En Guide till Koi Herpesvirus sjukdom: hur man upptäcker, behandlar och förebygger

det första erkända fallet av KHV inträffade i Storbritannien 1996 (Haenen et al. 2004). Sedan dess har andra fall bekräftats i nästan alla länder som kultur koi och/eller vanlig karp med undantag för Australien (Hedrick et al. 2000; Haenen et al. 2004, Pokorova et al. 2005). Detta informationsblad är avsett att informera veterinärer, biologer, fiskproducenter och hobbyister om KHV-sjukdom.

vad är KHV?

Figur 1. Koi med fläckiga gälar och sjunkna ögon på grund av koi herpesvirussjukdom.

Koi herpesvirus (även känt som Cyprinid herpesvirus 3; CyHV3) klassificeras som ett dubbelsträngat DNA-virus som tillhör familjen Alloherpesviridae (som inkluderar fiskherpesvirus). Arbetet med Waltzek och kollegor (Waltzek et al. 2005, 2009) avslöjade att KHV verkligen är ett herpesvirus, baserat på virusmorfologi och genetik, och är nära besläktat med karppoxvirus (Cyprinid herpesvirus 1; CyHV1) och guldfiskhematopoietiskt nekrosvirus (Cyprinid herpesvirus 2; CyHV2). Koi herpesvirus sjukdom har diagnostiserats i koi och vanlig karp (Hedrick et al. 2000; OATA 2001). Andra cyprinider (t.ex. guldfisk; Carassius auratus och gräskarp; Ctenopharyngodon idella) och icke-cyprinidarter påverkas vanligtvis inte av KHV, även om KHV-DNA har detekterats i vävnaderna hos guldfisk och andra fiskarter som exponerats för viruset med hjälp av polymeraskedjereaktion (PCR) testmetoder (El-Matbouli et al. 2007, Sadler et al. 2008, Bergmann et al. 2009, Kempter et al. 2009). Hybrid guldfisk (manlig guldfisk C. auratus x kvinnlig vanlig karp C. carpio) var måttligt resistenta mot dödlighet efter experimentell infektion med KHV (Hedrick et al. 2006). Oavsett om hybrid vanlig karp, andra cyprinider eller icke-cyprinidarter kan hysa KHV och senare överföra sjukdomen till Na-arter av vanlig karp förblir kontroversiell.

Koi herpesvirus sjukdom (KHVD) påverkar fisk i olika åldrar, vilket ofta resulterar i 80-100 procent dödlighet i mottagliga populationer när vattentemperaturerna är mellan 60 och 77 F (16 och 25 C) (Haenen et al. 2004). Men som med andra herpesvirala infektioner kan KHV förbli i den infekterade fisken för livet; därför bör fisk som återhämtar sig från ett KHV-utbrott betraktas som bärare av viruset (Petty and Fraser 2005, St.Hilaire et al. 2005, Eide et al. 2011).

vilka är tecknen på KHV?

kliniska tecken på KHV är ofta ospecifika. Dödligheten kan börja mycket snabbt i infekterade populationer, med dödsfall som börjar inom 24 till 48 timmar efter den första starten av kliniska tecken. I experimentella studier dog 82 procent av fisken som exponerades för viruset vid en vattentemperatur på 72 kg F (22 kg C) inom de första 15 dagarna (Ronen et al. 2003). KHV-infektion kan ge allvarliga gillskador som uppvisar gill-fläckar med röda och vita fläckar (Figur 1) (kan likna columnaris sjukdomstecken; srac publikation #479b om Columnaris sjukdom). De vita fläckarna beror på nekros (död) av gillvävnaden. Gillskador orsakade av KHV-sjukdom är de vanligaste kliniska tecknen hos drabbade koi. Andra yttre tecken på KHV kan inkludera blödande gälar, sjunkna ögon och bleka fläckar på huden. Vissa KHV-infekterade koi kan ha en hakad näsa (Goodwin 2012). I vissa fall kan sekundära bakteriella och parasitära infektioner vara det mest uppenbara problemet, vilket maskerar skadorna som orsakas av den primära virusinfektionen. Mikroskopisk undersökning av gillbiopsier avslöjar ofta ett stort antal bakterier och olika parasiter (Hedrick et al. 2000; Haenen et al. 2004).

