Glidklämmor finns i alla livsområden och är väsentliga för effektiv DNA-replikation, vilket krävs Varje gång en cell delar sig, liksom för att samordna trafik på DNA. Escherichia coli (E. coli) beta‐clamp är ett ringformat protein bestående av två identiska monomerer kodade av dnaN-genen som associerar med DNA-polymeras III och underlättar den höga graden av processivitet som krävs för DNA-replikation. Glidande klämproteiner öppnas och laddas på specifika DNA-strukturer av klämlastare i närvaro av ATP. Vi strävar efter att få insikter i bidrag från olika domäner till beta‐funktionen med hjälp av en länkad beta‐klämma som begränsar homodimeren vid ett av två gränssnitt. Vanligtvis tillåter den homo-dimera strukturen hos beta-klämman att den fungerar som ett molekylärt verktygsbälte och binder mer än ett protein samtidigt vid specifika proteininteraktionsställen på klämman. Således kommer en bättre förståelse av glidklämmans roll i processen för DNA-skadatolerans att samlas in genom att undersöka om ett gränssnitt eller bindningsställe är tillräckligt för DNA-laddning eller för andra proteininteraktioner. För att skapa denna konstruktion optimerades länklängden och sekvensen samt uttrycksförhållanden. De länkade beta-proteinerna karakteriserades genom en termisk denatureringsanalys och visade jämförbar termisk stabilitet med vildtyp beta. I en ATPas-analys detekterades liknande mängder oorganiskt fosfat i reaktioner innehållande antingen kopplad beta eller vildtyp beta, vilket indikerar att klämlastaren kan interagera med båda versionerna av beta-klämman. För närvarande undersöker vi om kopplad och vildtyp beta förbättrar processiviteten hos ett polymeras i en primerförlängningsanalys. Vi konstruerar och karakteriserar nu varianter av vildtyp beta och länkad beta för att testa betydelsen av rester vid endast ett av gränssnitten eller partnerproteinbindningsställena.
