Advances in Genomic Testing-What you Need to Know

Advances in Genomic Testing-What you Need to Know

by Dr. C. H. Weaver M. D. updated 9/1/2018

Q: Co to jest badanie genomiczne?

A: badanie genomu bada grupę genów i ich różne poziomy ekspresji. Ta ekspresja genów lub aktywność może scharakteryzować, w jaki sposób geny oddziałują ze sobą i przewidzieć zachowanie niektórych tkanek w organizmie. Jest to w przeciwieństwie do badań genetycznych, które bada specyficzną zmianę w obrębie pojedynczego chromosomu lub genu, często jako część dziedzicznej cechy.

P: jaką rolę odgrywa badanie genomu w diagnostyce raka?
A: badania genomowe mogą dostarczyć informacji o rokowaniu pacjenta w oparciu o ekspresję genów w tkance nowotworowej danej osoby i często mogą przewidzieć, czy pewna terapia (taka jak chemioterapia) będzie korzystna.

P: w jakim momencie procesu diagnostycznego dochodzi do badania genomu?
A: Badanie genomowe może wystąpić w dowolnym momencie po próbce tkanki (biopsja lub resekcja) raka został nabyty.

P. jakie pytania powinienem zadać mojemu zespołowi opieki zdrowotnej w sprawie badań genomowych?
A: oto podstawowe pytania, które należy zadać swojemu świadczeniodawcy.

• czy dostępne są badania genomowe dla rodzaju raka, który mam, aby pomóc w określeniu ogólnego rokowania?
• czy wyniki tych badań mogą zmienić twoje Postępowanie z rakiem? Konkretnie:
  • czy test będzie w stanie mi powiedzieć, czy niektóre terapie będą korzystne w moim leczeniu?
• czy miałeś pozytywne wyniki w stosowaniu tego testu z innymi pacjentami?
• czy te testy są objęte moim planem ubezpieczeniowym? (Ten rodzaj testów może przebiegać w tysiącach dolarów, choć wiele planów obejmuje testy bez kosztów out-of-pocket.)

P: Czy istnieją konkretne typy nowotworów, dla których rola badań genomowych jest szczególnie istotna?

A: Istnieją trzy rodzaje pacjentów z rakiem, dla których badania genomowe mogą być szczególnie korzystne:

• u pacjentów z rakiem piersi z receptorem estrogenowym, który nie rozprzestrzenił się jeszcze do węzłów chłonnych (rak piersi we wczesnym stadium), rokowanie jest trudne do przewidzenia za pomocą samej biopsji tkanki. Badania genomowe mogą nie tylko pomóc w dostarczaniu informacji prognostycznych (tj. przewidywane 10-letnie przeżycie), ale mogą również przewidzieć, czy chemioterapia będzie miała jakiekolwiek znaczące korzyści, umożliwiając pacjentowi uniknięcie toksyczności chemioterapii, gdy jest to możliwe.
• pacjenci z niektórymi typami raka jelita grubego mogą również korzystać z badań genomowych pod względem określania rokowania, przewidywania korzyści z chemioterapii i wyboru chemioterapii (określania, które czynniki chemiczne będą najbardziej korzystne).
• pacjenci z rakiem, który rozprzestrzenił się na inne miejsca ciała (choroba z przerzutami) lub który wystąpił miejscowo (pomimo zabiegu chirurgicznego i (lub) chemioterapii), mogą być poddawani testom genomowym, które sprawdzają ekspresję w wielu różnych genach, w tym tych, które zazwyczaj nie są związane z pierwotnym miejscem nowotworu. Ten rodzaj badania genomowego może zidentyfikować pewne geny, które mogą potencjalnie być celem terapii, która początkowo nie była brana pod uwagę. Zmiana terapii celowanej może znacznie poprawić przeżywalność.

