrelsesøkning.

Inklusjons-og eksklusjonskriterier

Barn vil være kvalifisert for denne studien hvis de er mellom 2 år.5 og 8 år, har en medisinsk DIAGNOSE AV ASD bekreftet av både en utviklingspediatrik i samsvar med kriteriene oppført i Diagnostic And Statistical Manual Of Mental Disorders, versjon fem (DSM-5) , og symptomstart etter 18 måneders alder. Den nedre grensen på 2,5 år er valgt ut fra alderskriteriene til de psykologiske vurderingsverktøyene, og den øvre grensen på 8 år er valgt for å unngå den forvirrende effekten av atferdsendringer knyttet til pubertalstadiet. Omsorgspersonens ferdigheter i engelsk er et krav (på grunn av arten av utfallsvurderingsverktøy). Frivillige er utelukket dersom de ble diagnostisert med utviklingsforsinkelse siden fødselen.

Ytterligere inklusjonskriterier for studien er: leverfunksjon innenfor normalområdet (albumin 34-48 g/L) og serum 25(OH)D <75 + 10 nmol/L hvis de går inn i studien om vinteren og <105 nmol / L + 10 nmol/L hvis de går inn i studien om sommeren. En variasjon på 10 nmol / L ble valgt på grunn av den potensielle variabiliteten i analysen . Vi har brukt to forskjellige cut-off poeng for utelukkelse fordi det er en stor sesongvariasjon i serum 25 (OH)D konsentrasjoner i New Zealand fra 30 nmol / L til 44 nmol / L .

Innstilling

studien vil finne sted I Auckland, New Zealand. Ikke-fastende blodprøver vil bli samlet På North Shore Eller Waitakere Sykehus I Auckland, New Zealand. Spørreskjemaer og antropometri vil bli gjennomført Ved Massey University, Auckland, New Zealand. Auckland er New Zealands største by med en befolkning på litt over en million. Det har blitt anslått at ca 13 000 (32,5 %) personer med ASD bor I Greater Auckland region .

fase 1-screening

Screening og rekruttering (fase 1 av studien) vil foregå over en 24-måneders periode, som startet i januar 2015. Barn som oppfyller de første inklusjonskriteriene vil ha blodtrekk og vil bli screenet for ernæringsmessige mangler. Se Tabell 1 og 2 for utfallsmål, testmetoder og tidsplan for påmelding, intervensjon og vurdering.

pre-intervensjon forberedelse

før randomisering og inkludering i studien, vil vitamin d, jern og vitamin B12 mangler bli adressert. Se Tabell 3 for en liste over ernæringsmessige mangler og styringsstrategiene som ble brukt i denne studien.

Trinn 2 – vitamin D og n-3 LCPUFA intervensjon

intervensjonen består av 2000 IE vitamin D3 per dag, 722 mg DHA per dag, 2000 IE vitamin D3 pluss 722 mg DHA per dag eller placebo, i form av fire orale kapsler. Behandlingsmaterialene vil bli levert i 750 mg gelkapsler med en avrivningsdyse produsert og levert Av Douglas Nutrition Ltd., Auckland, New Zealand. Studiekapslene, vitamin D, n-3 LCPUFAs og placebo er identiske i utseende og alle er smakløse og fargeløse. Barnet er pålagt å konsumere innholdet av fire kapsler per dag blandet inn i maten av preferanse eller ved oral administrasjon av sprøyte. Se tabell 4 for det totale daglige inntaket og innholdet i hver kapsel. Gjennom studieperioden får barn lov til å ha noen terapi eller medisiner for autisme, samt ethvert supplement, forutsatt at det ikke inneholder vitamin D eller omega-3.

Tilskudd med 2000 IE vitamin D3 har vist seg å være en sikker dose hos spedbarn , og French Society of Paediatrics anbefaler 1000 til 1200 IE per dag hos ammende spedbarn . Kroppsmassen til 2,5-8-åringer i vår studie vil være betydelig større enn spedbarn, noe som ytterligere bør redusere risikoen for bivirkninger. Videre er 2000 IE per dag mindre enn den sikre øvre grensen på 2500 OG 3000 IE/dag foreslått av IOM for henholdsvis 1-3 og 4-8 års aldersgrupper .

dha-dosen på 722 mg / dag er fysiologisk relevant og oppnåelig gjennom kosthold (tilsvarende omtrent tre porsjoner fet fisk per uke) og er sammenlignbar med doser brukt i andre studier hos barn som undersøker effekten av n-3 LCPUFAs på atferd og læring . Ingen bivirkninger er rapportert hos barn med en dose på 600 mg DHA / dag .

