Giemsa Stain: zasada, procedura i wyniki

Giemsa stain to rodzaj Romanowsky stain, nazwany na cześć Gustava Giemsa, niemieckiego chemika, który stworzył roztwór barwnika. Został zaprojektowany głównie do wykazania pasożytów malarii w rozmazach krwi, ale jest również stosowany w histologii do rutynowego badania rozmazu krwi.

zastosowania bejcy Giemsa

oprócz barwienia pasożytów malarii, bejca Giemsa ma wiele zastosowań w mikrobiologii i patologii:

• plamę Giemsa stosuje się w celu uzyskania zróżnicowanej liczby białych krwinek.
• jest również stosowany do różnicowania morfologii jądrowej i cytoplazmatycznej różnych komórek krwi, takich jak płytki krwi, RBC, WBC.
• w mikrobiologii bejca Giemsa jest używana do barwienia organów inkluzji u Chlamydia trachomatis, gatunków Borrelia, a jeśli bejca Waysona nie jest dostępna, do barwienia Yersinia pestis. Giemsa stain jest również stosowany do barwienia Histoplasma capsulatum, Pneumocystis jiroveci, Klebsiella granulomatis, Penicillium marneffei i sporadycznie kapsułek bakteryjnych.
• ta plama jest również stosowana w cytogenetyce do barwienia chromosomów i identyfikacji aberracji chromosomowych. Jest powszechnie stosowany do G-bandingu (Giemsa-Banding)

zasada bejcy Giemsa

bejca Giemsa jest bejcą różniczkową i zawiera mieszaninę błękitu, błękitu metylenowego i barwnika eozyny. Jest specyficzny dla grup fosforanowych DNA i przyłącza się tam, gdzie występują duże ilości wiązania adenino-tyminowego.

Lazur i eozyna są kwaśnym barwnikiem, który zmiennie plami podstawowe składniki komórek, takie jak cytoplazma, granulki itp.

błękit metylenowy działa jako podstawowy barwnik, który plami kwaśne składniki, zwłaszcza jądro komórki.

metanol działa jako utrwalacz, a także jako plama komórkowa. Utrwalacz nie pozwala na dalszą zmianę w komórkach i sprawia, że przylegają do szkiełka.

skład bejcy Giemsa

bejcę Giemsa można przygotować w domu przy użyciu proszku do bejcowania Giemsa lub można ją uzyskać komercyjnie. Podstawowe składniki obu są takie same; jednak rozcieńczenia mogą być wykonane w zależności od zastosowania.

procedura

A. do wewnętrznego przygotowania bejcy:

1. zważyć wymaganą ilość plamy proszkowej i przenieść do czystej, suchej butelki o pojemności 1 litra. Dodać metanol i dobrze wymieszać.
2. mierzyć i dodać glicerol i dobrze wymieszać.
3. umieść butelkę z plamą w łaźni wodnej w temperaturze 50-60°C lub w temperaturze 37°C do 2 godzin z częstym mieszaniem.
4. Etykieta butelki i przechowywać w chłodnym, ciemnym miejscu z mocnym korkiem.

UWAGA: jeśli woda styka się podczas jakichkolwiek etapów przygotowania plamy, plama ulega zepsuciu, dlatego należy używać, suszyć naczynia szklane i przechowywać w warunkach, w których nie byłoby kontaktu z wodą.

• przefiltruj plamę papierem Whatman filterpaper nr 1 i rozcieńcz wodą buforowaną do pH 7,2, aby uzyskać roztwory robocze

B. W przypadku szkieł barwiących

metoda barwienia, stężenia i czasu plamienia jest różna w zależności od celu, na przykład w przypadku cienkich rozmazów krwi stosuje się rozcieńczenie 1:20, podczas gdy w przypadku grubych rozmazów krwi stosuje się rozcieńczenie 1:50.

rozmaz krwi Forthina

1. naprawić wysuszoną na powietrzu folię w metanolu absolutnym, zanurzając na krótko folię (dwa dipy) w słoiku Coplin zawierającym metanol absolutny.
2. wyjąć i pozostawić do wyschnięcia.
3. Bejca rozcieńczoną bejcą Giemsa (1: 20, obj. / obj.) przez 20 min (dla 1:20 rozcieńczenie, dodać 2 ml podstawowego produktu Giemsa do 40 ml buforowanej wody w słoiku Coplin).
4. umyć przez krótkie zanurzenie szkiełka w słoiku buforowanej wody Coplin (jeden lub dwa zanurzenia).
   Uwaga: nadmierne pranie odbarwi film.
5. pozostawić do wyschnięcia na powietrzu w pozycji pionowej. Obserwuj najpierw pod mikroskopem 40X, a następnie za pomocą soczewki zanurzeniowej oleju

rozmazy krwi

1. pozwalają filmowi dokładnie wyschnąć na powietrzu przez kilka godzin lub przez noc. Nie suszyć filmów w inkubatorze lub na gorąco, ponieważ to naprawi krew i zakłóci lizowanie RBC.
   Uwaga: Jeśli potrzebna jest szybka diagnoza malarii, grube filmy mogą być nieco cieńsze niż zwykle, pozostawione do wyschnięcia na 1 godzinę, a następnie poplamione.
2. NIE NAPRAWIAJ.
3. bejcę rozcieńczoną bejcą Giemsa (1:50, obj./obj.) przez 50 minut (w przypadku rozcieńczenia 1:50 dodać 1 ml podstawowego produktu Giemsa do 50 ml buforowanej wody w słoiku Coplin)
4. przemyć, umieszczając folię w buforowanej wodzie przez 3 do 5 minut.
5. pozostawić do wyschnięcia w pozycji pionowej i obserwować pod mikroskopem najpierw przy 40X, a następnie przy użyciu soczewki zanurzeniowej oleju

dla Chlamydia trachomatis

postępuj zgodnie z wyżej wymienionymi krokami, ale z rozcieńczoną plamą w rozcieńczeniu 1:40 (dodaj 0,5 ml roztworu podstawowego Giemsa do 19,5 ml buforowanej wody) i pozostaw plamę na 90-120 minut.

obserwacja:

na podstawie obserwacji mikroskopowych wyróżnia się organelle komórkowe, bakterie i pasożyty na podstawie ich morfologii i koloru;