Některé mikroorganismy mají schopnost snížit síry (Síra), které obsahují sloučeniny sirovodík, během metabolismu, který je běžně zaměstnán jako zkušební opatření pro jejich identifikaci v laboratořích. Četné metody se používají k detekci produkce H2S mikroorganismy, které se liší podle zdroje síry a kovových solí používaných k označení tvorby H2S. SIM je citlivější při detekci H2S než TSI nebo KIA kvůli své polotuhé povaze, nedostatku interferujících sacharidů a použití peptonizovaného železa jako indikátoru. Papír z octanu olovnatého je však 10krát citlivější než jiná média.
cíle
určit, zda mikrob redukuje sloučeniny obsahující síru na sulfidy za vzniku sirovodíku.
princip
sloučenina železa a sloučenina síry jsou zahrnuty do zkušebního média pro testování výroby sirovodíku. Sirovodík se vyrábí, pokud je sloučenina síry snížena bakteriálním kmenem. Tento test tak určuje, zda mikrob redukuje sloučeniny obsahující síru na sulfidy během procesu metabolismu. H2S je produkován některými bakteriemi prostřednictvím snížení obsahu síry obsahující aminokyseliny jako cystein, methionin nebo přes redukci anorganických sloučenin síry, jako jsou thiosulfates, sulfáty nebo siřičitany v průběhu degradace proteinů nebo při anaerobní dýchání raketoplány elektrony síry namísto kyslíku. V obou případech se vyrábí H2S (plynný sirovodík), který reaguje se sloučeninou železa za vzniku černé sraženiny sulfidu železitého. Černá barva působí jako indikátor přítomnosti sirovodíku. Detekce sirovodíku (H2S) plynu produkovaného organismem. používá se hlavně k identifikaci konkrétního organismu.
média:
tento test lze provést s použitím několika médií, včetně trojitého cukrového železa (TSI), Kliglerova železného agaru (Kia), SIM média a papíru octanu olovnatého.
- Sulfitového indol pohyblivost (SIM) médium pro detekci H2S
Toto médium obsahuje železnatý síran amonný a thiosíran sodný, který pak společně sloužit jako ukazatele pro výrobu sirovodíku. Výroba sirovodíku může být detekována, když se sulfid železnatý, černá sraženina, vytvoří v důsledku reakce síranu železnatého amonného s plynem H2S.
Složení:
Hovězí výtažek 3,0 g Peptonu 30.0 g Železných amonný sulphat 0,2 g thiosíranu Sodného 0.025 g Agar 3.0 g Konečné pH ( při 25°C) 7.3±0.2 Destilovaná voda 1000 ml
- Železo lze testovat kolonie na detekci H2S
Toto médium je vhodné pro detekci H2S výroby enterobakterie. H2S je detekován železitý, citrát obsažený v médiu - octan olovnatý papír test pro detekci H2S
Když citlivá technika pro detekci H2S výroby je nutné, octan olovnatý papír test je doporučeno.
Postup
I. V Sulfitového indol pohyblivost (SIM) střední
- Očkovat organismu do označené zkumavky pomocí bodných očkování.
- inkubujte inkubované zkumavky při 37°C po dobu 24-48 hodin.
- Sledujte tvorbu černé sraženiny na médiu.
II. V Kligler iron agar (KIA) a Triple Sugar Iron Agar (TSIA)
- Naočkování zkušebních organismu do KIA a inkubujte je při vhodné teplotě přes noc.
- dbejte na černění média.
III. Octan olovnatý papír test
- Naočkujte zkumavky nebo láhve sterilní peptonu vody nebo živné půdy s testovací organismus.
- vložte papírový proužek octanu olovnatého do hrdla láhve nebo zkumavky nad médium a dobře zátku.
- Inkubujte naočkované médium na 35-37oC, a zkoumat denní pro černění dolní část pásu.
Výsledky
- Pozitivní výsledek:Černění na střední
- Negativní výsledek:Žádné černění na střední
Používá
- To se používá především k pomoci při identifikaci členů rodiny Enterobacteriaceae a občas odlišit jiné bakterie, jako jsou Bacteroidessps a Brucella sp.
- test pomáhá při identifikaci a diferenciaci členů Enterobacteriaceae (enterics) z jiných Gram – bacily.
- je zvláště užitečné při identifikaci druhů Salmonella, Francisella a Proteus.
Omezení
- H2S produkce může být inhibována na TSI pro organismy, které využívají sacharóza a potlačit enzym mechanismus, který výsledky v produkci H2S.
- octan olovnatý je toxický pro bakterie a může inhibovat růst některých bakterií. Nedovolte, aby se médium dotýkalo pásu.
- pro úplnou identifikaci se doporučuje provést biochemické, imunologické, molekulární nebo hmotnostní spektrometrické testování na koloniích z čisté kultury.
- Tille, P. M., & Forbes, B. A. (2014). Bailey & Scottova diagnostická mikrobiologie (třinácté vydání.). Louis, Missouri: Elsevier.
- Cappuccino J. G. a Sherman N. 2008. Mikrobiologie: laboratorní příručka, 8.vydání. Pearson Benjamin Cummings, San Francisco, CA, USA.
- www.vumicro.com/vumie/help/VUMICRO/Hydrogen_Sulfide_Production_Test.htm
- mic.microbiologyresearch.org/content/journal/micro/10.1099/00221287-8-3-397
- https://microbenotes.com/hydrogen-sulfide-h2s-production-test/
- www.microbiologyresearch.org/docserver/fulltext/micro/8/3/mic-8-3-397.pdf?expires=1543332392&id=id&accname=guest&checksum=C42277C712F05E5951241893FC8EC3F7
- spot.pcc.edu/~jvolpe/b/bi234/lab/differentialMedia/H2Sproduction.html
- https://senthilprabhu.blogspot.com/2017/10/hydrogen-sulphide-h2s-production-test.html
- https://jb.asm.org/content/jb/10/5/439.full.pdf
