Définition des réactions Faussement Positives lors du dépistage des anticorps du virus de l’hépatite C

Dans la routine quotidienne de laboratoire, un diagnostic fiable de l’infection par le virus de l’hépatite C (VHC) n’est pas toujours possible par l’utilisation exclusive d’un dosage immuno-enzymatique du VHC (EIA), car il est bien connu que pour un certain nombre de patients, ce dosage produit des résultats faussement positifs (4, 8, 17). Par conséquent, les résultats obtenus par l’EIE doivent être confirmés par des tests supplémentaires. Cependant, le dosage disponible dans le commerce RIBA 2.0 (Chiron Corporation) ne remplit pas les critères définissant un dosage de confirmation puisqu’il est constitué de protéines recombinantes identiques à celles de l’EIA (1, 5, 9). La PCR contre le VHC ne peut pas être utilisée pour confirmer les résultats positifs de l’EIE, car un résultat PCR négatif n’exclut pas la possibilité d’une infection par le VHC avec une virémie de faible niveau (inférieure à la limite de détection). De plus, la PCR est trop laborieuse et coûteuse pour être utilisée régulièrement comme test de confirmation. Par conséquent, nous avons établi un test d’immunoblot de bande de VHC (SIA) (Universitäts-Krankenhaus Eppendorf SIA) composé de quatre protéines recombinantes, dérivées du noyau et de trois régions non structurales (NS3, NS4 et NS5) du VHC, qui sont différentes de celles utilisées dans l’EIA du VHC (5).

Dans la présente étude, nous avons comparé les résultats d’une EIA du VHC de deuxième génération avec ceux de l’AIS UKE pour 2 283 échantillons de sérum. L’objectif était d’évaluer l’importance des résultats positifs dans l’EIE du VHC afin de définir des critères pour la réalisation d’autres tests permettant de diagnostiquer de manière fiable l’infection par le VHC dans la routine quotidienne de laboratoire. Les sérums ont été tirés de 2 283 personnes vivant dans le nord de l’Allemagne autour de la ville de Hambourg. Ils ont été envoyés à notre laboratoire sous suspicion d’infection par le VHC en raison soit de valeurs enzymatiques hépatiques élevées (alanine aminotransférase, > 45 U / litre), soit de signes cliniques d’hépatite (jaunisse et douleurs abdominales supérieures) ou de facteurs de risque de maladies transmises par voie parentérale, telles que l’hémodialyse chronique, la transfusion sanguine ou la consommation de drogues par voie intraveineuse. Au moment de l’enquête, ils ont été testés négatifs pour une infection aiguë par le VHA (anticorps anti-immunoglobuline M anti-VHA) et le VHB (antigène de surface de l’hépatite B). Des examens répétés ont été effectués comme suivi tous les 3 mois pendant 1 an. Pour le dépistage sérologique d’une EIA du VHC de deuxième génération (Abbott Laboratories, North Chicago, Ill.) a été réalisée. Pour confirmer les résultats de l’EIA du VHC, des sérums ont été testés en parallèle par l’AIS UKE comme décrit précédemment (5). Le test immunoblot a été considéré comme positif lorsque des anticorps dirigés contre au moins deux protéines recombinantes différentes étaient détectables. La réactivité contre une seule protéine a été évaluée comme un résultat indéterminé. Pour la détection de la transcription inverse de l’ARN du VHC, la PCR a été réalisée comme décrit précédemment (6, 7).

L’EIE du VHC était négative pour 469 échantillons, dont 456 (97 %) étaient également négatifs par l’EIA d’UKE. Pour 13 échantillons, la SIA UKE a été considérée comme indéterminée. Les 469 sérums étaient tous négatifs par PCR au VHC et aucun des patients n’a présenté de signes cliniques ou biochimiques d’hépatite au cours du suivi.

