A Guide to Koi Herpesvirus Disease: How to Detect, Treat and Prevent

the first recognized case of KHV occurred in the United Kingdom in 1996 (Haenenen et al. 2004). Desde então, outros casos foram confirmados em quase todos os países que Cultura koi e / ou carpa comum, com exceção da Austrália (Hedrick et al. 2000; Haenen et al. 2004, Pokorova et al. 2005). Esta ficha de informação destina-se a informar veterinários, biólogos, produtores de peixe e hobbyists sobre a doença de KHV.

o que é KHV?

Figura 1. Koi com guelras manchadas e olhos afundados devido à doença de herpesvírus koi.

herpesvirus Koi (também conhecido como Herpesvirus Cyprinid 3; CyHV3) é classificado como um vírus de ADN de cadeia dupla pertencente à família Alloherpesviridae (que inclui herpesvirus de peixe). O trabalho de Waltzek e colegas (Waltzek et al. 2005, 2009) revelou que KHV é de fato um herpesvirus, com base no vírus morfologia e genética, e está intimamente relacionado com a carpa vírus da varíola (Ciprinídeo herpesvirus 1; CyHV1) e peixinho necrose hematopoiética vírus (Ciprinídeo herpesvirus 2; CyHV2). A doença do herpesvírus Koi foi diagnosticada em carpa comum (Hedrick et al. 2000; OATA 2001). Outras carpas (por exemplo, peixinho; Carassius auratus e grass carp; Ctenopharyngodon idella) e não-ciprinídeo espécies são normalmente afetados por KHV, embora KHV DNA foi detectado em tecidos de peixes dourados e outras espécies de peixes expostos ao vírus usando a reação em cadeia da polimerase (PCR) métodos de ensaio (El-Matbouli et al. 2007, Sadler et al. 2008, Bergmann et al. 2009, Kempter et al. 2009). Peixe-dourado híbrido (C. auratus x carpa-comum-fêmea C. carpo) foram moderadamente resistentes à mortalidade após infecção experimental com KHV (Hedrick et al. 2006). Se a carpa híbrida comum, outros ciprinídeos, ou espécies não-cyprinídeos podem abrigar o KHV e, mais tarde, transmitir a doença para variedades comuns de carpa ingénuas permanece controverso.

a doença por herpesvírus Koi (KHVD) afecta peixes de várias idades, resultando frequentemente em 80-100% de mortalidade em populações sensíveis quando as temperaturas da água estão entre 60° e 77°F (16° e 25 °C) (Haenen et al. 2004). No entanto, tal como acontece com outras infecções herpesvíricas, o KHV pode permanecer no peixe infectado para sempre; portanto, os peixes que se recuperam de um surto de KHV devem ser considerados portadores do vírus (Petty e Fraser 2005, St.Hilaire et al. 2005, Eide et al. 2011).

quais são os sinais de KHV?Os sinais clínicos de KHV são frequentemente não específicos. A mortalidade pode começar muito rapidamente em populações infectadas, com as mortes a começar dentro de 24 a 48 horas após o início inicial dos sinais clínicos. Em estudos experimentais, 82% dos peixes expostos ao vírus a uma temperatura da água de 72°F (22°C) morreram nos primeiros 15 dias (Ronen et al. 2003). A infecção pelo KHV pode produzir lesões em guelras graves que apresentam manchas vermelhas e brancas (Figura 1) (pode ser semelhante aos sinais da doença columnaris; publicação do SRAC #479b sobre a doença Columnaris). As manchas brancas são devido à necrose (morte) do tecido de guelras. As lesões de guelras causadas pela doença de KHV são os sinais clínicos mais comuns em koi afetada. Outros sinais externos de KHV podem incluir brânquias hemorrágicas, olhos afundados e manchas pálidas na pele. Algumas koi infectadas pelo KHV podem ter um nariz entalhado (Goodwin 2012). Em alguns casos, infecções bacterianas secundárias e parasitárias podem ser o problema mais óbvio, mascarando os danos causados pela infecção viral primária. Exame microscópico de biópsias de gill muitas vezes revela um elevado número de bactérias e vários parasitas (Hedrick et al. 2000; Haenen et al. 2004).

os sinais internos de KHVD são variáveis e não específicos, mas podem incluir aderências superiores às normais na cavidade corporal e aumento e / ou aparecimento motorizado de órgãos internos (Hedrick et al. 2000; Haenen et al 2004).

