Technické Informace a Souvisejících Výrobků
Vlastnosti Produktu pro Nativní Křenovou Peroxidasu
Extinkční koeficient: EmM = 100, měřeno při 403 nm.1
molekulová hmotnost: (cca. 44 kDa)
zahrnuje polypeptidový řetězec (33 890 daltonů), hemin plus Ca2+ (cca. 700 daltonů),
a sacharidů (9400 daltonů).3
Izoelektrický Bod: Izoenzymy rozmezí od 3.0 – 9.0
nejméně sedm izoenzymy z HRP existovat.2
Křenová peroxidáza (HRP) je izolována z kořenů křenu (Amoracia rusticana) a patří do skupiny peroxidáz ferroprotoporfyrinů. HRP je polypeptid s jedním řetězcem obsahující čtyři disulfidové můstky. Jedná se o glykoprotein obsahující 18% sacharidů. Sacharidů složení se skládá z galaktózy, arabinózy, xylózy, fucose, manóza, mannosamine, a galactosamine, v závislosti na konkrétní izoenzymové.2
Substrátová Specificita
HRP snadno kombinuje s peroxidem vodíku (H2O2), a výsledný komplex může oxidovat široké škály chromogenní vodíku dárců. Může také využívat chemiluminiscenční substráty, jako je luminol a isoluminol, a fluorogenní substráty, jako je tyramin, kyselina homovanilová a kyselina 4–hydroxyfenyloctová.
index substrátu enzymu Explorer poskytuje vazby na několik chromogenních a chemiluminiscenčních donorů vodíku používaných k stanovení aktivity peroxidázy.
Inhibitory
tyto sloučeniny jsou inhibitory křenovou peroxidasu: azid sodný, kyanid, L–cystin, dichroman, ethylenethiourea, hydroxylamin, sulfid, vanadate, p–aminobenzoová kyselina, Cd+2, Co+2, Cu+2, Fe+3, Mn+2, Ni+2, Pb+2.4
Závislost pH
pH optimální pro HRP je v rozmezí 6,0 až 6,5. Aktivita při pH 7,5 je 84% maxima. Enzym je nejstabilnější v rozmezí pH 5,0 až 9,0.5
Aplikace
Křenovou peroxidasu je široce používán jako označení pro imunoglobuliny v mnoha různých imunochemie aplikací, včetně ELISA, imunoblotingu a imunohistochemie. HRP může být konjugované protilátky pomocí několika různých metod, včetně glutaraldehyd, periodate oxidace, přes disulfidové vazby, a také prostřednictvím amino a thiol režie cross-inkers. HRP je nejžádanějším štítkem pro protilátky, protože je nejmenší a nejstabilnější ze tří nejoblíbenějších enzymových štítků (HRP, alkalická fosfatáza a B-galaktosidáza) a její glykosylace vede k nižší nespecifické vazbě.6 protokoly popisující metodiky konjugace glutaraldehydu a periodátu lze přezkoumat v Harlow, E. et al.7
nabízíme několik chromogenních a chemiluminiscenčních detekčních činidel pro blotování, histologii a aplikace ELISA.
nabízíme také kompletní řadu HRP konjugovaných protilátek.
návod k přípravě
volba rozpouštědla bude záviset na zamýšlené aplikaci. Práškové enzymy jsou rozpustná voda nebo 0,1 M fosfátový pufr, pH 6 (10 mg / mL). Suspenze (P6140) se může ředit vodou.
skladování/stabilita
práškové peroxidázy by měly být chlazeny při teplotě 2-8 °C. skladování v mrazničce je také přijatelné, ale není nutné. Suspenze (P6140) by měla být skladována při teplotě 2-8 °C.při správném skladování mají tyto produkty trvanlivost nejméně dva roky.
Teplotní Stabilita Lyofilizovaný Prášek
Teplotní Stabilita Řešení
Stabilita Řešení vs. pH
Stabilita Řešení vs. Koncentrace
RZ Profil
RZ (Reinheitszahl): absorbanční poměr A403/A275. Jedná se o míru obsahu heminu v peroxidáze, nikoli enzymové aktivity. I přípravky s vysokou hodnotou RZ mohou mít nízkou enzymatickou aktivitu. Pro konjugační proteiny, jako jsou protilátky proti peroxidáze, zvolte peroxidázu s hodnotou RZ nejméně 3,0.
Spectrophotometric Method to Determine the RZ Value for Peroxidase
Peroxidase Enzymes for Labeling
« Menu