pojawiająca się rola genomiki w diagnozowaniu i monitorowaniu raka

przegląd

rak jest wynikiem nieprawidłowości genetycznych, które wpływają na funkcjonowanie poszczególnych genów. Geny określają formę, funkcję i wzorce wzrostu komórek. Te, które przyspieszają lub hamują wzrost są często zaangażowane w raka. Na przykład, wiele nowotworów mają nieprawidłowości w genie, który jest odpowiedzialny za stymulowanie wzrostu komórek i / lub gen, który normalnie zapobiega raka nie działa prawidłowo. Obie te nieprawidłowości genetyczne mogą prowadzić do niekontrolowanego i nadmiernego wzrostu komórek, cechę charakterystyczną raka. Testy genomowe, lub testy, jak są one nazywane przez naukowców, są narzędziem do identyfikacji specyficznych genów w raku, które są nieprawidłowe lub nie działają prawidłowo. W istocie jest to jak identyfikacja podpisu genetycznego lub odcisku palca konkretnego raka.

badania genomowe różnią się od badań genetycznych. Testy genetyczne są zazwyczaj używane do określenia, czy zdrowa osoba ma dziedziczną cechę (gen), który predysponuje je do rozwoju raka. Testy genomowe oceniają geny w próbce chorej tkanki od pacjenta, u którego zdiagnozowano już raka. W ten sposób geny, które zmutowały lub rozwinęły nieprawidłowe funkcje, są identyfikowane oprócz tych, które mogły zostać odziedziczone.

badania genomowe mogą pomóc lekarzom w:

• Określ rokowanie pacjenta (potencjalny wynik)
• Określ, czy rak jest agresywny/szybko rośnie, czy wolno rośnie
• Wybierz najskuteczniejsze leczenie dla każdego pojedynczego raka
• Monitoruj pacjentów, którzy są w trakcie leczenia, aby określić, czy leczenie działa
• Monitoruj pacjentów, którzy są w remisji, aby wcześnie wykryć potencjalną progresję choroby, gdy więcej leczyć

być może największą obietnicą badań genomowych jest jego potencjał do indywidualizacji leczenia. Oznacza to, że pacjenci z poważniejszymi schorzeniami mogą być identyfikowani i oferowani agresywnych i innowacyjnych terapii, które mogą przedłużyć ich życie, podczas gdy pacjentom, u których zdiagnozowano mniej poważną chorobę, można oszczędzić niepotrzebnych zabiegów. Na przykład, niektóre kobiety z rakiem piersi z ujemnym węzłem będzie nawrót po leczeniu chirurgicznym sam. Wykazano, że testy genomowe pozwalają rozróżnić, którzy pacjenci z rakiem piersi z przerzutami do węzłów chłonnych są bardziej narażeni na nawrót choroby i w związku z tym odnoszą korzyści z dodatkowej chemioterapii, a którzy pacjenci mogą nie potrzebować chemioterapii.

aby docenić, w jaki sposób nauka o genetyce jest stosowana w diagnostyce i monitorowaniu raka, pomocne jest zrozumienie podstawowych zasad genetyki. Obejmuje to wiedzę o tym, czym są DNA, chromosomy i geny, jak działają i jak informacje zawarte w DNA są przekształcane, poprzez ekspresję genów, w określone struktury, które dyktują funkcje komórki.

Dzięki tej wiedzy podstawowej można zrozumieć obietnicę testów wykrywających nieprawidłowości genetyczne, takie jak:

• fluorescencja hybrydyzacja in situ (FISH)
• reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR)
• odwrotna transkrypcja PCR
• Technologia mikromacierzy
• proteomika surowicy

Tło—podstawowe zasady genetyki

znaczenie genetyki w dziedziczności jest dobrze znane; jednak rola, jaką genetyka odgrywa w kontrolowaniu struktury i funkcji komórek, może być jeszcze bardziej krytyczna dla pojedynczego organizmu. Dziedziczność zapewnia, że ludzie i wszystkie gatunki są w stanie reprodukować i utrwalać swoje unikalne cechy, a kierowanie tym, jak komórki są zbudowane, jaką pracę wykonują i jak rosną, jest konieczne, aby zapewnić, że organizm przeżyje, aby się rozmnażać. Zrozumienie tej kluczowej roli, jaką DNA i geny odgrywają w określaniu życia komórki z minuty na minutę, jest również ważne dla zrozumienia, w jaki sposób genetyka jest zaangażowana w raka.