Randomisering, blinding og skjult tildeling

Barn vil bli tilfeldig allokert til en av fire grupper, etter å ha blitt stratifisert for ALDER og alvorlighetsgrad AV ASD. Randomisering av aktive / placebokapsler, randomisert sekvensliste og gruppeoppgave vil være fullstendig skjult for forskere, barn og omsorgspersoner for hele studien, inkludert dataanalysen. En tredjepart som ikke er involvert i noen aspekter av studien, vil generere en tilfeldig blokkdesign i blokker på fire og åtte ved hjelp av Randomization.com (http://www.randomization.com/). Tredjeparten vil tildele en behandlingskode til et barn når deres berettigelse til intervensjonen er bekreftet og omsorgspersonens samtykke er mottatt. I en nødssituasjon hvor det vil være nødvendig å bryte studien blind, vil det være planer for hovedutforsker å kontakte tredjepart som er ansvarlig for randomisering for å avdekke behandlingsoppdraget for en gitt deltaker.

datainnsamling

Deltakere (omsorgspersoner og barn) vil delta På Human Nutrition Research Unit (HNRU) Ved Massey University ved to anledninger: baseline og 12 måneder. Når rekruttert inn i trinn 2 og før de blir gitt en 4-måneders tilførsel av kosttilskudd, vil omsorgspersoner fylle ut noen spørreskjemaer om kjernesymptomer PÅ ASD (sosiokommunikative funksjons-og sensoriske problemer) og avvikende atferd som studiens primære utfallsmål, og på gastrointestinale symptomer som sekundært utfallsmål. Når intervensjonen er fullført (12 måneder), vil baseline vurderinger av kjernesymptomer PÅ ASD og avvikende atferd fullført av omsorgspersoner gjentas. Omsorgspersoner vil også fullføre ukentlige gastrointestinale symptomdagbøker over studieperioden.

Ytterligere informasjon vil bli samlet for å beskrive studiepopulasjonskarakteristikkene ved baseline. Denne informasjonen inkluderer spise / måltider, matdagbøker, soleksponering, hudfarge og antropometri (vekt og høyde). Ved siste besøk vil baseline vurdering av spise/måltid atferd gjentas og barns vekt / høyde vil bli målt. Se Tabell 1 for utfallsmål og testmetoder.

blodprøvetaking og analyse

Barn vil ha sine blodprøver trukket ved tre anledninger, baseline (fase 1-screening), 6 måneder (sikkerhetstiltak) og 12 måneder (endepunkt). Se Tabell 1 for ernæringsmessige biomarkører og testmetoder. De ikke-fastende blodprøvene vil bli samlet inn under tilsyn av pediatrisk personale og behandlet Ved North Shore Eller Waitakere Sykehus I wdhb laboratory service. Ernæringsmessige biomarkører vil bli analysert fra en venøs blodprøve. Disse inkluderer følgende: 25 (OH) D, rbc fettsyrer, kalsium, albumin, jern studier, vitamin B12 og folat, full blodprosent og vitamin a. med unntak AV RBC fettsyrer og vitamin a, vil alle biomarkører bli analysert Ved North Shore Hospital. RBC fettsyrer vil bli analysert Ved University Of Wollongong, NSW, Australia, og vitamin A i et laboratorium Ved Massey University, Auckland, New Zealand.

Spørreskjemaer

de primære utfallsmålene er psykologiske vurderinger av kjernesymptomer PÅ ASD og samtidig forekommende problematferd som er beskrevet i Tabell 1. Det sekundære utfallsmålet er vurderingen av gastrointestinale problemer. Standardiserte instruksjoner vil bli gitt til alle omsorgspersoner om hvordan de skal fylle ut spørreskjemaene under besøket til HNRU. Før deltakeren går hnru forskerne sjekke alle svarene for fullstendighet.

