G418 (Geneticin, Invitrogen): rozpuścić w wodzie w dawce 200 mg/ml, filtrować sterylizować i przechowywać w równych ilościach w temperaturze 4 °C.
2
clonNAT (nourseothricin, Werner BioAgents, Jena, Niemcy): rozpuścić w wodzie w dawce 100 mg/ml, filtrować sterylizować i przechowywać
3
Canavanine (L-Canavanine Sulfate Salt, Sigma, C-9758): rozpuścić w wodzie w dawce 100 mg / ml, przefiltrować sterylizować i przechowywać w aliquots w temperaturze 4 °C.
4
Tialysine (chlorowodorek S-(2-aminoetylo)-L-cysteiny, Sigma, a-2636): Dissolve in water at 100 mg/ml, filter sterilize, and store in aliquots at 4 °C.
5
Amino acids supplement powder mixture for synthetic media (complete): Contains 3 g adenine (Sigma), 2 g uracil (ICN), 2 g inositol, 0.2 g para-aminobenzoic acid (Acros Organics), 2 g alanine, 2 g arginine, 2 g asparagine, 2 g aspartic acid, 2 g cysteine, 2 g glutamic acid, 2 g glutamine, 2 g glycine, 2 g histidine, 2 g isoleucine, 10 g leucine, 2 g lysine, 2 g methionine, 2 g phenylalanine, 2 g proline, 2 g serine, 2 g threonine, 2 g tryptophan, 2 g tyrosine, and 2 g valine (Fisher). Drop-out (DO) mieszanka proszku jest kombinacją powyższych składników minus odpowiedni suplement. Dwa gramy mieszaniny proszku DO stosuje się na litr medium.
6
suplement aminokwasowy do pożywki sporulacyjnej: zawiera 2 g histydyny, 10 g leucyny, 2 g lizyny, 2 g uracylu; na litr pożywki sporulacyjnej stosuje się 0,1 g mieszanki suplementów aminokwasowych.
7
glukoza( dekstroza, Fisher): przygotować 40% roztwór, autoklaw i przechowywać w temperaturze pokojowej.
8
: Dodać 120 mg adeniny (Sigma), 10 g ekstraktu drożdżowego, 20 g peptonu, 20 g agaru bacto (BD Difco) do 950 ml wody w kolbie o pojemności 2 l. Po sterylizacji w autoklawie dodać 50 ml 40% roztworu glukozy, dokładnie wymieszać, ostudzić do ~ 65 °C i zalać płytkami.
9
YEPD + G418: schłodzić średnicę YEPD do ~ 65 °C, dodać 1 ml roztworu podstawowego G418 (końcowe stężenie 200 mg / l), dokładnie wymieszać i wlać płytki.
10
YEPD + clonNAT: schłodzić podłoże YEPD do ~ 65 °C, dodać 1 ml roztworu podstawowego clonnatu (stężenie końcowe 100 mg/l), dokładnie wymieszać i zalać płytkami.
11
YEPD + G418 / clonNAT: Schłodzić podłoże YEPD do ~ 65 °C, dodać 1 ml roztworu podstawowego G418 (stężenie końcowe 200 mg/l) i 1 ml roztworu klonnatu (stężenie końcowe 100 mg/l), dokładnie wymieszać i zalać płytkami.
12
wzbogacona sporulacja: dodać 10 g octanu potasu (Fisher), 1 g ekstraktu drożdżowego, 0,5 g glukozy, 0,1 g aminokwasów uzupełniającej mieszaninę proszku do sporulacji, 20 g agaru bacto do 1 L wody w kolbie 2 l. Po autoklawowaniu schłodzić medium do ~ 65 °C, dodać 250 µl roztworu podstawowego G418 (stężenie końcowe 50 mg/l), dokładnie wymieszać i zalać płytkami.
13
(SD/MSG) − His/Arg/Lys + canavanine/tialysine/G418: Dodaj 1,7 g drożdżowej Zasady azotowej bez aminokwasów lub siarczanu amonu (BD Difco), 1 g MSG (uwodniony sól sodowa kwasu L-glutaminowego, Sigma), 2 g mieszanki aminokwasów w proszku (DO − his/Arg/Lys), 100 ml wody w kolbie 250 ml. Dodać 20 g agaru bacto do 850 ml wody w kolbie o pojemności 2 l. Autoklaw osobno. Połącz autoklawowane roztwory, dodaj 50 ml 40% glukozy, chłodne podłoże do ~ 65 °C, dodaj 0,5 ml kanawaniny (50 mg/l), 0,5 ml tialysiny (50 mg/l) i 1 ml roztworów podstawowych G418 (200 mg/l), dokładnie wymieszaj i wlej płytki. Siarczan amonu utrudnia działanie G418 i klonnatu. W związku z tym syntetyczne podłoże zawierające te antybiotyki jest wytwarzane z kwasu glutaminowego sodu jako źródła azotu(Cheng et al., 2000).