DNA: informacja genetyczna dla całego organizmu jest zawarta w jądrze każdej komórki w postaci kwasu deoksyrybonukleinowego, powszechnie znanego jako DNA. DNA jest dwuniciową cząsteczką spiralną (spiralną). Każda nić składa się z szkieletu strukturalnego i sekwencji związków zawierających azot zwanych zasadami azotowymi, które można uznać za alfabet genetyki. Istnieją cztery zasady: adenina, guanina, tymina i cytozyna. Dwie nici są połączone w podstawy.

kod genetyczny lub informacja genetyczna, która kontroluje strukturę i funkcję komórki, jest zawarta w sekwencji zasad. Sekwencja zasadowa ostatecznie kontroluje sekwencję aminokwasów, które są połączone ze sobą w celu utworzenia cząsteczki białka. Różne sekwencje tworzą różne białka. Białka syntetyzowane w komórce określają strukturę i funkcję tej komórki.

chromosomy: DNA jest pakowane w określoną liczbę jednostek zwanych chromosomami. Ludzie mają 46 chromosomów w każdej komórce. Przez większość czasu chromosomy są ciasno upakowane wokół białek w jądrze komórki, tak że nie można ich zobaczyć. Jednak na etapach życia komórki tuż przed podziałem komórki chromosomy stają się widoczne za pomocą mikroskopu świetlnego. Wyglądają jak duże ” H „z czterema długościami zwiniętego DNA połączonego przez białko jako” krzyż „z”H”.

geny: DNA jest zorganizowane w geny, które są długimi segmentami DNA, które zawierają regiony zawierające kody dla białek zwanych eksonami, a także niekodujące regiony zwane intronami. Geny są definiowane jako podstawowa jednostka dziedziczności, ponieważ są przekazywane do potomstwa, a następnie replikowane i przekazywane do poszczególnych komórek podczas podziału komórki. Replikacja wymaga używać oba nić DNA jako szablonów syntetyzować komplementarny DNA (cDNA), który jest pasujący nić. Rezultatem są dwie identyczne kopie DNA dla każdej komórki po zakończeniu podziału komórki. W normalnych warunkach struktura DNA, a tym samym genów, pozostaje względnie stała poprzez replikację i podział komórek.

ekspresja genu: informacja genetyczna zawarta w genach jest przekładana na strukturę komórkową i funkcję poprzez proces zwany ekspresją genu. Geny mogą być traktowane jako kody lub przepisy na wytwarzanie białek. Białka są podstawowym składnikiem struktury i funkcji komórek. Kiedy gen jest „wyrażony”, białko lub białka, które koduje, są aktywnie budowane w komórce i funkcja, którą te białka służą, jest wykonywana. Na przykład, gdy gen HER-2/neu ulega ekspresji w raku piersi, występuje więcej receptorów naskórkowego czynnika wzrostu (EGFRs), które są białkami na powierzchni komórki kodowanymi przez HER-2/neu. Ponadto funkcją EGFR jest stymulowanie wzrostu komórek; zatem komórka, która wyraża HER-2 / neu, ma wiele EGFR i aktywnie rośnie.

ekspresja genów odbywa się poprzez złożony system, który obejmuje następujące kroki:

• tymczasowe oddzielenie dwóch nici cząsteczki DNA w danym Genie.
• transkrypcja segmentu DNA, który jest syntezą jednoniciowej kopii sekwencji DNA, która jest odsłonięta; kopia ta nazywa się messenger RNA (mRNA).
• synteza białek, czyli budowanie nowych białek w komórce, w oparciu o informacje zawarte w mRNA.