Sosial Responsiveness Scale™, Second Edition (SRS-2): SRS – 2 versjoner spesifikke for aldersgrupper 2.5-4.5 og 4.5 gjennom 18 år vil bli brukt. SRS-2 identifiserer sosial svekkelse forbundet med Asd og kvantifiserer alvorlighetsgraden i domenene sosial bevissthet, sosial informasjonsbehandling, gjensidig sosial kommunikasjon, sosial angst/unngåelse og stereotypisk atferd/begrensede interesser . Klinisk validitet og sensitivitet FOR SRS-2 er bestemt i populasjoner med ASD .

sensoriske Behandlingstiltak™ (SPM) : SPM-versjonene som er spesifikke for aldersgrupper 2-5 og 5-12 år vil bli brukt. SPM vurderer sensorisk prosessering, planlegging og ideer (praksis) og sosial deltakelse hos barn. Vektene måler sosial deltakelse, syn, hørsel, berøring, kroppsbevissthet (propriosepsjon), balanse og bevegelse (vestibulær funksjon) og planlegging og ideer (praksis) . Dette verktøyet er standardisert, validert og brukt hos BARN med ASD .

ABERRANT Behaviour Checklist (ABC) : ABC måler mangfoldet av atferdsproblemer, nemlig irritabilitet, sosial tilbaketrekning, stereotyp atferd, hyperaktivitet og upassende tale . Det har blitt validert hos BARN MED ASD og har blitt mye brukt i behandlingsutfallsstudier AV ASD .

Gastrointestinal symptoms questionnaire: gastrointestinal symptoms questionnaire er utviklet spesielt for denne studien og inkluderer gastrointestinale tegn og symptomer som er vanligst rapportert hos barn med ASD . Omsorgspersoner til studiedeltakere vil bli forsynt med ukentlige online dagbøker og vil bli bedt om å registrere om barnet hadde forstoppelse, diare, flatulens, magesmerter, oppkast/kvalme, abdominal distensjon, uforklarlig irritasjon på dagtid eller/og uforklarlig nattoppvåkning i løpet av den siste uken, og i så fall hvor mange ganger disse skjedde. Spørreskjemaet for gastrointestinale symptomer er ikke validert, men inneholder spørsmål om gastrointestinale symptomer som er mest rapportert i ASD-populasjoner, eller atferd som kan være en konsekvens av gastrointestinale symptomer. Vi er ikke klar over et validert instrument for å vurdere gastrointestinale symptomer hos autistiske barn, og absolutt ikke I New Zealand.

Kostholdsindeks For Barns Spising(TERNING): THE DICE ER et enkelt kostholdsvurderingsverktøy som er utviklet av forskerteamet, basert På New Zealand Ministry Of Health Food And Nutrition Guidelines for Healthy Children and Young People . Dette verktøyet har blitt validert i en kohorte Av New Zealand friske barn i alderen 2 til 8 år (upublisert), og vil bli validert I ASD-barn i denne studien mot 4-dagers estimert matdagbok og biokjemiske markører.

Behavioral Pediatrics Feeding Assessment Scale (BPFAS): BPFAS er et enkelt vurderingsverktøy som måler et barns måltider og foreldrenes holdninger og atferd. Det er en 35-punkts skala spørreskjema bestående av 25-likert skala (5 poeng) spørsmål om barns atferd og 10 dikotom spørsmål om foreldrenes holdninger og atferd. Cut-off score FOR BPFAS har nylig blitt etablert . BPFAS er det mest pålitelige foreldrestyrte spørreskjemaet, med god intern validitet og test-retest pålitelighet .

Fire-dagers estimert matdagbok: data om diettinntak vil bli samlet inn av en 4-dagers estimert matdagbok, inkludert en helgedag. Instruksjoner om hvordan du nøyaktig fullfører matdagboken, vil bli gitt med matdagboken. Deltakerne vil bli gitt en gratis post, pre-adressert konvolutt for retur av heftet. Gjennomsnittlig makro-og mikronæringsinntak vil bli vurdert over fire rapporterte dager ved Hjelp Av FoodWorks Professional Edition 7 (Xryis Software, Brisbane, QLD, Australia, 2012).

i denne studien ble en 4-dagers matdagbok valgt på grunn av den høye respondentbelastningen og tidkrevende egenskapene til lengre matdagbøker som en 7-dagers matdagbok. På grunn av den høye variasjonen i næringsinntak, anbefales det å registrere diettinntak over en lengre periode for å få et svært nøyaktig estimat av inntaket. Men hvis en 4-dagers matdagbok dekker forskjellige dager tilfeldig, kan den gi nøyaktige estimater av diettinntaket .

