Giemsa-fläck: princip, procedur och resultat

Giemsa-fläck är en typ av Romanowsky-fläck, uppkallad efter Gustav Giemsa, en tysk kemist som skapade en färglösning. Det var främst utformat för demonstration av malariaparasiter i blodutstryk, men det används också i histologi för rutinundersökning av blodutstryk.

användningar av Giemsa-fläck

förutom färgning av malariaparasiter har Giemsa-fläck en mängd olika tillämpningar inom mikrobiologi och patologi:

• Giemsa-fläck används för att erhålla differentiella vita blodkroppar.
• det används också för att differentiera kärn-och cytoplasmatisk morfologi hos de olika blodcellerna som blodplättar, RBC, WBC.
• i mikrobiologi används Giemsa-fläck för färgning av inklusionskroppar i Chlamydia trachomatis, Borrelia-arter, och om Waysons fläck inte är tillgänglig, för att fläcka Yersinia pestis. Giemsa fläck också används för att färga Histoplasma capsulatum, Pneumocystis jiroveci, Klebsiella granulomatis, Penicillium marneffei och ibland bakteriella kapslar.
• denna fläck används också i cytogenetik för att fläcka kromosomerna och identifiera kromosomavvikelser. Det används ofta för G-banding (Giemsa-Banding)

principen för Giemsa Stain

Giemsa stain är en differentiell fläck och innehåller en blandning av azurblå, metylenblå och Eosinfärg. Det är specifikt för fosfatgrupperna av DNA och fäster sig där det finns stora mängder adenin-tyminbindning.

Azure och eosin är sura färgämnen som variably fläckar de grundläggande komponenterna i cellerna som cytoplasman, granulat etc.

metylenblått fungerar som det grundläggande färgämnet, vilket fläckar de sura komponenterna, särskilt cellens kärna.

metanol fungerar som ett fixativ såväl som den cellulära fläcken. Fixativet tillåter ingen ytterligare förändring i cellerna och får dem att hålla fast vid glasskivan.

sammansättning av Giemsa-fläck

Giemsa-fläck kan beredas i hus med Giemsa-fläckpulver eller kan erhållas kommersiellt. De grundläggande ingredienserna i båda är desamma; emellertid kan utspädningar göras beroende på användning.

förfarande

A. för intern beredning av fläck:

1. väg den önskade mängden pulverfläck och överför till en ren, torr flaska med 1 liter kapacitet. Tillsätt metanol och blanda väl.
2. mät och tillsätt glycerol och blanda väl.
3. placera flaskan av fläcken i vattenbad vid 50-60 C eller 37 C i upp till 2 timmar med frekvent blandning.
4. Märk flaskan och förvara den på en sval, mörk plats med en fast propp.

OBS: Om vatten kommer i kontakt under några steg i beredningen av fläcken, fläcken blir bortskämd, därför använda, torka glas och förvara i förhållanden där det inte skulle finnas någon vattenkontakt.

• filtrera fläcken med Whatman filterpaper no. 1 och späd med vatten buffrat till pH 7.2 för att göra arbetslösningar

B. För färgning diabilder

metoden för färgning, koncentration och tidpunkt för fläck som används varierar beroende på syftet, till exempel, tunna blodutstryk användning 1:20 utspädning av lager medan för tjock blodutstryk 1:50 utspädning används.

Förtunn blodutstryk

1. fixa lufttorkad film i absolut metanol genom att doppa filmen kort (två dips) i en Coplinburk som innehåller absolut metanol.
2. avlägsna och låt lufttorka.
3. fläck med utspädd Giemsa fläck (1: 20, vol / vol) för 20 min (för en 1:20 utspädning, tillsätt 2 ml lager Giemsa till 40 ml buffrat vatten i en Coplin burk).
4. tvätta genom att kort doppa bilden in och ut ur en Coplin burk buffrat vatten (en eller två dopp).
   Obs: överdriven tvätt kommer att missfärga filmen.
5. låt lufttorka i vertikalt läge. Observera under mikroskopet först vid 40X och använd sedan oljedämpningslins

förtjocka blodutstryk

1. låt filmen lufttorka noggrant i flera timmar eller över natten. Torka inte filmer i en inkubator eller genom värme, eftersom detta kommer att fixa blodet och störa lysningen av RBC.
   Obs: Om en snabb diagnos av malaria behövs kan tjocka filmer göras något tunnare än vanligt, får torka i 1 timme och sedan färgas.
2. FIXA INTE.
3. fläck med utspädd Giemsa fläck (1:50, vol/vol) för 50 min (för en 1: 50 utspädning, tillsätt 1 ml lager Giemsa till 50 ml buffrat vatten i en Coplin burk)
4. tvätta genom att placera filmen i buffrat vatten för 3 till 5 min.
5. låt lufttorka i vertikalt läge och observera under mikroskopet först vid 40X och sedan använda oljedämpningslins

för Chlamydia trachomatis

följ ovannämnda steg men med den utspädda fläcken av 1:40 utspädning (tillsätt 0, 5 ml lager Giemsa-lösning till 19, 5 ml buffrat vatten) och lämna fläcken i 90-120 minuter.

OBSERVATION:

på mikroskopisk observation skiljer sig cellorganeller, bakterier och parasiter utifrån deras morfologi och färg;