interna tecken på KHVD är variabla och icke-specifika men kan inkludera större än normala vidhäftningar i kroppshålan och utvidgning och/eller fläckigt utseende av inre organ (Hedrick et al. 2000; Haenen et al 2004).

beteendemässigt förblir drabbade fiskar ofta nära ytan, simmar slö och kan uppvisa andningsbesvär och okoordinerad simning.

hur smittas fisk med KHV?

metoder för spridning (överföring) av KHV inkluderar direktkontakt med infekterad fisk, kontakt med vätskor från infekterad fisk; och kontakt med vatten, lera eller andra fomiter/vektorer som har kommit i kontakt med förorenade system. Det infektiösa viruset kommer främst in i mottaglig fisk genom huden, inklusive gillvävnad (Costes et al. 2009). Beroende på vattentemperatur kan mottagliga fiskar som utsätts för KHV antingen smittas, utveckla sjukdom och dö; eller de kan överleva det första utbrottet av sjukdomen och bli bärare av viruset (Petty and Fraser 2005, St.Hilaire et al. 2005, Eide et al. 2011). Fisk som överlever exponering för KHV eller får KHV-vaccinet kan immuniseras och utveckla en skyddsnivå mot viruset, även om skyddslängden förblir okänd (Ronen et al. 2003, Perelberg et al. 2008). Överlevande av KHV-utbrott kan bli bärare av viruset och kan sprida sjukdomen till mottaglig fisk. Dessa bärfiskar kanske inte visar tecken på KHV-infektion även om de kan bära och/eller kasta viruset.

hur påverkar vattentemperaturen KHV-sjukdomen?

utbrott av KHV-sjukdom (KHVD) uppträder vanligtvis på våren och hösten när vattentemperaturerna är mellan 60 och 77 F (16 och 25 c) med en inkubationsperiod på 7-21 dagar beroende på vattentemperatur (Haenen et al. 2004). KHVD vid temperaturer så låga som 60 f (15,5-16 C) har rapporterats vid vanliga karputbrott i Japan, och experimentella studier har visat att viruset kan inducera dödlighet upp till cirka 82 f (28 C). Varmare vattentemperaturer inducerar snabbare klinisk sjukdom jämfört med fisk som hålls vid lägre temperaturer. Vid lägre vattentemperaturer (t. ex., 55 kcal f) kan viruset infektera fisk utan att inducera kliniska tecken på sjukdom, men när tillåtna vattentemperaturer återigen upplevs visar fisken typiska KHV-tecken och kan dö (Gilad et al. 2003, St. Hilaire et al. 2005).

Hur vet jag om min fisk har KHV?

positiv diagnos av KHV kräver hjälp av en veterinär eller fiskhälsospecialist och ett diagnostiskt laboratorium för fisksjukdomar. Diagnostisk identifiering av KHV kan åstadkommas genom flera direkta och indirekta metoder. Direkta metoder är procedurer som upptäcker verkligt virus eller ”bitar” av virus. Indirekta metoder är procedurer som avgör om en fisk har monterat ett immunsvar mot KHV efter exponering för virus genom att mäta Anti-KHV-antikroppsnivåer i blodet (Adkison et al. 2005, St-Hilaire et al. 2005, 2009).

