informacje techniczne i produkty pokrewne
Charakterystyka produktu dla rodzimej peroksydazy chrzanowej
Współczynnik ekstynkcji: EmM = 100 przy pomiarze przy 403 nm.1
Masa cząsteczkowa: (ok. 44 kDa)
obejmuje łańcuch polipeptydowy (33 890 Daltonów), hemin plus Ca2+ (ok. 700 Daltonów),
i węglowodanów (9400 Daltonów).3
Punkt izoelektryczny: izoenzymy mieszczą się w zakresie od 3,0 do 9,0
istnieje co najmniej siedem izoenzymów HRP.
peroksydaza Chrzanowa (HRP) jest wyizolowana z korzeni chrzanu (Amoracia Rusticana) i należy do grupy peroksydaz ferroprotoporfirynowych. HRP jest jednołańcuchowym polipeptydem zawierającym cztery mostki dwusiarczkowe. Jest to glikoproteina zawierająca 18% węglowodanów. Kompozycja węglowodanów składa się z galaktozy, arabinozy, ksylozy, fukozy, mannozy, mannozaminy i galaktozaminy, w zależności od konkretnego izoenzymu.2
specyficzność substratu
HRP łatwo łączy się z nadtlenkiem wodoru (H2O2), a powstały kompleks może utleniać szeroką gamę chromogennych donorów wodoru. Może również wykorzystywać substraty chemiluminescencyjne, takie jak luminol i izoluminol, oraz substraty fluorogenne, takie jak tyramina, kwas homowanilinowy i kwas 4–hydroksyfenylooctowy.
indeks substratu enzym Explorer zawiera linki do kilku chromogennych i chemiluminescencyjnych donorów wodoru używanych do oznaczania aktywności peroksydazy.
inhibitory
następujące związki są inhibitorami peroksydazy chrzanowej: azydek sodu, cyjanek, l–cystyna, dichromian, etylenotiomocznik, hydroksyloamina, siarczek, wanadan, kwas p–aminobenzoesowy, Cd+2, Co+2, Cu+2, Fe+3, Mn+2, Ni+2, pb+2,4
zależność pH
Ph optimum HRP mieści się w zakresie od 6,0 do 6,5. Aktywność przy pH 7,5 wynosi 84% maksimum. Enzym jest najbardziej stabilny w zakresie pH od 5,0 do 9,0.5
Aplikacje
peroksydaza Chrzanowa jest szeroko stosowana jako etykieta dla immunoglobulin w wielu różnych zastosowaniach immunochemicznych, w tym ELISA, immunoblotting i immunohistochemia. HRP można sprzęgać z przeciwciałami za pomocą kilku różnych metod, w tym aldehydu glutaralnego, utleniania periodanu, poprzez wiązania dwusiarczkowe, a także poprzez krzyżownice skierowane na amino i tiol. HRP jest najbardziej pożądaną etykietą dla przeciwciał, ponieważ jest najmniejszą i najbardziej stabilną z trzech najpopularniejszych etykiet enzymatycznych (HRP, fosfataza alkaliczna i B-galaktozydaza), a jej glikozylacja prowadzi do niższego niespecyficznego wiązania.6 protokołów opisujących metody koniugacji glutaraldehydu i periodatu można zrewidować w Harlow, E. et al.7
Oferujemy kilka chromogennych i chemiluminescencyjnych odczynników detekcyjnych do zastosowań blottingu, histologii i ELISA.
oferujemy również kompletną linię sprzężonych przeciwciał HRP.
instrukcje przygotowania
wybór rozpuszczalnika zależy od zamierzonego zastosowania. Sproszkowanymi enzymami są rozpuszczalna woda lub bufor fosforanowy 0,1 M, pH 6 (10 mg / mL). Zawiesinę (P6140) można rozcieńczać w wodzie.
Przechowywanie/stabilność
sproszkowane peroksydazy należy przechowywać w lodówce w temperaturze 2-8 °C. Przechowywanie w zamrażarce jest również dopuszczalne, ale nie jest wymagane. Zawiesinę (P6140) należy przechowywać w temperaturze 2-8 °C. przy prawidłowym przechowywaniu produkty te mają okres ważności co najmniej dwa lata.
stabilność temperaturowa proszków liofilizowanych
stabilność temperaturowa roztworów
stabilność roztworów vs.pH
stabilność roztworów vs. stężenie
profil RZ
RZ (Reinheitszahl): współczynnik absorbancji A403/A275. Jest miarą zawartości Hemin peroksydazy, a nie aktywności enzymatycznej. Nawet preparaty o wysokiej wartości RZ mogą mieć niską aktywność enzymatyczną. W przypadku białek sprzężonych, takich jak przeciwciała przeciwko peroksydazie, wybierz peroksydazę o wartości RZ co najmniej 3,0.
Spectrophotometric Method to Determine the RZ Value for Peroxidase
Peroxidase Enzymes for Labeling
« Menu
