G418

G418 (Geneticin, Invitrogen): Lös upp i vatten vid 200 mg/ml, filter sterilisera, och lagra i alikvoter på 4 msk C.

clonNAT (nourseothricin, Werner BioAgents, Jena, Tyskland): Lös upp i vatten vid 100 mg/ml, filter sterilisera, och förvara i alikvoter alikvoter vid 4 kg C.

Kanavanin (l-Kanavaninsulfatsalt, Sigma, C-9758): Lös upp i vatten vid 100 mg/ml, filtrera sterilisera och förvara i alikvoter vid 4 kg C.

tialysin (s-(2-aminoetyl)-l-Cysteinhydroklorid, Sigma, a-2636): Dissolve in water at 100 mg/ml, filter sterilize, and store in aliquots at 4 °C.

Amino acids supplement powder mixture for synthetic media (complete): Contains 3 g adenine (Sigma), 2 g uracil (ICN), 2 g inositol, 0.2 g para-aminobenzoic acid (Acros Organics), 2 g alanine, 2 g arginine, 2 g asparagine, 2 g aspartic acid, 2 g cysteine, 2 g glutamic acid, 2 g glutamine, 2 g glycine, 2 g histidine, 2 g isoleucine, 10 g leucine, 2 g lysine, 2 g methionine, 2 g phenylalanine, 2 g proline, 2 g serine, 2 g threonine, 2 g tryptophan, 2 g tyrosine, and 2 g valine (Fisher). Drop-out (DO) pulverblandning är en kombination av ovanstående ingredienser minus lämpligt tillskott. Två gram av Do-pulverblandningen används per liter medium.

aminosyror tillägg för sporulationsmedium: innehåller 2 g histidin, 10 g leucin, 2 g lysin, 2 g uracil; 0,1 g av aminosyratillskott pulverblandning används per liter sporulationsmedium.

glukos (dextros, Fisher): Förbered 40% lösning, autoklav och förvara vid rumstemperatur.

YEPD: Tillsätt 120 mg adenin (Sigma), 10 g jästextrakt, 20 g pepton, 20 g bacto-agar (BD Difco) till 950 ml vatten i en 2 l kolv. Efter autoklavering, tillsätt 50 ml 40% glukoslösning, blanda noggrant, kyla till ~ 65 msk C och häll plattor.

YEPD + G418: Cool YEPD medium till ~ 65 CCB, tillsätt 1 ml G418 stamlösning (slutlig koncentration 200 mg/l), blanda noggrant och häll plattor.

YEPD + clonNAT: Cool YEPD medium till ~ 65 CCB, tillsätt 1 ml clonnat stamlösning (slutlig koncentration 100 mg/l), blanda noggrant och häll plattor.

YEPD + G418 / klonnat: Cool YEPD medium till ~ 65 ccctillsätt 1 ml G418 (slutlig koncentration 200 mg/l) och 1 ml klonnat (slutlig koncentration 100 mg/l) stamlösningar, blanda noggrant och häll plattor.

berikad sporulation: tillsätt 10 g kaliumacetat (Fisher), 1 g jästextrakt, 0,5 g glukos, 0,1 g aminosyror komplettera pulverblandning för sporulation, 20 g bacto agar till 1 l vatten i en 2 L kolv. Efter autoklavering, kyla medium till ~ 65 C, tillsätt 250 cg418 stamlösning (slutlig koncentration 50 mg / l), blanda noggrant och häll plattor.

(SD/MSG) − His/Arg/Lys + canavanin/tialysin/G418: tillsätt 1,7 g jästkvävebas utan aminosyror eller ammoniumsulfat (BD Difco), 1 g MSG (L-glutaminsyra natriumsalt hydrat, Sigma), 2 g aminosyror kompletterar pulverblandning (DO − His/Arg/Lys), 100 ml vatten i en 250 ml kolv. Tillsätt 20 g bacto agar till 850 ml vatten i en 2 l kolv. Autoklav separat. Kombinera autoklaverade lösningar, tillsätt 50 ml 40% glukos, kylmedium till ~ 65 msk C, tillsätt 0,5 ml canavanin (50 mg/l), 0,5 ml tialysin (50 mg/l) och 1 ml G418 (200 mg/l) stamlösningar, blanda noggrant och häll plattor. Ammoniumsulfat hindrar funktionen av G418 och klonnat. Därför tillverkas syntetiskt medium innehållande dessa antibiotika med mononatriumglutaminsyra som kvävekälla (Cheng et al., 2000).