Behaviorally, affected fish often remain near the surface, swim lethargically and may exhibit respiratory distress and uncoordinated swimming.

como é que os peixes são infectados com KHV?

os métodos de propagação (transmissão) do KHV incluem o contacto directo com peixes infectados, o contacto com fluidos provenientes de peixes infectados; e contacto com água, lama ou outros fomites/vectores que entraram em contacto com sistemas contaminados. O vírus infeccioso entra principalmente em peixes susceptíveis através da pele, incluindo tecido de guelras (Costes et al. 2009). Dependendo da temperatura da água, peixes suscetíveis que são expostos ao KHV podem ficar infectados, desenvolver doenças e morrer; ou eles podem sobreviver ao surto inicial da doença e se tornar portadores do vírus (Petty e Fraser 2005, St.Hilaire et al. 2005, Eide et al. 2011). Os peixes que sobrevivem à exposição ao KHV ou que recebem a vacina podem ser imunizados e desenvolver um nível de protecção contra o vírus, embora o comprimento da protecção permaneça desconhecido (Ronen et al. 2003, Perelberg et al. 2008). Os sobreviventes de focos de KHV podem tornar-se portadores do vírus e podem ser capazes de espalhar a doença a peixes sensíveis. Estes peixes portadores podem não apresentar sinais de infecção pelo KHV, embora possam estar a transportar e/ou a libertar o vírus.Como é que a temperatura da água afecta a doença de KHV?

KHV (KHVD) surtos tipicamente ocorrem na primavera e no outono, quando as temperaturas da água estão entre 60°e 77 ° F (16° e 25 °C), com um período de incubação de 7-21 dias dependendo da temperatura da água (Haenen et al. 2004). KHVD a temperaturas tão baixas como 60°F (15,5-16°C) foi relatado em surtos comuns de carpa no Japão, e ensaios experimentais mostraram que o vírus pode induzir mortalidade até cerca de 82°F (28°C). As temperaturas da água mais quentes induzem mais rapidamente a doença clínica do que os peixes mantidos a temperaturas mais baixas. A temperaturas de água mais baixas (ex., 55 ° F ), o vírus pode infectar peixes sem induzir sinais clínicos de doença, mas quando as temperaturas permissivas da água são novamente experimentadas, os peixes apresentam sinais típicos de KHV e podem morrer (Gilad et al. 2003, St. Hilaire et al. 2005).Como sei se os meus peixes têm KHV?

o diagnóstico positivo de KHV requer a assistência de um veterinário ou de um especialista em saúde dos peixes e de um laboratório de diagnóstico de doenças dos peixes. A identificação diagnóstica do KHV pode ser realizada por vários métodos diretos e indiretos. Métodos diretos são procedimentos que detectam vírus reais ou” pedaços ” de vírus. Métodos indiretos são procedimentos que determinam se um peixe montou uma resposta imunitária contra o KHV após exposição ao vírus através da medição dos níveis de anticorpos anti-KHV no sangue (Adkison et al. 2005, St-Hilaire et al. 2005, 2009).