direkta metoder som används för att identifiera KHV inkluderar: 1) virusisolering och identifiering (dvs. odling av viruset) med användning av en mottaglig cellinje såsom Koi Fin (KF-1) cellinje {optimal tillväxt observerad vid temperaturer mellan 59 och 77 F (15 och 25 C)} och 2) PCR-tekniker (dvs. testning för förekomst av KHV-DNA). För dessa direkta diagnostiska tester avlägsnas vävnader från fisk som samlas levande och sedan avlivas. Isolering och detektering av viruset i vävnader från fisk som är död längre än några timmar kan vara opålitligt. Icke-dödliga direkta diagnostiska tester är tillgängliga på prover som blod, fekalt material, slem och gillklämmor (dvs biopsier), men dessa tester kan ge mindre definitiva eller mindre exakta resultat. Ett positivt cellodlingstest indikerar en aktiv, pågående infektion med KHV. Positiv detektion av KHV-DNA med PCR indikerar att viruset är närvarande, så det kan användas för att bekräfta KHV-sjukdom hos kliniskt sjuka fiskar och kanske till och med för att identifiera bärare (Eide et al. 2011).

en indirekt testmetod för KHV som har använts i stor utsträckning är enzymbunden immunosorbentanalys (ELISA). KHV ELISA använder ett blodprov och är därför ett icke-dödligt diagnostiskt verktyg. ELISA-data kan ge bevis för att en fisk för närvarande monterar eller tidigare har monterat ett immunsvar (dvs. produktion av antikroppar) mot KHV. Ett positivt ELISA-test för KHV indikerar att fisken har producerat antikroppar mot KHV efter en tidigare exponering för viruset. Antikroppsproducerande immunceller tar emellertid tid att aktiveras, och med tiden, om en fisk inte längre är sjuk, kan Anti-KHV-antikroppsproduktion sakta ner eller stoppa. Därför kanske ELISA inte kan upptäcka antikroppar mot KHV om infektionen inträffade år tidigare eller om fisken ännu inte har haft tid att producera antikroppar.

negativa resultat med antingen direkta eller indirekta tester betyder inte nödvändigtvis att fisk inte är bärare. Det finns inget test som definitivt upptäcker alla bärare eller överlevande.

finns det behandling för KHV?

det finns ingen behandling för KHV. Antivirala läkemedel är inte tillgängliga för att behandla KHV eller andra virussjukdomar hos odlad fisk. Studier har visat att koi kan överleva ett utbrott av KHV om vattentemperaturerna höjs till 86 kg F (30 kg C) under utbrottet (Ronen et al. 2003). Denna teknik ökar emellertid endast marginellt överlevnadsgraden, och artificiellt höja vattentemperaturerna över 80 kg f i anläggningar kan leda till en ökad förekomst av andra vanligare bakteriella och parasitiska sjukdomar. Höga vattentemperaturer rekommenderas vanligtvis inte för rutinmässig djurhållning och hantering av koi och vanlig karp. Dessutom, och ännu viktigare, koi som överlever ett KHV-utbrott eller de som exponeras vid höga vattentemperaturer kan bli bärare av viruset. Dessa bärare koi är en källa till sjukdomen till mottagliga fiskar när förhållandena är lämpliga för virusutsöndring och infektion. På grund av tidigare exponering och immunisering mot viruset kommer bärarfisk vanligtvis inte att ge efter för KHV-sjukdom eller visa tecken på klinisk infektion.

nyligen godkände USDA APHIS användningen av ett försvagat levande vaccin för förebyggande av KHVD, som ska administreras till vanlig karp eller koi tyngre än 100 gram (vaccinet är inte godkänt för användning i stamstock). Vaccinet, ursprungligen utvecklat av en israelisk forskargrupp (Ronen et al. 2003), genererar höga anti-KHV-antikroppstitrar och skyddar vaccinerad vanlig karp eller koi vid efterföljande viral utmaning (Ronen et al. 2003, Perelberg et al. 2008). Det har dock framförts farhågor om vaccinets effektivitet och om hur länge det skydd som vaccineras fisk ges. För närvarande är det okänt om vaccinerad fisk blir bärare av vaccinstammen eller om de är skyddade mot infektion av vildtypsstammen som skulle utgöra ett hot mot ovaccinerad vanlig karp. En annan utmaning när det gäller vaccinet är att inga diagnostiska tester är kommersiellt tillgängliga som kan skilja vaccinerade mot naturligt infekterade/exponerade fiskar.

