G418

G418 (Geneticin, Invitrogen): Rozpustit ve vodě při teplotě 200 mg/ml, filtr sterilizovat, a obchod v alikvoty při teplotě 4 °C.

clonNAT (nourseothricin, Werner BioAgents, Jena, Německo): Rozpustit ve vodě při 100 mg/ml, filtr sterilizovat, a obchod v alikvoty při teplotě 4 °C.

Canavanine (l-canavanine sulfát, sůl, Sigma, C-9758): Rozpustit ve vodě při 100 mg/ml, filtr sterilizovat, a obchod v alikvoty při teplotě 4 °C.

Thialysine (S-(2-aminoethyl)-l-cystein hydrochlorid, Sigma,-2636): Dissolve in water at 100 mg/ml, filter sterilize, and store in aliquots at 4 °C.

Amino acids supplement powder mixture for synthetic media (complete): Contains 3 g adenine (Sigma), 2 g uracil (ICN), 2 g inositol, 0.2 g para-aminobenzoic acid (Acros Organics), 2 g alanine, 2 g arginine, 2 g asparagine, 2 g aspartic acid, 2 g cysteine, 2 g glutamic acid, 2 g glutamine, 2 g glycine, 2 g histidine, 2 g isoleucine, 10 g leucine, 2 g lysine, 2 g methionine, 2 g phenylalanine, 2 g proline, 2 g serine, 2 g threonine, 2 g tryptophan, 2 g tyrosine, and 2 g valine (Fisher). Drop-out (DO) prášková směs je kombinací výše uvedených složek mínus vhodný doplněk. Dva gramy práškové směsi DO se používají na litr média.

Aminokyseliny doplněk pro sporulace medium: Obsahuje 2 g histidin, 10 g leucinu, 2 g lysinu, 2 g uracil; 0,1 g aminokyselin doplňky prášková směs se používá na litr sporulace střední.

glukóza (dextróza, Fisher): připravte 40% roztok, autokláv a uchovávejte při pokojové teplotě.

YEPD: Přidejte 120 mg adenin (Sigma), 10 g kvasnicového extraktu, 20 g peptonu, 20 g bacto agaru (BD Difco) do 950 ml vody v baňce o objemu 2 litry. Po autoklávování přidejte 50 ml 40% roztoku glukózy, důkladně promíchejte, ochlaďte na ~ 65 °C a nalijte desky.

YEPD + G418: ochlaďte médium YEPD na ~ 65 °C, přidejte 1 ml zásobního roztoku G418 (konečná koncentrace 200 mg / l), důkladně promíchejte a nalijte desky.

YEPD + clonNAT: ochlaďte médium YEPD na ~ 65 °C, přidejte 1 ml zásobního roztoku clonNAT (konečná koncentrace 100 mg / l), důkladně promíchejte a nalijte desky.

YEPD + G418/clonNAT: Cool YEPD médiu ~ 65 °C, přidáme 1 ml G418 (konečná koncentrace 200 mg/l) a 1 ml clonNAT (konečná koncentrace 100 mg/l) zásobní roztoky, důkladně se promíchá a nalít desky.

Obohacený sporulace: Přidejte 10 g octanu draselného (Fisher), 1 g kvasničného extraktu, 0,5 g glukózy, 0,1 g aminokyselin doplněk v prášku, směs pro sporulace, 20 g bacto agaru na 1 l vody do 2 l baňky. Po autoklávování ochlaďte médium na ~ 65 °C, přidejte 250 µl zásobního roztoku G418 (konečná koncentrace 50 mg / l), důkladně promíchejte a nalijte desky.

(SD/MSG) − Jeho/Arg/Lys + canavanine/thialysine/G418: Přidat 1,7 g droždí nitrogen base w/o amino kyselin nebo síranu amonného (BD Difco), 1 g MSG (l-glutamová kyselina, sodná sůl hydrát, Sigma), 2 g aminokyselin doplněk práškové směsi (DĚLAT − Jeho/Arg/Lys), 100 ml vody v 250 ml baňce. Přidejte 20 g bacto agaru do 850 ml vody v baňce o objemu 2 litry. Autokláv Samostatně. Kombinovat autoklávovat řešení, přidejte 50 ml 40% glukózy, chladné médium ~ 65 °C, přidá se 0,5 ml canavanine (50 mg/l), 0,5 ml thialysine (50 mg/l) a 1 ml G418 (200 mg/l) zásobní roztoky, důkladně se promíchá a nalít desky. Síran amonný brání funkci G418 a clonNAT. Proto se syntetické médium obsahující tato antibiotika vyrábí s kyselinou glutamovou monosodnou jako zdrojem dusíku (Cheng et al ., 2000).