Informasjon om soleksponering og hudfarge, kosttilskudd og eventuelle spesielle diettregimer som følges, vil bli samlet inn av spørreskjemaer som er spesielt utformet for formålet med den nåværende studien. The sun exposure questionnaire inneholder et spørsmål om omsorgspersonens tro og holdninger til soleksponering, samt spørsmål om land og bosted i svangerskapet, fødselsår og barns følsomhet overfor temperatur og lys ekstremer.

Overholdelse av medisinering / overholdelse av studieprotokoll

Omsorgspersoner vil motta ukentlige e-postmeldinger som inneholder en lenke til online compliance and gastrointestinal issues diary og et tips / faktum om autisme og ernæringsmessige forhold. Omsorgspersoner vil bli kontaktet på telefon på 1, 3, 6 og 9 måneder for moral formål og for å oppmuntre compliance. Omsorgspersoner vil også motta kvartalsvis prøve nyhetsbrev. Nyhetsbrevene vil inneholde en oppdatering på studien, generiske emner om ASD, en omsorgsperson erfaring i forhold til det emnet, og underholdning / konkurranser for studien barn.

Nye intervensjonsmaterialer vil bli sendt ut til deltakerne hver 4. måned, og omsorgspersoner vil bli bedt om å plassere flasker fra de foregående månedene til side, med ubrukte kapsler i dem, som skal returneres ved neste besøk (6 eller 12 måneder) hvor ubrukte kapsler vil bli telt og registrert. Compliance to treatment vil bli analysert ved å telle hver deltakers gjenværende kosttilskudd når de har fullført intervensjonen.

Bivirkninger

alle deltakere vil bli tilbakekalt etter 6 måneder For en blodprøve for å sjekke for hypervitaminose D (serum 25(OH)D > 225 nmol/L) og hyperkalsemi (serum Ca >2,7 mmol/L). Resultatene vil bli kontrollert av en tredjepart som er unblinded (men har ingen involvering i analyse av resultatene). Tredjeparten vil avidentifisere blodprøveresultater og sende dem til studiepediatrikeren og seniorutforsker for gjennomgang og anbefaling dersom barnets serum 25 (OH) D eller kalsiumnivå er over den sikre øvre grensen. Hvis konsentrasjonen av 25(OH)D er ved eller nærmer seg 225 nmol/L, eller hvis hyperkalsemi er tilstede, vil doseadministrasjonen justeres.

Compliance og gastrointestinale symptomdagbøker vil bli overvåket ukentlig, og alle bivirkninger vil bli registrert i bivirkningsloggen for å holde oversikt over barnets generelle helse-og atferdsreaksjoner. Ved eventuelle bivirkninger vil barnets helse overvåkes nærmere i tre til fire påfølgende uker, og hvis bivirkningen vedvarer, vil rapportene bli henvist til forsøkspedagogen og senioretterforsker for videre utredning.

Formidling av resultater

etter mottak og analyse av matdagboken og gjennomføring av biokjemiske analyser ved screening, vil hver deltaker motta et tilbakemeldingsskjema. Antropometriske målinger og blodresultater (jernstudier, vitamin B12, folat og full blodtelling) vil også bli inkludert. Når rekrutteringen til forsøket er fullført, vil deltakere som ikke har gått videre i forsøket, motta varsel om vitamin D og rbc-fettsyrenivåer.

ved fullføring av forsøket vil deltakerne bli informert om baseline og slutt vitamin D og RBC fettsyre status, og om de tok aktiv eller placebo dose. De vil også motta et sammendrag av psykologiske vurderingsresultater AV SRS – 2 og SPM.