eftersom KHV-utbrott har orsakat stora förluster vid koi-och gemensamma karpanläggningar och eftersom det finns oro för att överlevande är bärare, bör alla med koi som har diagnostiserats med KHV överväga avfolkning (eliminera hela befolkningen) som ett logiskt alternativ. Alla material och system som den infekterade fisken har kontaktat ska rengöras och desinficeras.

virala partiklar i miljövatten kan förbli smittsamma i upp till tre dagar (Shimizu et al. 2006). Vanliga desinfektionsprotokoll (se nedan) kan dock användas för att eliminera viruset från vattensystem och utrustning. Biofilter och biofiltermedier som utsätts för viruset bör också rengöras och desinficeras noggrant. Före desinfektion bör utrustningen rengöras från skräp eller organisk uppbyggnad, eftersom dessa kan minska desinfektionsmedlets effektivitet. Klorlösningar (t.ex. hushållsblekmedel) kan användas för att desinficera stor utrustning eller system utan fisk. Det rekommenderade protokollet för klor är 200 ppm (200 mg/L) under en timme (Noga 1996). Korrekt dosering av denna aktiva ingrediens beror på vilken typ av klor som används. För hushållsblekmedel, som är 5,25 procent natriumhypoklorit per liter, kommer 35 ml per gallon vatten att ge 200 mg/L slutlig koncentration.

kvartära ammoniumföreningar (QAC) kan också användas för system och utrustning. Kvartära ammoniumföreningar är mildare på nät än klorlösningar. Den rekommenderade QAC-koncentrationen för desinfektion är 500 ppm (500 mg/L) under en timme (Noga 1996). Korrekt dosering av QACs beror på typen / koncentrationen i blandningen som används eftersom koncentrationerna varierar beroende på vilken produkt som används. Olika QAC produkter kan variera från 10 procent till 50 procent aktiv ingrediens. Till exempel är Roccal-D Plus Bisexuell (Pharmacia & Upjohn Company, Pfizer) cirka 24 procent aktiv ingrediens; därför skulle en slutlig behandlingskoncentration på 500 mg/L kräva cirka 7, 9 mL Roccal-D Plus bisexuell per gallon vatten. Skölj noggrant efter användning av någon typ av desinfektionsmedel för att eliminera kvarvarande desinfektionsmedel som kan döda fisk.

hur kan KHV förhindras?

innan du får någon fisk, fråga först leverantören om det har förekommit några större oförklarliga förluster i befolkningen. Övervakning och testning för KHV kan göras genom laboratorietester, så fråga leverantörer om någon testning för KHV har gjorts och begära en kopia av laboratorieresultatdokumentation. Det bästa sättet att förhindra KHV är att känna dina fiskleverantörer och ha ett bra samarbete med dem.

karantän (det vill säga separation från andra koi) är den mest pålitliga metoden för att undvika införande av patogener i en damm eller anläggning. För att genomföra ett effektivt karantänförfarande måste alla nya fiskar förvaras i ett separat system, helst i en annan byggnad eller ett annat område än den inhemska fisken. Bosatt fisk bör matas, hanteras och underhållas före den nya fisken. Den karantänerade fisken kräver särskild utrustning som nät, hinkar och sifonslangar som endast används för dem. Dessutom bör fotbad och handtvättar användas av alla som kommer in och lämnar karantänområdet. Fisken ska sättas i karantän i minst 30 dagar. Speciellt för KHV bör nya koi sättas i karantän i vatten som är 75 kcal f (24 kcal C) i minst 30 dagar. Vid slutet av karantänperioden bör alla sjuka fiskar undersökas av en veterinär och/eller diagnoslaboratorium för att utesluta KHV eller andra sjukdomar. Om alla fiskar verkar friska ska blodprover samlas in från dessa fiskar i karantän och lämnas in för antikroppsupptäckt med ELISA. (Atkinson et al. 2005; St. Hilaire et al. 2009)

