Deslizante grampos são encontrados em todos os domínios da vida e são essenciais para a eficiência da replicação do DNA, que é necessário a cada vez que uma célula se divide, bem como para a coordenação de tráfego no DNA. A Escherichia coli (E. coli) beta-clamp é uma proteína em forma de anel constituída por dois monómeros idênticos codificados pelo gene dnaN que se associa à ADN polimerase III e facilita o elevado grau de processividade necessário para a replicação do ADN. As proteínas do grampo deslizante abrem-se e são carregadas em estruturas de ADN específicas por Carregadores clamp na presença de ATP. Temos como objetivo obter insights sobre as contribuições de diferentes domínios para a função beta usando um linked-beta-clamp que restringe o homodímero em uma de duas interfaces. Normalmente, a estrutura homo‐dimérica da pinça beta permite‐lhe atuar como um cinto de ferramentas moleculares, ligando mais de uma proteína simultaneamente em locais específicos de interação proteica no grampo. Assim, uma melhor compreensão do papel dos grampos deslizantes no processo de tolerância aos danos ao ADN será recolhida investigando se uma interface ou um local de ligação é adequado para o carregamento de ADN ou para outras interacções proteicas. Para criar esta construção, o comprimento e a sequência do linker, bem como as condições de expressão, foram otimizados. As proteínas linked‐beta foram caracterizadas através de um ensaio de desnaturação térmica, e mostraram estabilidade térmica comparável ao tipo selvagem beta. Num ensaio ATPase, foram detectadas quantidades semelhantes de fosfato inorgânico em reacções que continham beta‐ligado ou beta‐Selvagem, indicando que o carregador clamp pode interagir com ambas as versões do grampo beta. Atualmente, estamos investigando se linked e wild‐type beta melhoram a processividade de uma polimerase em um teste de extensão de primer. Estamos agora a construir e a caracterizar variantes de beta de tipo selvagem e beta ligado para testar a importância dos resíduos em apenas uma das interfaces ou locais de ligação de proteínas parceiros.
