niektóre mikroorganizmy mają zdolność do redukcji związków zawierających siarkę (siarkę) do siarkowodoru podczas metabolizmu, który jest powszechnie stosowany jako środek testowy do ich identyfikacji w laboratoriach. Liczne metody są stosowane do wykrywania produkcji H2S przez mikroorganizmy, które różnią się w zależności od źródła siarki i soli metali stosowanych do wskazania tworzenia H2S. SIM jest bardziej wrażliwy na wykrywanie H2S niż TSI lub KIA, ze względu na jego półpłynną naturę, brak zakłócających węglowodanów i zastosowanie peptonizowanego żelaza jako wskaźnika. Jednak papier z octanu ołowiu jest 10 razy bardziej wrażliwy niż inne media.
cele
w celu ustalenia, czy mikrob redukuje związki zawierające siarkę do siarczków, aby wytworzyć Gaz siarkowodorowy.
zasada
związek żelaza i związek siarki są włączone do podłoża testowego w celu przetestowania produkcji gazu siarkowodorowego. Siarkowodór jest produkowany, jeśli związek siarki jest zmniejszona przez szczep bakteryjny. Test ten określa zatem, czy mikrob redukuje związki zawierające siarkę do siarczków podczas procesu metabolizmu. H2S jest wytwarzany przez niektóre bakterie poprzez redukcję aminokwasów zawierających siarkę, takich jak cystyna, metionina lub poprzez redukcję nieorganicznych związków siarki, takich jak tiosiarczany, siarczany lub siarczyny podczas degradacji białek lub gdy oddychanie beztlenowe przenosi elektrony do siarki zamiast do tlenu. W obu przypadkach powstaje H2S (Gaz siarkowodorowy), który reaguje ze Związkiem żelaza, tworząc czarny osad siarczku żelaza. Czarny kolor działa jako wskaźnik obecności siarkowodoru. Wykrywanie gazu siarkowodorowego (H2S) wytwarzanego przez organizm. jest stosowany głównie w celu ułatwienia identyfikacji tego konkretnego organizmu.
Media:
ten test można wykonać przy użyciu kilku mediów, w tym potrójnego żelaza cukrowego (TSI), agaru Żelaznego Kilglera (Kia), medium SIM i papieru z octanu ołowiu.
- Ośrodek do wykrywania H2S
ośrodek ten zawiera siarczan amonu żelaza i tiosiarczan sodu, które następnie razem służą jako wskaźniki do produkcji siarkowodoru. Wytwarzanie siarkowodoru można wykryć, gdy siarczek żelaza, czarny osad, powstaje w wyniku reakcji siarczanu amonu z gazem H2S.
skład:
ekstrakt wołowy 3,0 g pepton 30,0 g żelazawy siarczan amonu 0,2 g tiosiarczan sodu 0,025 g Agar 3,0 g końcowe pH ( w 25°C) 7,3±0.2 Woda destylowana 1000 ml
- agary żelazne do wykrywania H2S
to medium nadaje się do wykrywania produkcji H2S przez enterobakterie. H2S jest wykrywany przez cytrynian żelaza zawarty w pożywce - Test papieru z octanu ołowiu w celu wykrycia H2S
gdy wymagana jest wrażliwa technika wykrywania produkcji H2S, zaleca się test papieru z octanu ołowiu.
procedura
I. w ośrodku ruchliwości indolu Siarczynowego (sim)
- zaszczepić organizm do etykietowanej probówki za pomocą szczepienia nożem.
- inkubować inokulowane probówki w temperaturze 37°C przez 24-48 godzin.
- Obserwuj powstawanie czarnego osadu na podłożu.
II. w agarze żelaznym Kilglera (KIA) i agarze żelaznym z potrójnym cukrem (TSIA)
- zaszczepić badany organizm do KIA i inkubować go w odpowiedniej temperaturze w nocy.
- Obserwuj czernienie medium.
III. test papieru z octanu ołowiu
- zaszczepić organizmowi badanemu tubkę lub butelkę sterylnej wody peptonowej lub bulionu odżywczego.
- włóż taśmę papierową z octanu ołowiu w szyjkę butelki lub tubki powyżej medium i dobrze zatkaj.
- inkubować zaszczepione podłoże w temperaturze 35-37oC i codziennie badać pod kątem zaczernienia dolnej części paska.
wyniki
- wynik pozytywny: zaczernienie na podłożu
- Wynik negatywny:Brak zaczernienia na pożywce
wykorzystuje
- jest stosowany głównie do wspomagania identyfikacji członków rodziny Enterobacteriaceae i czasami do różnicowania innych bakterii, takich jak Bacteroidessps i Brucella sps.
- test pomaga w identyfikacji i różnicowaniu członków Enterobacteriaceae (enterics) od innych pałeczek gramowych.
- jest szczególnie pomocny w identyfikacji gatunków Salmonella, Francisella i Proteus.
ograniczenia
- produkcja H2S może być hamowana w TSI dla organizmów, które wykorzystują sacharozę i hamują mechanizm enzymatyczny, który powoduje produkcję H2S.
- octan ołowiu jest toksyczny dla bakterii i może hamować wzrost niektórych bakterii. Nie pozwól, aby media dotykały paska.
- zaleca się przeprowadzenie badań biochemicznych, immunologicznych, molekularnych lub spektrometrii masowej na koloniach z czystej kultury w celu pełnej identyfikacji.
- Tille, P. M., & Forbes, B. A. (2014). Bailey & Mikrobiologia diagnostyczna Scotta (Wydanie trzynaste.). St. Louis, Missouri: Elsevier.
- Cappuccino J. G. and Sherman N. 2008. Microbiology: a Laboratory Manual, 8th ed. Pearson Benjamin Cummings, San Francisco, CA, USA.
- www.vumicro.com/vumie/help/VUMICRO/Hydrogen_Sulfide_Production_Test.htm
- mic.microbiologyresearch.org/content/journal/micro/10.1099/00221287-8-3-397
- https://microbenotes.com/hydrogen-sulfide-h2s-production-test/
- www.microbiologyresearch.org/docserver/fulltext/micro/8/3/mic-8-3-397.pdf?expires=1543332392&id=id&accname=guest&checksum=C42277C712F05E5951241893FC8EC3F7
- spot.pcc.edu/~jvolpe/b/bi234/lab/differentialMedia/H2Sproduction.html
- https://senthilprabhu.blogspot.com/2017/10/hydrogen-sulphide-h2s-production-test.html
- https://jb.asm.org/content/jb/10/5/439.full.pdf