: Nieprawidłowości genetyczne są zmiany w DNA komórki, które mogą wystąpić przez przypadek lub ze względu na wpływ środowiska. Zmiany te nadają chorej komórce pewną przewagę nad normalnymi komórkami, która pomaga im rosnąć. W rezultacie komórka jest w stanie dzielić się szybko, stając się wzrostu raka. Jednak ta przewaga wzrostu przynosi korzyści tylko poszczególnym komórkom, a niekoniecznie całemu organizmowi (człowiekowi).

rodzaje nieprawidłowości genetycznych obejmują:

Translokacje-zmiana miejsca genu z jednego chromosomu z genem na innym chromosomie; ten typ nieprawidłowości definiuje wiele różnych białaczek

delecje-gen lub Sekwencja nukleotydów brakuje w DNA

polimorfizmy-zmiany w sekwencji nukleotydów

testy do wykrywania nieprawidłowości genetycznych

wiele nowych badań laboratoryjnych może wykryć nieprawidłowości genetyczne. Znalezienie mutacji powodującej chorobę w genie może potwierdzić podejrzenie rozpoznania raka lub zidentyfikować osoby predysponowane do niektórych nowotworów. Niektóre z tych technik, które są obecnie stosowane w warunkach klinicznych obejmują:

• fluorescencja hybrydyzacja in situ (FISH)
• reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR)
• odwrotna transkrypcja PCR

ponadto w badaniach nad rakiem stosowane są następujące techniki laboratoryjne i mogą być dostępne do zastosowania klinicznego w przyszłości:

• Mikromacierz

fluorescencja hybrydyzacja in situ (Fish)

FISH jest techniką laboratoryjną, która jest używana do wykrywania nieprawidłowości genetycznych na poziomie pojedynczych komórek i pojedynczych genów, takich jak nieprawidłowości numeryczne (zyski i straty nukleotydów) i translokacje (zmiana miejsca genu lub segmentu genów na jednym chromosomie z genem lub segmentem na innym chromosomie). Nieprawidłowości te odgrywają rolę w rozwoju i progresji niektórych nowotworów, takich jak białaczki i limfomazy1.

jak działa ryba? Ryby wykonuje się na próbkach komórek, których DNA zostało rozplątane tak, że poszczególne chromosomy są widoczne. Dzieje się to podczas faz komórkowych tuż przed podziałem komórek, zwanych metafazą lub interfazą. Próbka DNA jest najpierw denaturowana przy użyciu ciepła i chemicznego formamidu tak, że poszczególne nici oddzielają się, odsłaniając sekwencję zasadową. Następnie, specyficzne sekwencje DNA, zwane sondami, które są dołączone do kolorowych fluoros są inkubowane lub łączone z próbką DNA. Sondy hybrydyzują (łączą się) z DNA w chromosomach, które jest komplementarne do sekwencji bazowej w sondzie. Obecność lub brak fluorescencji z hybrydyzowanego DNA i sondy są widoczne za pomocą specjalistycznego mikroskopu i wskazują, czy sekwencja DNA będąca przedmiotem zainteresowania jest obecna w próbce. Ponadto, wyspecjalizowane techniki ryb mogą być wykorzystywane do wykrywania translokacji, inwersji i amplifikacji, które są zaangażowane w raka.2

FISH w raku piersi i jajnika: powszechne zastosowanie, jeśli Fish ma na celu określenie, czy pacjenci z rakiem piersi i jajnika nadekspresują onkogen HER2/neu, gen, który jest powszechnie zaangażowany w raka. HER2 / neu niesie kod genetyczny receptora HER2, białka na powierzchni niektórych komórek nowotworowych. HER2 wiąże się z czynnikami wzrostu we krwi, stymulując w ten sposób wzrost komórek nowotworowych.