Direto métodos utilizados para identificar KHV incluem: 1) isolamento do vírus e a identificação (por exemplo, cultivo de vírus), utilizando uma célula suscetível de linha, tais como o Koi Fin (KF-1) célula de linha {óptimo de crescimento observado em temperaturas entre 59° e 77°F (15° e 25°C)} e 2) técnicas de PCR (por exemplo, os testes para a presença de KHV DNA). Para estes testes de diagnóstico direto, os tecidos são removidos de peixes que são coletados vivos e depois eutanasiados. O isolamento e a detecção do vírus em tecidos de peixes mortos por mais de algumas horas podem não ser fiáveis. Testes de diagnóstico direto não letais estão disponíveis em amostras como sangue, material fecal, muco e clipes de guelras (ou seja, biópsias), mas estes testes podem produzir resultados menos definitivos ou menos precisos. Um teste positivo de cultura de células indica uma infecção activa e contínua com o KHV. A detecção positiva do ADN do KHV utilizando PCR indica que o vírus está presente, pelo que pode ser utilizado para confirmar a doença do KHV em peixes clinicamente doentes e talvez até para identificar portadores (Eide et al. 2011).

um método de ensaio indirecto para o KHV que tem sido amplamente utilizado é o ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA). O KHV ELISA usa uma amostra de sangue e, portanto, é uma ferramenta de diagnóstico não letal. Os dados ELISA podem fornecer provas de que um peixe está actualmente a montar, ou já montou anteriormente, uma resposta imunitária (ou seja, a produção de anticorpos) contra o KHV. Um teste ELISA positivo para o KHV indica que o peixe produziu anticorpos contra o KHV após uma exposição anterior ao vírus. No entanto, as células imunitárias produtoras de anticorpos demoram a ser activadas e, ao longo do tempo, se um peixe já não estiver doente, a produção de anticorpos anti-KHV pode abrandar ou parar. Assim, ELISA pode não ser capaz de detectar anticorpos ao KHV se a infecção ocorreu anos antes ou se o peixe ainda não teve tempo para produzir anticorpos.Os resultados negativos obtidos por testes directos ou indirectos não significam necessariamente que os peixes não sejam portadores. Não há nenhum teste que detecte definitivamente todos os portadores ou sobreviventes.

existe tratamento para KHV?

não existe tratamento para KHV. Não existem medicamentos antivirais disponíveis para tratar o KHV ou quaisquer outras doenças virais de peixes cultivados. Estudos demonstraram que as koi podem sobreviver a um surto de KHV se as temperaturas da água forem aumentadas para 86°F (30°C) durante o surto (Ronen et al. 2003). No entanto, esta técnica apenas aumenta marginalmente as taxas de Sobrevivência, e o aumento artificial das temperaturas da água acima de 80°F Em instalações de retenção pode resultar em um aumento da ocorrência de outras doenças bacterianas e parasitárias mais comuns. As altas temperaturas da água não são geralmente recomendadas para a pecuária de rotina e manejo de koi e carpa comum. Além disso, e mais importante, koi que sobrevivem a um surto de KHV ou aqueles expostos a altas temperaturas da água podem se tornar portadores do vírus. Estas koi portadoras são uma fonte da doença para peixes sensíveis quando as condições são adequadas para a disseminação viral e infecção. Devido à exposição prévia e imunização ao vírus, os peixes portadores normalmente não sucumbem à doença de KHV ou mostram sinais de infecção clínica.

recentemente, a USDA APHIS aprovou a utilização de uma vacina viva atenuada para a prevenção de KHVD, a ser administrada a carpa comum ou koi com peso superior a 100 gramas (a vacina não está aprovada para utilização em broodstock). A vacina, originalmente desenvolvida por um grupo de pesquisa Israelense (Ronen et al. 2003), gera elevados títulos de anticorpos anti-KHV e protege as carpa ou koi comuns vacinadas após subsequente provocação viral (Ronen et al. 2003, Perelberg et al. 2008). No entanto, foram levantadas preocupações relativamente à eficácia da vacina e à duração da protecção concedida aos peixes vacinados. Actualmente, desconhece-se se os peixes vacinados se tornam portadores da estirpe vacinal ou se estão protegidos contra a infecção pela estirpe de tipo selvagem, o que representaria uma ameaça para a carpa comum não vacinada. Outro desafio no que se refere à vacina é o facto de não estarem disponíveis comercialmente testes de diagnóstico que possam diferenciar os peixes vacinados dos peixes naturalmente infectados/expostos.