14
(SD/MSG) − His/Arg/Lys + canavanine/tialysine/clonNAT: Dodaj 1,7 g drożdżowej Zasady azotowej bez aminokwasów lub siarczanu amonu, 1 g MSG, 2 g mieszanki aminokwasów uzupełniających proszek (DO − his / Arg / Lys), 100 ml wody w kolbie 250 ml. Dodać 20 g agaru bacto do 850 ml wody w kolbie o pojemności 2 l. Autoklaw osobno. Połącz autoklawowane roztwory, dodaj 50 ml 40% glukozy, chłodne podłoże do ~ 65 °C, dodaj 0.5 ml kanawaniny (50 mg/l), 0,5 ml tialysiny (50 mg/l) i 1 ml klonnatu (100 mg/l) roztworów podstawowych, dokładnie wymieszać i zalać płytkami.
15
(SD/MSG) − His/Arg/Lys + canavanine/tialysine/g418/clonNAT: Dodaj 1,7 g drożdżowej Zasady azotowej bez aminokwasów lub siarczanu amonu, 1 g MSG, 2 g mieszanki aminokwasów uzupełniających proszek (DO − his / Arg / Lys), 100 ml wody w kolbie 250 ml. Dodać 20 g agaru bacto do 850 ml wody w kolbie o pojemności 2 l. Autoklaw osobno. Połącz autoklawowane roztwory, dodaj 50 ml 40% glukozy, chłodne podłoże do ~ 65 °C, dodaj 0,5 ml Kanawaniny (50 mg / L), 0. 5 ml roztworu podstawowego tialysine (50 mg/L), 1 ml roztworu g418 (200 mg/l) i 1 ml roztworu klonnatu (100 mg/l), dokładnie wymieszać i zalać płytkami.
16
(SD/MSG) kompletny: dodać 1,7 g drożdżowej Zasady azotowej bez aminokwasów lub siarczanu amonu, 1 g MSG, 2 g mieszanki aminokwasów w proszku uzupełniającej (kompletny), 100 ml wody w kolbie 250 ml. Dodać 20 g agaru bacto do 850 ml wody w kolbie o pojemności 2 l. Autoklaw osobno. Wymieszać roztwory w autoklawie, dodać 50 ml 40% glukozy, dokładnie wymieszać, schłodzić podłoże do ~ 65 °C i zalać płytkami.
17
SD − His/Arg/Lys + canavanine/tialysine: Dodaj 6.7 g drożdżowej bazy azotowej bez aminokwasów (BD Difco), 2 g mieszanki aminokwasów w proszku (DO-his / Arg / Lys), 100 ml wody w kolbie 250 ml. Dodać 20 g agaru bacto do 850 ml wody w kolbie o pojemności 2 l. Autoklaw osobno. Połącz autoklawowane roztwory, dodaj 50 ml 40% glukozy, chłodne podłoże do ~ 65 °C, dodaj 0,5 ml kanawaniny (50 mg/l) i 0,5 ml tialysiny (50 mg / l) roztwory podstawowe, dokładnie wymieszaj i wlej płytki. Podłoże to nie zawiera żadnych antybiotyków, takich jak G418 lub klonnat i dlatego siarczan amonu jest używany jako źródło azotu.
18
SD − Leu/Arg/Lys + kanawanina / tialysina: Dodaj 6,7 g drożdżowej Zasady azotowej bez aminokwasów, 2 g mieszanki aminokwasów w proszku uzupełniającej (do-Leu / Arg / Lys), 100 ml wody w kolbie 250 ml. Dodać 20 g agaru bacto do 850 ml wody w kolbie o pojemności 2 l. Autoklaw osobno. Połącz autoklawowane roztwory, dodaj 50 ml 40% glukozy, chłodne podłoże do ~ 65 °C, dodaj 0,5 ml kanawaniny (50 mg/l) i 0,5 ml tialysiny (50 mg / l) roztwory podstawowe, dokładnie wymieszaj i wlej płytki.