HER2/neu ulega amplifikacji w około 20% do 30% przypadków raka piersi i jajnika, a to amplifikacja i (lub) nadekspresja wskazują na złe rokowanie.3 ryby mogą być użyte do obserwacji, czy onkogen HER2 / neu wysyła wiele sygnałów na poziomie poszczególnych komórek, co wskazuje na amplifikację genu.

ryby w nowotworach hematologicznych (krwi): Ryby mogą być również stosowane do diagnozowania i leczenia różnych nowotworów hematologicznych. Anomalia genetyczna, która leży u podstaw wielu nowotworów hematologicznych jest translokacja chromosomów, lub zmiany miejsca genu z jednego chromosomu z genem na innym chromosomie.

reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR)

PCR jest metodą laboratoryjną in vitro, która jest przydatna do badań genetycznych w kierunku choroby i wykrywania minimalnej choroby resztkowej, która jest niewielką ilością choroby pozostałej po leczeniu, która może prowadzić do nawrotu i zazwyczaj nie jest wykrywalna innymi technikami. Procedura ta wzmacnia segment DNA z małej próbki, co czyni go wykrywalnym. Dzięki PCR stosunkowo małe sekwencje znanego DNA mogą być replikowane w milionach kopii w krótkim czasie.

jak działa PCR? Metoda ta wymaga czterech głównych składników: 1) próbki DNA, 2) dużej podaży nukleotydów, 3) stabilnego termicznie enzymu polimerazy, który jest odpowiedzialny za kopiowanie DNA, oraz 4) starterów, krótkiej sekwencji nukleotydów, które leżą po obu stronach interesującego fragmentu DNA i sygnalizują polimerazie rozpoczęcie replikacji określonego segmentu DNA.

PCR to trzyetapowy proces, z którego każdy zachodzi w innej temperaturze. Próbka DNA jest najpierw podgrzewana do temperatury około 90ºC w celu oddzielenia 2 sparowanych nici DNA. Po oddzieleniu schładza się go do temperatury, która umożliwia starterom hybrydyzację z ich komplementarną sekwencją na docelowym DNA, około 40ºC. Wreszcie, replikacja DNA zachodzi w temperaturze około 70ºC, w której polimeraza DNA jest najbardziej aktywna. Proces ten powtarza się 20 do 30 razy, co skutkuje około milionową amplifikacją interesującego fragmentu DNA.4

odwrotna transkrypcja PCR

odwrotna transkrypcja (RT)-PCR to technika, która wykrywa stopień ekspresji genów. Skomplikowane procesy kontrolują, który segment DNA oddziela się, zostaje transkrybowany (kopiowany) do mRNA, a następnie wyrażany jako białka w komórce. Nie wszystkie geny są transkrybowane, a następnie wyrażane jednakowo. Ze względu na wiele kontroli w komórce, niektóre geny są nadmiernie wyrażone, co oznacza, że są one transkrybowane i wyrażane w wyższym tempie niż normalnie, podczas gdy inne geny są teraz wyrażane lub „wyłączane”, tak że pewne funkcje nie są manifestowane w komórce.

jak działa RT-PCR? RT-PCR używa tych samych kroków co PCR do amplifikacji segmentu DNA, ale próbka jest bezpłatną kopią mRNA. Zaczynając od mRNA, test ten mierzy tylko DNA, które jest wyrażane, umożliwiając określenie stopnia, w jakim pewne geny są wyrażane. Najnowsze zastosowania RT-PCR w onkologii klinicznej obejmują wykrywanie mikrometastaz węzłów chłonnych w raku prostaty i przerzutów do kości w raku piersi.5