porque os surtos de KHV causaram grandes perdas em instalações de koi e carpa comuns e porque há preocupação de que os sobreviventes sejam portadores, qualquer pessoa com koi que tenha sido diagnosticada com KHV deve considerar o despovoamento (eliminando toda a população) como uma opção lógica. Todos os materiais e sistemas que os peixes infectados contactaram devem ser limpos e desinfectados.

as partículas virais na água ambiental podem permanecer infecciosas por até três dias (Shimizu et al. 2006). No entanto, protocolos comuns de desinfecção (ver abaixo) podem ser usados para eliminar o vírus de sistemas e equipamentos de água. Os biofiltros e os meios de biofiltração expostos ao vírus devem também ser cuidadosamente limpos e desinfectados. Antes da desinfecção, o equipamento deve ser limpo de detritos ou de acumulação orgânica, uma vez que estes podem reduzir a eficácia do desinfectante. As soluções de cloro (por exemplo, lixívia doméstica) podem ser utilizadas para desinfectar equipamentos ou sistemas de grande porte sem peixe. O protocolo recomendado para o cloro é de 200 ppm (200 mg / L) durante uma hora (noga 1996). A dosagem adequada desta substância activa depende do tipo de cloro utilizado. Para lixívia doméstica, que é 5,25% de hipoclorito de sódio por litro, 35 mililitros por galão de água dará 200 mg/L de concentração final.Os compostos de amónio quaternário (QACs) também podem ser utilizados em sistemas e equipamentos. Os compostos de amónio quaternário são mais gentis nas redes do que nas soluções de cloro. A concentração de QAC recomendada para a desinfecção é de 500 ppm (500 mg/L) durante uma hora (noga 1996). A dosagem adequada do QACs depende do tipo/concentração na mistura utilizada, uma vez que as concentrações variam consoante o produto utilizado. Os diferentes produtos QAC podem variar entre 10% e 50% da substância activa. Por exemplo, Roccal-D Plus® (Pharmacia & Upjohn Company, Pfizer), é de cerca de 24 por cento princípio ativo; portanto, um tratamento final com concentração de 500 mg/L, seriam necessários cerca de 7,9 mL de Roccal-D Plus® por galão de água. Lavar cuidadosamente após a utilização de qualquer tipo de desinfectante para eliminar o desinfectante residual que pode matar os peixes.

Como Pode o KHV ser evitado?Antes de obter qualquer peixe, pergunte primeiro ao fornecedor se houve perdas significativas inexplicadas na população. Monitorização e testes para KHV podem ser feitos por testes laboratoriais, então pergunte aos fornecedores se qualquer teste para KHV foi feito e solicite uma cópia da documentação do resultado do laboratório. A melhor maneira de prevenir a KHV é conhecer os seus fornecedores de peixe e ter uma boa relação de trabalho com eles.A quarentena (ou seja, a separação de outras koi) é o método mais fiável para evitar a introdução de agentes patogénicos num lago ou instalação. Para implementar um procedimento de quarentena eficaz, todos os peixes novos devem ser mantidos num sistema separado, idealmente num edifício ou área diferentes do peixe residente. Os peixes residentes devem ser alimentados, manuseados e mantidos antes do novo peixe. Os peixes em quarentena necessitam de equipamento específico, tais como redes, baldes e mangueiras de sifão, que são utilizados apenas para eles. Além disso, banhos de pés e lavagens manuais devem ser utilizados por qualquer pessoa que entre e saia da zona de quarentena. Os peixes devem ficar em quarentena durante um período mínimo de 30 dias. Especificamente para KHV, novas koi devem ser colocadas em quarentena em água que seja de 75°F (24°C) durante pelo menos 30 dias. No final do período de quarentena, qualquer peixe doente deve ser examinado por um veterinário e/ou laboratório de diagnóstico para excluir o KHV ou outras doenças. Se todos os peixes parecerem saudáveis, devem ser colhidas amostras de sangue destes peixes em quarentena e submetidas à detecção de anticorpos utilizando ELISA. (Atkinson et al. 2005; St. Hilaire et al. 2009)

