Definition af falsk-Positive reaktioner ved Screening for Hepatitis C-Virusantistoffer

i daglig laboratorierutine er pålidelig diagnose af hepatitis C-virus (HCV) infektion ikke altid mulig ved udelukkende brug af et HCV-immunoassay (VVM), da det er velkendt, at for et antal patienter giver denne analyse falske positive resultater (4, 8, 17). Derfor skal resultater opnået af VVM bekræftes ved yderligere test. Det kommercielt tilgængelige assay RIBA 2.0 (Chiron Corporation) opfylder imidlertid ikke kriterierne for en bekræftelsesassay, da den består af rekombinante proteiner, der er identiske med dem i VVM (1, 5, 9). HCV PCR kan ikke bruges til bekræftelse af positive VVM-resultater, da et negativt PCR-resultat ikke udelukker muligheden for HCV-infektion med lavt niveau viræmi (under detektionsgrænsen). Desuden er PCR for besværlig og dyr til at blive brugt regelmæssigt som et bekræftende assay. Derfor har vi etableret en HCV strip immunoblot assay (SIA) (Universit Krankenhaus Eppendorf SIA) bestående af fire rekombinante proteiner, afledt af kernen og tre ikke-strukturelle regioner (NS3, NS4 og NS5) af HCV, som er forskellige fra dem, der anvendes i HCV VVM (5).

i denne undersøgelse sammenlignede vi resultaterne af en anden generation HCV VVM med resultaterne af UKE SIA for 2.283 serumprøver. Målet var at vurdere betydningen af positive resultater i HCV VVM for at definere kriterier for udførelse af yderligere test for pålideligt at diagnosticere HCV-infektion i den daglige laboratorierutine. Sera blev hentet fra 2.283 personer, der boede i Nordtyskland omkring byen Hamburg. De blev sendt til vores laboratorium under mistanke om HCV-infektion på grund af enten forhøjede leverværdier (alaninaminotransferase, >45 U/liter) eller kliniske tegn på hepatitis (gulsot og øvre mavesmerter) eller risikofaktorer for parenteralt overførte sygdomme, såsom kronisk hæmodialyse, blodtransfusion eller intravenøs stofbrug. På undersøgelsestidspunktet testede de negativt for akut infektion med HAV (anti-HAV immunoglobulin M antistoffer) og HBV (hepatitis B overfladeantigen). Gentagne undersøgelser blev udført som opfølgning hver 3. måned i 1 år. Til serologisk screening en anden generation HCV VVM (Abbott Laboratories, North Chicago, Ill.) blev udført . Til bekræftelse af HCV VVM-resultater blev sera testet parallelt af UKE SIA som tidligere beskrevet (5). Immunoblot-analysen blev betragtet som positiv, når antistoffer mod mindst to forskellige rekombinante proteiner var påviselige. Reaktivitet mod kun et enkelt protein blev vurderet som et ubestemt resultat. Til påvisning af HCV RNA revers transkription-PCR blev udført som tidligere beskrevet (6, 7).

HCV-VVM var negativ for 469 prøver, hvoraf 456 (97%) også var negative af UKE SIA. For 13 prøver blev UKE SIA betragtet som ubestemt. Alle 469 af disse sera var negative af HCV PCR, og ingen af patienterne udviklede kliniske eller biokemiske tegn på hepatitis under opfølgningen.