Koi-hobbyister uppmuntras att främja användningen av koi-shower i engelsk stil, som håller olika källor (ägare) till koi separerade under showen och bedömer. Dessutom bör separata nät, sifonslangar och annan utrustning användas av alla showdeltagare för sin egen fisk. Den japanska stilen, där koi från olika ägare placeras tillsammans i samma tank, kan leda till spridning av sjukdomar bland mottagliga fiskar. Oavsett showstil, fisk som återvänder från utställningar bör sättas i karantän i minst 30 dagar och hållas kl 75 kcal F innan de placeras tillbaka i den allmänna befolkningen. För ökad säkerhet kan blodprovtagningsantikroppstestning vara till hjälp. Överlevande (fisk som tidigare har utsatts för KHV-sjukdom) ska aldrig tas till en koi-show.

i slutet av karantänperioden och innan du placerar alla fiskar tillsammans, placera flera nya koi med flera koi från den etablerade befolkningen i ett separat område bort från resten av den etablerade befolkningen och se dem för tecken på sjukdom. Detta ”test” kan hjälpa till att avgöra med ett mindre antal fiskar om att placera de två populationerna tillsammans efter karantän kan orsaka problem. Tyvärr finns det inga garantier.

vem ska jag kontakta om jag misstänker att min fisk har KHV eller om jag vill ha mer information?

kommersiella fiskproducenter, grossister och återförsäljare i Florida kan kontakta ett av följande University of Florida Fish Disease Diagnostic Labs*:

i norra Florida:

Thomas B. Waltzek
Wildlife and Aquatic Veterinary Disease Laboratory (WAVDL)
Aquatic Pathobiology
University of Florida
Bldg. 471, 2173 Mowry Road
Gainesville, Florida 32611
(352) 273-5202
e-post: [email protected]

i södra Florida:

Roy P. E. Yanong eller Deborah Pouder
tropiskt Vattenbrukslaboratorium
Diagnoslaboratorium för fisksjukdomar
University of Florida
1408 24th St. se 33570
Ruskin, Florida
(813) 671-5230
http://tal.ifas.ufl.edu

*observera: dessa laboratorier accepterar endast fall från kommersiella fiskproducenter, grossister och återförsäljare.

hobbyister och personliga koi-dammägare (eller kommersiella fiskproducenter, grossister och återförsäljare utanför Florida) kan söka efter en akvatisk veterinär eller akvatisk diagnostisk laboratorium i deras område på AquaVetMed-webbplatsen (http://www.aquavetmed.info) eller http://www.myveterinarian.com/avma/vclPublic/#.

vilka är de regulatoriska överväganden som är förknippade med KHV?

från och med januari 2007 lades KHV till Världsorganisationen för djurhälsa (OIE; www.oie.int) sjukdomslista för fisk. På grund av denna lista USA: s Department of Agriculture Animal and Plant Health Inspection Service (USDA APHIS) ber att ackrediterade veterinärer och diagnostiska laboratorier rapporterar positiva fall av KHV till området veterinär-in-charge (AVIC) i den stat där fisken har sitt ursprung. Ingen kundinformation (t.ex. namn, adress) kommer dock att begäras. Denna information kommer att hjälpa USDA att avgöra vad förekomsten av KHV är i USA. USDA APHIS har inga importhälsokrav som är specifika för KHV för koi eller annan fisk som rör sig mellanstatligt eller internationellt. Det finns ingen obligatorisk avfolkning för populationer av koi infekterade med KHV. Det är upp till ägaren av dessa djur och deras veterinär att bestämma vilken kurs som ska gå.