os hobbyists Koi são incentivados a promover o uso de shows koi estilo inglês, que mantêm diferentes fontes (proprietários) de koi separados durante o show e julgamento. Além disso, redes separadas, Mangueiras de sifão e outros equipamentos devem ser usados por todos os participantes do show para seu próprio peixe. O estilo japonês de show, em que koi de diferentes proprietários são colocados juntos no mesmo tanque, pode resultar na propagação de doenças entre peixes sensíveis. Independentemente do estilo de exibição, os peixes que retornam dos shows devem ser colocados em quarentena por um mínimo de 30 dias e mantidos a 75°F antes de serem colocados de volta para a população em geral. Para maior segurança, a análise de anticorpos pode ser útil. Os sobreviventes (peixes que foram anteriormente expostos à doença de KHV) nunca devem ser levados a um espectáculo de koi.

no final do período de quarentena e antes de colocar todos os peixes juntos, colocar várias novas koi com várias koi da população estabelecida em uma área separada longe do resto da população estabelecida e observá-los para sinais de doença. Este “teste” pode ajudar a determinar com um menor número de peixes se colocar as duas populações juntas após quarentena pode causar problemas. Infelizmente, não há garantias.

quem devo contactar se suspeitar que o meu peixe tem KHV ou se eu quiser mais informações?

peixes Comerciais aos produtores, grossistas e retalhistas na Flórida, pode contactar um dos seguintes Universidade da Flórida Peixe Doença de Diagnóstico, Laboratórios*:

No norte da Flórida:

Thomas B. Waltzek
vida silvestre e Aquática Veterinária Doença de Laboratório (WAVDL)
Aquáticos Pathobiology
Universidade da Flórida
Bldg. 471, 2173 Mowry Estrada
Gainesville, Flórida 32611
(352) 273-5202
E-mail: [email protected]

No Sul da Flórida:

Roy E. P. E. Yanong ou Deborah Pouder
Tropical Laboratório de Aquicultura
Peixe Doença de Diagnóstico de Laboratório
Universidade da Flórida
1408 24 de St. SE 33570
Ruskin, Flórida
(813) 671-5230
http://tal.ifas.ufl.edu

*por Favor, note: Esses laboratórios aceitar casos de peixes comerciais, produtores, atacadistas e varejistas, somente.

Hobbyists and personal koi pond owners (or commercial fish producers, grossistas, and retailers outside Florida) may search for an aquatic Veterinary or aquatic diagnostic laboratory in their area on the AquaVetMed website (http://www.aquavetmed.info) or http://www.myveterinarian.com/avma/vclPublic/#.

quais são as considerações regulamentares associadas à KHV?

a partir de janeiro de 2007, o KHV foi acrescentado à Organização Mundial da Saúde Animal (OIE); www.oie.int) lista de doenças dos peixes. Devido a esta listagem, O serviço de inspecção veterinária e fitossanitária do Departamento de Agricultura dos Estados Unidos (USDA APHIS) solicita que os veterinários acreditados e os laboratórios de diagnóstico reportem casos positivos de KHV ao veterinário da área responsável (AVIC) do Estado de origem do peixe. No entanto, nenhuma informação do cliente (por exemplo, nome, endereço) será solicitada. Esta informação ajudará a USDA a determinar qual é a prevalência de KHV nos Estados Unidos. A USDA APHIS não tem quaisquer requisitos sanitários de importação específicos para a KHV de koi ou de outros peixes que se deslocam interestaduais ou internacionais. Não há despovoamento obrigatório para populações de koi infectadas com KHV. Cabe ao proprietário desses animais e ao seu veterinário decidir qual o curso a tomar.