HCV-VVM var reaktiv for 1.814 prøver, hvoraf 1.394 (77%) også var positive af UKE SIA (tabel 1). I 240 tilfælde (13%) kunne reaktiviteten i HCV VVM imidlertid ikke bekræftes af UKE SIA. Egnede prøver til HCV PCR var tilgængelige for 193 af disse 240 prøver, og et positivt PCR-resultat blev opnået med 13 prøver. Af disse blev ni positive af UKE SIA, når de blev testet igen efter 3 måneder, hvilket antyder, at disse patienter havde erhvervet HCV-infektion kort før den første undersøgelse. Hos de resterende fire patienter, der gentagne gange testede PCR-positive på trods af et negativt resultat af UKE SIA, kunne immunsuppressive tilstande findes. Den ene havde et B-celle lymfom, den ene blev kronisk hæmodialyseret, og to praktiserede intravenøs stofbrug. Det har tidligere vist sig, at serologisk respons hos patienter med immunsuppressive tilstande er lav eller endog fraværende (10, 14, 15). Dette kan føre til negative eller ubestemte resultater i serologiske analyser, selvom individet lider af infektion med HCV (13). Derfor bør PCR altid udføres for patienter med kendte immunsuppressive lidelser. De 180 oprindeligt PCR-negative forsøgspersoner forblev negative af UKE SIA og HCV PCR i gentagne undersøgelser under opfølgningen. Desuden udviklede disse patienter ikke kliniske eller biokemiske tegn på hepatitis. Dette indikerer, at der i mindst disse 180 prøver (10%) forekom falske positive resultater. Vi må antage, at VVM også var falsk positiv i de prøver, for hvilke der ikke var noget egnet materiale til PCR, da UKE SIA forblev negativ, og ingen af patienterne udviklede kliniske eller biokemiske tegn på hepatitis under opfølgningen. Dette indikerer, at så længe der ikke er nogen bedre screeningsanalyser kommercielt tilgængelige, skal hvert positivt HCV-VVM-resultat bekræftes.

et ubestemt resultat i UKE SIA blev observeret med 180 af de 1.814 VVM-positive prøver (10%). Egnede prøver til HCV PCR blev opnået for 134 af disse 180 prøver, og HCV RNA kunne påvises i 58 af dem. Under opfølgningen blev der observeret fuld serokonversion hos fire patienter. Alle afslørede oprindeligt antistoffer rettet udelukkende mod NS3-proteinet i UKE SIA. I opfølgningsprøver opstod reaktivitet over for yderligere rekombinante proteiner. Disse resultater understøtter den tidligere antagelse om, at antistofreaktivitet mod NS3 spiller en vigtig rolle i den tidlige serologiske påvisning af HCV-infektion (5). Desuden er der fundet en særlig høj korrelation mellem HCV-viræmi og antistofreaktivitet mod c33c-antigenet i den kommercielt tilgængelige RIBA (2). Prøver med et positivt resultat af HCV VVM og et ubestemt resultat ved immunoblotassay skal underkastes PCR, da vi detekterede HCV RNA i 43% af prøverne (58 af 134). Procentdelen af ubestemte resultater af UKE SIA er bemærkelsesværdigt lav sammenlignet med RIBA 2.0 eller 3.0 (2, 3, 11, 16). En af grundene hertil kan være, at lokale isolater blev brugt til at etablere uke SIA, da serologiske tests indeholdende rekombinante proteiner fra lokale isolater har vist sig at have bedre følsomhed og specificitet end kommercielt tilgængelige assays (5, 12). Dette er dog sandsynligvis ikke den eneste grund, da UKE SIA blev evalueret med serumprøver indeholdende en række HCV-genotyper som tidligere beskrevet (5).

diagnosen HCV positiv har en dyb indvirkning på den ramte persons liv. Derfor skal det nås så pålideligt som muligt. Vores data viser, at den udbredte HCV VVM producerer en høj procentdel (10%) af falsk-positive resultater. Sammenlignet med andre screeningsanalyser, f.eks. human immundefektvirus EIA ‘ er, er dette uacceptabelt højt. Derfor er bekræftelse af hvert positivt HCV-VVM-resultat ved supplerende test obligatorisk. Som vi har vist med vores interne UKE SIA, en mulighed for at forbedre pålideligheden af HCV-diagnose er at introducere proteiner i bekræftelsesanalysen, som er forskellige fra dem, der anvendes i screeningsanalysen.