Koi uppfödare, återförsäljare, utställare och veterinärer bör vara medvetna om internationella exporthälsobestämmelser om förflyttning av KHV-vaccinerad fisk. Importkraven för vissa länder anger att KHV-vaccinerad fisk inte kommer att tillåtas inträde. Kontrollera APHIS webbplats för statliga och internationella hälsokrav (listade respektive): http://www.aphis.usda.gov/animal_health/animal_dis_spec/aquaculture/aquastates.shtml

http://www.aphis.usda.gov/regulations/vs/iregs/animals/

eller kontakta det lokala USDA APHIS VS Area Office för hjälp (http://www.aphis.usda.gov/animal_health/area_offices/).

kan människor få KHV?

det finns ingen zoonotisk oro för KHV. Herpesviruset som är ansvarigt för att orsaka KHV-sjukdom hos fisk kommer inte att orsaka sjukdom hos människor.

hur skiljer sig KHV från andra virussjukdomar?

det är viktigt att skilja KHV från andra virus som kan orsaka sjukdom hos karp och koi. Två andra viktiga virussjukdomar som erkänns i karp är vårviremi av karp (SVC) och karppox (Cyprinid herpesvirus 1; CyHV1). Dessa sjukdomar har signifikant olika hanterings-och reglerande konsekvenser (Tabell 1). Både KHV och SVC listas nu som anmälningspliktiga fisksjukdomar av OIE. Men inom USA anses SVC vara en utländsk eller exotisk (inte närvarande) fisksjukdom hos akvakulturerade mottagliga arter och som sådan är den ackrediterade veterinären eller laboratoriet skyldig att anmäla bekräftade utbrott till USDA APHIS Veterinary Services tjänstemän som i sin tur kommer att meddela OIE. Som jämförelse anses KHV vara utbredd i USA. USDA APHIS ber ackrediterade veterinärer och laboratorier att rapportera fall av KHV till områdesveterinären (AVIC) i den stat där utbrottet inträffar. Informationen kommer att hjälpa USDA avgöra vad den verkliga förekomsten av KHV är i USA men, varje utbrott av KHV kommer inte att anmälas till OIE.

Vårviremi vid karpsjukdom orsakas av ett enkelsträngat RNA-virus, Rhabdovirus carpio, och har rapporterats hos vanlig karp och koi (C. carpio), gräskarp (C. idella), bighead karp (Aristichthys nobilis), silverkarp (Hypophthalmichthys molitrix), Crucian karp (Carassius carassius) och vanlig guldfisk (C. auratus). För mer information om Svc se Tabell 1 och UF/IFAS faktablad ”Spring viremia av karp” (VM-142).

Karpkoppsjukdom (Cyprinid herpesvirus 1; CyHV1) orsakas av ett annat herpesvirus från KHV (Herpesvirus cyprini) som har en bred geografisk fördelning och påverkar vanlig karp och koi. Carp pox orsakar vanligtvis släta upphöjda tillväxter (”vårtliknande massor”) på hud och fenor hos äldre fiskar men kan vara förknippade med hög dödlighet i yngel mindre än två månaders ålder (Sano et al. 1990). Carp pox är inte en rapporterbar eller anmälningspliktig sjukdom i de amerikanska vattentemperaturerna över 68 kg F (20 kg C) hjälper till att minska hud-och fintillväxten på äldre fiskar, men eliminerar inte viruset från fisken (Tabell 1). I mogen fisk är karppox vanligtvis en icke-dödlig, självbegränsande sjukdom (dvs de flesta om inte alla tillväxter kommer att lösa sig vid varmare temperaturer på egen hand).

sammanfattning

Koi herpesvirus sjukdom är en förödande sjukdom av prydnads koi och karp. Det finns flera metoder för att upptäcka olika tillstånd av infektionen. Det finns ingen effektiv behandling för att befria fisken från viruset. God förvaltningspraxis, inklusive karantän, testning och lämplig djurhållning, är viktiga komponenter för att förebygga denna sjukdom för alla Koi-och vanliga karpproducenter, återförsäljare och hobbyister.

augusti 2013