Deltakere og andre interessenter (som helsepersonell, distriktshelsestyrelser, primærhelseorganisasjoner, ASD-støttegrupper) vil få tilgang til studiens funn. Resultatene vil bli presentert på vitenskapelige konferanser både nasjonalt og internasjonalt, forberedt for publisering i peer-reviewed tidsskrifter, og sirkulert til media.

datahåndtering og statistisk analyse

Navn og adresse vil bli opprettholdt I Microsoft Excel. Avmerkingsbokser vil registrere fremdriften til en deltaker gjennom studien. Alle andre data vil bli lagt inn i Et Enkelt microsoft Excel-regneark med deltakere identifisert bare av deres unike Emnenummer. Scorings av spørreskjemaene vil bli dobbeltsjekket av psykologen og forskeren. Alle bidrag vil bli dobbeltsjekket av et annet medlem av forskerteamet. Alle dokumenter vil bli lagret trygt under konfidensielle forhold og arkivert i 5 år.

Statistisk analyse vil bli utført VED HJELP AV IBM SPSS versjon 21.0 (IBM Corp; utgitt 2012. IBM SPSS-Statistikk For Windows Versjon 21.0. Armonk, NEW YORK, usa). Før statistisk analyse påbegynnes, blir dataene rengjort og kontrollert for kodingsfeil. Dataene vil bli sjekket for plausibilitet ved tilfeldig å sjekke nøyaktigheten og fullstendigheten og verifisere mot kildedata. Variablene vil bli testet for normalitet ved Hjelp Av Kolmogorov-Smirnov-testen, Shapiro-Wilk-testen og normalitetsplottene. Ikke-normalfordelte data vil bli transformert til omtrentlige normalfordelinger ved logaritmiske transformasjoner. Dataene vil bli rapportert hensiktsmessig som gjennomsnitt (standardavvik) for normalfordelte data; transformerte data vil bli tilbake-transformert fra sammendragsstatistikk til geometrisk gjennomsnitt (95 % KI), ikke-normalfordelte data vil bli beskrevet som median (25., 75. persentiler) og kategoriske data som frekvenser.

baseline karakteristikker av deltakerne vil bli sammenlignet mellom grupper ved hjelp av analyse av varians (ANOVA) for parametriske data og Kruskal-Wallis test for ikke-parametriske data. Den primære analysen, som sammenligner effekten av behandling på symptomer på autisme over 12 måneder, vil bli utført ved hjelp av en generalisert lineær mixed-models prosedyre. Behandlinger og tid vil bli inkludert som faste effekter og samspillet mellom intervensjoner og tid vil bli testet. Hvis signifikante hovedeffekter eller interaksjonseffekter observeres, vil post-hoc-analyse med Bonferroni-justeringer bli utført. Potensielle konfunderende faktorer og effektmodifikatorer (f. eks. baseline 25(OH)d og rbc fettsyrer, symptomer på autisme ved baseline, alder og kjønn) vil bli undersøkt i modellen. Logistisk regresjon vil bli brukt til å teste multiplikativ interaksjon. Rothmans synergiindeks, som vil være lik enhet under additivitet, og mindre enn enhet når antagonisme foreslås, vil bli brukt til å undersøke den postulerte interaksjonseffekten av vitamin D og omega-3 LCPUFAs på kjernesymptomer AV ASD.

den sekundære analysen, som sammenligner effekten av behandling på gastrointestinale symptomer over 12 måneder, vil bli utført med samme prosedyre. Potensielle konfunderende faktorer og effektmodifikatorer (f. eks. baseline diagnose av eventuelle gastrointestinale symptomer og medisinering/tilleggsbruk) vil bli undersøkt i modellen.

Forskjeller mellom deltakere som fullfører og trekker seg fra studien vil bli analysert ved hjelp av en uavhengig t-test Eller Mann-Whitney-testen for kontinuerlige variabler (f.eks. alder) og chi-square for kategoriske variabler (f. eks. kjønn).

Sammenhenger mellom alvorlighetsgrad AV ASD-symptomer og ernæringsstatus (spesielt vitamin D, rbc-fettsyrer, jern og vitamin B12) ved baseline vil bli vurdert ved hjelp av regresjonsanalyse. Informasjonen vil bli brukt til å vurdere behandlingsrespons i henhold til tertiler av ernæringsstatus som viser signifikant sammenheng med alvorlighetsgrad AV ASD.

både intention-to-treat og per-protocol analyser vil bli benyttet, selv om den primære analysemetoden vil være intention-to-treat. Statistisk signifikans vil være basert på to-tailed tester Med P < 0,05 anses signifikant.