RT-PCR w raku piersi: test na raka piersi Oncotype DX™ wykorzystuje RT-PCR w celu określenia indywidualnego ryzyka nawrotu u kobiet z rakiem piersi z ujemnym receptorem estrogenowym (ER). Test ten ocenia ekspresję 21 genów w raku piersi. Nadekspresja niektórych z tych genów wskazuje na gorsze rokowanie, podczas gdy ekspresja innych może wskazywać na lepsze rokowanie. Ekspresja wszystkich 21 genów jest używana do obliczenia ” Recurrence Score™”, czyli prawdopodobieństwa, że nowotwór powróci. Duże badanie kliniczne wykazało, że Recurrence Score™ był skuteczniejszy w przewidywaniu rokowania u kobiet z rakiem piersi z ujemnym do węzłów chłonnych, ER-dodatnim niż standardowe pomiary, takie jak wiek pacjentki, wielkość raka i stadium raka.

strategie poprawy wykrywania nieprawidłowości genetycznych

kilka metod wykrywania nieprawidłowości genetycznych są wykorzystywane do badań nad rakiem. Chociaż nie są one jeszcze rutynowo stosowane w warunkach klinicznych, następujące wydają się obiecujące i mogą być stosowane w przyszłości do diagnozowania, testowania i monitorowania raka.

mikromacierze: analiza mikromacierzy to technika, która łączy biologię z informatyką w celu wygenerowania profilu genetycznego dla danej próbki tkanki, który odzwierciedla aktywność tysięcy genów. Technologia ta ma przewagę nad FISH lub PCR, ponieważ w jednej analizie może ocenić ekspresję wszystkich genów, które mogą być zaangażowane w raka, a nie tylko kilku. Poprzez graficzne pokazanie, jak wszystkie geny są zaangażowane w raka, mikromacierze mogą generować „podpis genetyczny” dla konkretnego raka. To sprawia, że identyfikacja podtypu raka bardziej precyzyjne. Możliwość zrobienia migawki podpisu genetycznego raka może prowadzić do lepszego zrozumienia, w jaki sposób nowotwór rozwija się i jak zaprojektować zindywidualizowane leczenie.

jak działają mikromacierze? Podczas gdy różne metody mikromacierzy są wykorzystywane, każdy składa się z pięciu podstawowych kroków:

• przygotowanie próbki
• połączenie próbki z układem komputerowym
• skanowanie układu komputerowego
• normalizacja
• komputerowa analiza wyników.

przygotowanie próbki: w początkowym etapie cDNA jest syntetyzowane z RNA przez odwrotną transkrypcję (pamiętaj, że transkrypcja polega na kopiowaniu DNA w celu wytworzenia RNA, więc odwrotna transkrypcja generuje DNA z RNA) z RNA, który został wyekstrahowany zarówno z próbki testowej, jak i referencyjnej. Próbki segmentów DNA są oznaczone fluorochromów, lub radioaktywnych substancji chemicznych, tak, że mogą być wykryte po połączeniu z chipem komputerowym.

łączenie próbki z chipem komputerowym: następnie próbka jest połączona z chipem komputerowym, który jest prostokątną siatką plam. Każdy punkt ma wiele kopii określonej sekwencji DNA. Sekwencje te pochodzą z publicznych baz danych sekwencji DNA, które zostały wygenerowane przez Human Genome Project, przedsięwzięcie naukowe, które zidentyfikowało praktycznie wszystkie sekwencje DNA w gatunku ludzkim.

gdy próbka jest dodawana do układu komputerowego, zachodzi proces zwany hybrydyzacją. Oznacza to, że segment DNA próbki wiąże się (hybrydyzuje) z segmentem na chipie komputerowym, który ma dokładną komplementarną sekwencję nukleotydów (cztery związki, które są alfabetem genetyki).

skanowanie układu komputerowego: po zakończeniu hybrydyzacji skanery są używane do wykrywania fluorescencji i tworzenia cyfrowego obrazu, który odzwierciedla miejsce, w którym próbka DNA jest połączona z plamami na chipie mikromacierzowym.