Koi os criadores, Comerciantes, expositores e veterinários devem ter conhecimento das normas sanitárias internacionais em matéria de exportação de peixes vacinados com KHV. Os requisitos de importação para alguns países especificam que os peixes vacinados com KHV não serão autorizados a entrar. Por favor, consulte o site do APHIS para obter os requisitos de saúde do estado e internacional (listados respectivamente): http://www.aphis.usda.gov/animal_health/animal_dis_spec/aquaculture/aquastates.shtml

http://www.aphis.usda.gov/regulations/vs/iregs/animals/

ou contactar o USDA APHIS VS Area Office for assistance (http://www.aphis.usda.gov/animal_health/area_offices/).Os humanos conseguem apanhar o KHV?

não há nenhuma preocupação zoonótica com o KHV. O herpesvírus responsável pela doença do KHV nos peixes não causará doença nos seres humanos.

Como É que o KHV difere de outras doenças virais?

é importante diferenciar o KHV de outros vírus que podem causar doença na carpa e na carpa. Duas outras doenças virais importantes reconhecidas na carpa são a viremia Primaveril da carpa (VPC) e a varíola carpa (Cyprinid herpesvirus 1; CyHV1). Estas doenças têm implicações de gestão e regulamentação significativamente diferentes (Quadro 1). Tanto o KHV como o VPC são agora enumerados como doenças de peixes notificáveis pela OIE. No entanto, nos EUA, a VPC é considerada uma doença do peixe estranha ou exótica (não presente) de espécies sensíveis aquacultadas e, como tal, o veterinário ou laboratório acreditado é obrigado a notificar surtos confirmados aos funcionários dos Serviços veterinários do USDA APHIS que, por sua vez, notificarão o OIE. Em comparação, KHV é considerado difundido nos Estados Unidos. A USDA APHIS solicita aos veterinários e laboratórios acreditados que comuniquem os casos de KHV ao veterinário da área responsável (AVIC) do estado em que o surto ocorre. A informação ajudará a USDA a determinar qual é a verdadeira prevalência de KHV nos EUA. no entanto, cada surto de KHV não será notificado ao OIE.

a virose de Primavera de carpa doença é causada por um single-stranded RNA vírus, Rhabdovirus carpio, e tem sido relatada em comum e a carpa koi (C. carpio), carpa capim (C. idella), carpa cabeçuda (Aristichthys nobilis), prata de carpa (Hypophthalmichthys molitrix), Crucian carpa (Carassius carassius) e comum peixinho (C. auratus). Para mais informações sobre a VPC, ver Quadro 1 e a ficha informativa UF/IFAS “Spring Viremia of Carp” (VM-142).

Carpa varíola (Ciprinídeo herpesvirus 1; CyHV1) é causada por herpesvirus de KHV (Herpesvirus cyprini) que tem uma ampla distribuição geográfica e afeta comum e a carpa koi. A varíola geralmente causa crescimentos suaves (“massas como verrugas”) na pele e barbatanas de peixes mais velhos, mas pode estar associada a alta mortalidade em fritos com menos de dois meses de idade (Sano et al. 1990). A varíola não é uma doença relatável ou Notificável nas temperaturas da água dos EUA acima de 68° F (20°C) ajudam a reduzir o crescimento da pele e das barbatanas em peixes mais velhos, mas não elimina o vírus dos peixes (Quadro 1). Em peixes maduros, a varíola é tipicamente uma doença auto-limitante não-letal (ou seja, a maioria, se não todos os crescimentos se resolvem a temperaturas mais quentes por conta própria).

Resumo

Koi herpesvirus doença é uma doença devastadora de rochas ornamentais koi e carpa comum. Existem vários métodos para detectar vários estados da infecção. Não existe um tratamento eficaz para eliminar os peixes do vírus. As boas práticas de gestão, incluindo a quarentena, os testes e a criação adequada, são componentes vitais para prevenir esta doença para todos os produtores de koi e carpas comuns, comerciantes e hobbyists.

agosto 2013