teknisk Information och relaterade produkter
Produktegenskaper för nativt Pepparrotperoxidas
Utrotningskoefficient: EmM = 100 mätt vid 403 nm.1
Molekylvikt: (ca. 44 kDa)
innefattar polypeptidkedjan (33 890 Dalton), hemin plus Ca2 +(ca. 700 Dalton),
och kolhydrat (9400 Dalton).3
isoelektrisk punkt: isozymer sträcker sig från 3,0-9,0
minst sju isozymer av HRP existerar.2
Pepparrotperoxidas (HRP) isoleras från pepparrotrötter (Amoracia rusticana) och tillhör ferroprotoporfyringruppen peroxidaser. HRP är en polypeptid med en kedja som innehåller fyra disulfidbroar. Det är ett glykoprotein innehållande 18% kolhydrat. Kolhydratkompositionen består av galaktos, arabinos, xylos, fukos, mannos, mannosamin och galaktosamin, beroende på det specifika isozymet.2
Substratspecificitet
HRP kombinerar lätt med väteperoxid (H2O2), och det resulterande komplexet kan oxidera en mängd olika kromogena vätegivare. Det kan också använda kemiluminescerande substrat såsom luminol och isoluminol och fluorogena substrat såsom tyramin, homovanillinsyra och 4–hydroxifenylättiksyra.
Enzymutforskarens Substratindex ger länkar till flera kromogena och kemiluminescerande vätegivare som används för att analysera peroxidasaktivitet.
hämmare
följande föreningar är hämmare av pepparrotperoxidas: natriumazid, cyanid, L–cystin, dikromat, etylentiourea, hydroxylamin, sulfid, vanadat, p–aminobensoesyra, Cd+2, Co+2, Cu+2, Fe+3, Mn+2, Ni+2, Pb+2,4
pH-beroende
pH-optimum av HRP ligger i intervallet 6,0 till 6,5. Aktivitet vid pH 7,5 är 84% av det maximala. Enzymet är mest stabilt i pH-intervallet 5,0 till 9,0.5
applikationer
Pepparrotperoxidas används ofta som en etikett för immunoglobuliner i många olika immunokemiapplikationer, inklusive ELISA, immunoblotting och immunhistokemi. HRP kan konjugeras till antikroppar med flera olika metoder, inklusive glutaraldehyd, periodatoxidation, genom disulfidbindningar, och även via amino-och tiolstyrda korsinkare. HRP är den mest önskade etiketten för antikroppar eftersom den är den minsta och mest stabila av de tre mest populära enzymetiketterna (HRP, alkaliskt fosfatas och B-galaktosidas), och dess glykosylering leder till lägre icke-specifik bindning.6 protokoll som beskriver glutaraldehyd-och periodatkonjugeringsmetoderna kan ses över i Harlow, E. et al.7
Vi erbjuder flera kromogena och kemiluminescerande detekteringsreagenser för blotting, histologi och ELISA-applikationer.
Vi erbjuder också ett komplett sortiment av HRP konjugerade antikroppar.
Beredningsanvisningar
valet av lösningsmedel beror på den avsedda applikationen. De pulveriserade enzymerna är lösligt vatten eller 0,1 M fosfatbuffert, pH 6 (10 mg/mL). Suspensionen (P6140) kan spädas i vatten.
förvaring / stabilitet
de pulveriserade peroxidaserna bör kylas vid 2-8 C. frysförvaring är också acceptabelt men krävs inte. Suspensionen (P6140) ska förvaras vid 2-8 kcal C. Om de lagras korrekt har dessa produkter en hållbarhetstid på minst två år.
temperaturstabilitet av Lyofiliserade pulver
temperaturstabilitet av lösningar
stabilitet av lösningar vs. pH
stabilitet av lösningar vs. koncentration
RZ profil
RZ (Reinheitszahl): absorbansförhållandet A403/a275. Det är ett mått på heminhalten i peroxidas, inte enzymaktivitet. Även preparat med högt RZ-värde kan ha låg enzymatisk aktivitet. För konjugerande proteiner, såsom antikroppar mot peroxidas, välj ett peroxidas med ett RZ-värde på minst 3,0.
Spectrophotometric Method to Determine the RZ Value for Peroxidase
Peroxidase Enzymes for Labeling
« meny