(SD/MSG) − His/Arg/Lys + canavanin/tialysin/clonNAT: tillsätt 1,7 g jäst kvävebas utan aminosyror eller ammoniumsulfat, 1 g MSG, 2 g aminosyror komplettera pulverblandning (DO − His/Arg/Lys), 100 ml vatten i en 250 ml kolv. Tillsätt 20 g bacto agar till 850 ml vatten i en 2 l kolv. Autoklav separat. Kombinera autoklaverade lösningar, tillsätt 50 ml 40% glukos, kylmedium till ~ 65 msk C, tillsätt 0.5 ml canavanin (50 mg/l), 0,5 ml tialysin (50 mg/l) och 1 ml klonnat (100 mg / l) stamlösningar, blanda noggrant och häll plattor.

(SD/MSG) − His/Arg/Lys + canavanin/tialysin/G418/clonNAT: tillsätt 1,7 g jäst kvävebas utan aminosyror eller ammoniumsulfat, 1 g MSG, 2 g aminosyror komplettera pulverblandning (DO − His/Arg/Lys), 100 ml vatten i en 250 ml kolv. Tillsätt 20 g bacto agar till 850 ml vatten i en 2 l kolv. Autoklav separat. Kombinera autoklaverade lösningar, tillsätt 50 ml 40% glukos, kylmedium till ~ 65 msk C, tillsätt 0,5 ml Canavanin (50 mg/l), 0.5 ml tialysin (50 mg/l), 1 ml G418 (200 mg/l) och 1 ml klonnat (100 mg / l) stamlösningar, blanda noggrant och häll plattor.

(SD/MSG) komplett: tillsätt 1,7 g jäst kvävebas utan aminosyror eller ammoniumsulfat, 1 g MSG, 2 g aminosyror komplettera pulverblandning (komplett), 100 ml vatten i en 250 ml kolv. Tillsätt 20 g bacto agar till 850 ml vatten i en 2 l kolv. Autoklav separat. Kombinera autoklaverade lösningar, tillsätt 50 ml 40% glukos, blanda noggrant, kylmedium till ~ 65 msk C och häll plattor.

SD-His/Arg/Lys + canavanine / tialysin: Lägg till 6.7 g jäst kvävebas utan aminosyror (BD Difco), 2 g aminosyror kompletterar pulverblandning (DO − His/Arg/Lys), 100 ml vatten i en 250 ml kolv. Tillsätt 20 g bacto agar till 850 ml vatten i en 2 l kolv. Autoklav separat. Kombinera autoklaverade lösningar, tillsätt 50 ml 40% glukos, kylmedium till ~ 65 msk C, tillsätt 0,5 ml canavanin (50 mg/l) och 0,5 ml tialysin (50 mg/l) stamlösningar, blanda noggrant och häll plattor. Detta medium innehåller inga antibiotika som G418 eller clonNAT och därför används ammoniumsulfat som kvävekälla.

SD − Leu/Arg/Lys + canavanin/tialysin: tillsätt 6,7 g jästkvävebas utan aminosyror, 2 g aminosyror kompletterar pulverblandning (DO − Leu/Arg/Lys), 100 ml vatten i en 250 ml kolv. Tillsätt 20 g bacto agar till 850 ml vatten i en 2 l kolv. Autoklav separat. Kombinera autoklaverade lösningar, tillsätt 50 ml 40% glukos, kylmedium till ~ 65 msk C, tillsätt 0,5 ml canavanin (50 mg/l) och 0,5 ml tialysin (50 mg/l) stamlösningar, blanda noggrant och häll plattor.