normalizacja: Ponieważ intensywność sygnału surowego może się różnić między poszczególnymi chipami u wielu pacjentów lub eksperymentów, indywidualna intensywność chipów musi być dostosowana do wspólnego standardu lub znormalizowana. Na przykład odejmowanie szumu tła jest powszechną metodą normalizacji, która jest stosowana do wszystkich próbek. Normalizacja umożliwia porównanie profili ekspresji genów z wielu pacjentów lub eksperymentów.

analiza komputerowa: ostatnim krokiem w eksperymencie mikromacierzy jest analiza komputerowa. Tysiące nieprzetworzonych punktów danych, które wynikają z analiz mikromacierzy, są zasadniczo niezrozumiałe, chyba że są oceniane W kontekście innych wyników. Na przykład profil ekspresji genów (wyniki mikromacierzy) normalnej i chorej tkanki można porównać do identyfikacji genów, które różnią się w ich ekspresji, a także identyfikacji wzorca (profilu), który może wskazywać na odrębną klasę lub stadium choroby.7

mikromacierze w onkologii: Analiza mikromacierzy przyczyniła się do onkologii poprzez zwiększenie zrozumienia genetycznej podstawy kilku rodzajów raka, w tym chłoniaka nieziarniczego z komórek B (BCNHL), ostrej białaczki i raka piersi.

• znaczna wiedza dotycząca patologii BCNHL została zdobyta przez porównanie wzorców ekspresji genów chorej i normalnej tkanki. Dwie różne kategorie chorób wykazują różne profile ekspresji genów. Mikromacierze pomogły ustalić te profile ekspresji i, w przyszłości, mogą pomóc dokładnie klasyfikować nowe przypadki BCNHL.
• w przypadku ostrej białaczki, mikromacierze pomogły ustalić wyraźne wzorce ekspresji genów, które pomogły odróżnić ostrą białaczkę limfocytową (ALL) i ostrą białaczkę szpikową (AML). Stosując te profile, 29 Z 34 nowych przypadków białaczki prawidłowo przewidywano.
• ponadto mikromacierze pomogły zidentyfikować dwa różne profile ekspresji genów w raku piersi, BCRA1 i bcra2. To odkrycie sugeruje różne sposoby rozwoju raka piersi i dostarcza wskazówek, które promują dalsze zrozumienie przyczyny raka piersi.7

1 Spagnolo SD, Ellis DW, Juneja S, Leong AS i in. Rola badań molekularnych w diagnostyce chłoniaka: przegląd. Patologia 2004; 36 (1)19-44.

2 Spurbeck JL, Adams SA, Stupca PJ, Dewald GW. Primer on Medical Genomics Part XI: Visualizing Human Chromosomes. Mayo Clinic Proceedings 2004: 79: 58-75.

3 Paik S, Hazan R, Fisher ER, et al. Patologiczne wyniki Narodowego chirurgicznego adiuwantowego projektu piersi i jelit: prognostyczne znaczenie nadekspresji białka erb B-2 w pierwotnym raku piersi. J Clin Oncol 1990; 8: 103-112.

4 Tefferi a, Wieben ED, Dewald GW, et al. Elementarz o genomice medycznej Część II: Podstawowe zasady i metody w genetyce molekularnej. Mayo Clinic Proceedings 2002; 77: 785-808.

5 Tefferi a, Wieben ED, Dewald GW, et al. Elementarz o genomice medycznej Część II: Podstawowe zasady i metody w genetyce molekularnej. Mayo Clinic Proceedings 2002; 77: 785-808.

6 Paik S, Shak S, Tang G, et al. Wielogenowy test PT—PCR do przewidywania nawrotów u pacjentów z rakiem piersi bez węzłów chłonnych-badania Nsabp B-20 i B-14. Proc 26th Annual San Antonio Breast Cancer Symposium. 3-8 grudnia 2003; San Antonio, TX, Abstract #16.

7 Tefferi a, Bolander ME, Ansell SM, et al. Primer on Medical Genomics Part III: Microarray Experiments and Data Analysis. Mayo Clinic Proceedings2002; 77: 927-940.