L’EIE du VHC était réactive pour 1 814 échantillons, dont 1 394 (77 %) étaient également positifs par l’EIA de l’UKE (tableau 1). Cependant, dans 240 cas (13%), la réactivité de l’EIA du VHC n’a pas pu être confirmée par l’EIA UKE. Des échantillons appropriés pour la PCR du VHC étaient disponibles pour 193 de ces 240 échantillons, et un résultat de PCR positif a été obtenu avec 13 échantillons. Parmi ceux-ci, neuf sont devenus positifs par UKE SIA lors d’un nouveau test après 3 mois, ce qui suggère que ces patients avaient contracté une infection par le VHC peu de temps avant le premier examen. Chez les quatre patients restants, qui ont testé à plusieurs reprises la PCR positive malgré un résultat négatif par UKE SIA, des conditions immunosuppressives ont pu être trouvées. L’un avait un lymphome à cellules B, l’autre était hémodialysé de manière chronique et deux pratiquaient la consommation de drogues par voie intraveineuse. Il a été montré précédemment que chez les patients présentant des conditions immunosuppressives, la réponse sérologique est faible, voire absente (10, 14, 15). Cela pourrait conduire à des résultats négatifs ou indéterminés dans les tests sérologiques bien que la personne souffre d’une infection par le VHC (13). Par conséquent, pour les patients présentant des troubles immunosuppresseurs connus, une PCR doit toujours être effectuée. Les 180 sujets initialement négatifs à la PCR sont restés négatifs par UKE SIA et PCR au VHC lors d’examens répétés au cours du suivi. De plus, ces patients n’ont pas développé de signes cliniques ou biochimiques d’hépatite. Cela indique que dans au moins ces 180 échantillons (10%), des résultats faussement positifs se sont produits. Nous devons supposer que l’EIA était également faussement positive dans les échantillons pour lesquels aucun matériel approprié pour la PCR n’était disponible, car l’EIA UKE est restée négative et aucun des patients n’a développé de signes cliniques ou biochimiques d’hépatite au cours du suivi. Cela indique que tant qu’aucun meilleur test de dépistage n’est disponible dans le commerce, chaque résultat positif de l’EIE du VHC doit être confirmé.

Un résultat indéterminé dans l’EIA UKE a été observé avec 180 des 1 814 échantillons positifs à l’EIA (10 %). Des échantillons appropriés pour la PCR du VHC ont été obtenus pour 134 de ces 180 échantillons, et l’ARN du VHC a pu être détecté dans 58 d’entre eux. Au cours du suivi, une séroconversion complète a été observée chez quatre patients. Tous ont initialement révélé des anticorps dirigés uniquement contre la protéine NS3 de l’UKE SIA. Dans les échantillons de suivi, une réactivité contre des protéines recombinantes supplémentaires est apparue. Ces résultats confirment l’hypothèse précédente selon laquelle la réactivité des anticorps contre NS3 joue un rôle important dans la détection sérologique précoce de l’infection par le VHC (5). En outre, une corrélation particulièrement élevée a été trouvée entre la virémie du VHC et la réactivité des anticorps contre l’antigène c33c du RIBA(2) disponible dans le commerce. Les échantillons ayant un résultat positif par EIA du VHC et un résultat indéterminé par dosage immunoblot doivent être soumis à une PCR, car nous avons détecté l’ARN du VHC dans 43% des échantillons (58 sur 134). Le pourcentage de résultats indéterminés par l’UKE SIA est remarquablement faible par rapport à celui de RIBA 2.0 ou 3.0 (2, 3, 11, 16). Une des raisons à cela pourrait être que des isolats locaux ont été utilisés pour établir le SIA UKE, car les tests sérologiques contenant des protéines recombinantes d’isolats locaux ont montré une sensibilité et une spécificité meilleures que les tests disponibles dans le commerce (5, 12). Cependant, il est peu probable que ce soit la seule raison, puisque l’AIS UKE a été évalué avec des échantillons de sérum contenant une variété de génotypes du VHC comme décrit précédemment (5).

Le diagnostic de VHC positif a un impact profond sur la vie de la personne atteinte. Par conséquent, il doit être atteint aussi sûrement que possible. Nos données indiquent que l’EIE largement utilisée contre le VHC produit un pourcentage élevé (10 %) de résultats faussement positifs. Comparé à d’autres tests de dépistage, par exemple les EIE du virus de l’immunodéficience humaine, ce taux est inacceptable. Par conséquent, la confirmation de chaque résultat d’EIE positif au VHC par des tests supplémentaires est obligatoire. Comme nous l’avons montré avec notre SIA UKE interne, une possibilité d’améliorer la fiabilité du diagnostic du VHC consiste à introduire dans le test de confirmation des protéines différentes de celles utilisées dans le test de dépistage.