(SD/MSG) − Jeho/Arg/Lys + canavanine/thialysine/clonNAT: Přidat 1,7 g droždí nitrogen base w/o amino kyselin nebo síranu amonného, 1 g MSG, 2 g aminokyselin doplněk práškové směsi (DĚLAT − Jeho/Arg/Lys), 100 ml vody v 250 ml baňce. Přidejte 20 g bacto agaru do 850 ml vody v baňce o objemu 2 litry. Autokláv Samostatně. Kombinujte autoklávované roztoky, přidejte 50 ml 40% glukózy, chladné médium na ~ 65 °C, přidejte 0.5 ml kanavaninu (50 mg / l), 0,5 ml thialysinu (50 mg / l) a 1 ml clonNAT (100 mg / l) zásobních roztoků, důkladně promíchejte a nalijte desky.

(SD/MSG) − Jeho/Arg/Lys + canavanine/thialysine/G418/clonNAT: Přidat 1,7 g droždí nitrogen base w/o amino kyselin nebo síranu amonného, 1 g MSG, 2 g aminokyselin doplněk práškové směsi (DĚLAT − Jeho/Arg/Lys), 100 ml vody v 250 ml baňce. Přidejte 20 g bacto agaru do 850 ml vody v baňce o objemu 2 litry. Autokláv Samostatně. Kombinujte autoklávované roztoky, přidejte 50 ml 40% glukózy, chladné médium na ~ 65 °C, přidejte 0,5 ml Kanavaninu (50 mg / l), 0.5 ml thialysinu (50 mg/l), 1 ml G418 (200 mg/l) a 1 ml clonNAT (100 mg/l) zásobních roztoků, důkladně promíchejte a nalijte desky.

(SD/MSG) Kompletní: Přidat 1,7 g droždí nitrogen base w/o amino kyselin nebo síranu amonného, 1 g MSG, 2 g aminokyselin doplněk práškové směsi (kompletní), 100 ml vody v 250 ml baňce. Přidejte 20 g bacto agaru do 850 ml vody v baňce o objemu 2 litry. Autokláv Samostatně. Kombinujte autoklávované roztoky, přidejte 50 ml 40% glukózy, důkladně promíchejte, ochlaďte médium na ~ 65 °C a nalijte desky.

SD-His/Arg / Lys + canavanin / thialysin: přidat 6.7 g droždí nitrogen base w/o amino kyselin (BD Difco), 2 g aminokyselin doplněk práškové směsi (DĚLAT − Jeho/Arg/Lys), 100 ml vody v 250 ml baňce. Přidejte 20 g bacto agaru do 850 ml vody v baňce o objemu 2 litry. Autokláv Samostatně. Zkombinujte autoklávované roztoky, přidejte 50 ml 40% glukózy, chladné médium na ~ 65 °C, přidejte 0,5 ml kanavaninu (50 mg/l) a 0,5 ml thialysinu (50 mg/l), důkladně promíchejte a nalijte desky. Toto médium neobsahuje žádná antibiotika, jako je G418 nebo clonNAT, a proto se jako zdroj dusíku používá síran amonný.

SD − Leu/Arg/Lys + canavanine/thialysine: Přidat 6,7 g droždí nitrogen base w/o amino kyseliny, 2 g aminokyselin doplněk prášek směs (−Leu/Arg/Lys), 100 ml vody v 250 ml baňce. Přidejte 20 g bacto agaru do 850 ml vody v baňce o objemu 2 litry. Autokláv Samostatně. Zkombinujte autoklávované roztoky, přidejte 50 ml 40% glukózy, chladné médium na ~ 65 °C, přidejte 0,5 ml kanavaninu (50 mg/l) a 0,5 ml thialysinu (50 mg/l), důkladně promíchejte a nalijte desky.