Informação Técnica e produtos relacionados
características do produto para a Peroxidase de rábano nativo
coeficiente de Extinção: EmM = 100 quando medido a 403 nm.1
peso Molecular: (aprox. 44 kDa)
inclui a cadeia polipeptídica (33. 890 Daltons), hemina mais Ca2+ (aprox. 700 Daltons),
e hidratos de carbono (9400 Daltons).3
ponto Isoeléctrico: as isoenzimas variam entre 3.0-9.0
existem pelo menos sete isoenzimas de HRP.2
peroxidase de rábano silvestre (HRP) é isolada a partir de raízes de rábano silvestre (Amoracia rusticana) e pertence ao grupo de peroxidases de ferroprotoporfirina. HRP é um polipeptídeo de cadeia única contendo quatro pontes dissulfeto. É uma glicoproteína que contém 18% de hidratos de carbono. A composição em hidratos de carbono consiste em galactose, arabinose, xilose, fucose, manose, manosamina e galactosamina, dependendo da isoenzima específica.2
especificidade do substrato
HRP combina-se prontamente com peróxido de hidrogénio (H2O2), e o complexo resultante pode oxidar uma grande variedade de dadores de hidrogénio cromogénicos. Ele também pode utilizar substratos quimioluminescentes como luminol e isoluminol, e substratos fluorogênicos como tyramine, ácido homovanílico e ácido 4–hidroxifenil acético.
o índice do substrato do Enzyme Explorer fornece ligações a vários dadores de hidrogénio cromogénico e quimioluminescente utilizados para testar a actividade da peroxidase.
Inibidores
Os seguintes compostos são inibidores da peroxidase de rábano: azida de sódio, cianeto de L–cistina, dicromato, ethylenethiourea, hidroxilamina, sulfeto, vanadate, p–aminobenzoic acid, Cd+2, Co+2, Cu+2, Fe+3, Mn+2, Ni+2, Pb+2.4
pH Dependência
O pH ideal de HRP está na faixa de 6,0 a 6,5. A actividade a pH 7.5 é de 84% do máximo. A enzima é mais estável na gama de pH de 5, 0 a 9, 0.5
aplicações
peroxidase de rábano silvestre é amplamente utilizado como um rótulo para imunoglobulinas em muitas aplicações imunoquímicas diferentes, incluindo ELISA, imunoblotting e imuno-histoquímica. A HRP pode ser conjugada a anticorpos por vários métodos diferentes, incluindo glutaraldeído, oxidação periodata, através de ligações dissulfeto, e também através de inkers cruzados dirigidos por amino e tiol. A HRP é o rótulo mais desejado para anticorpos, uma vez que é o menor e mais estável dos três rótulos enzimáticos mais populares (HRP, fosfatase alcalina e B-galactosidase), e sua glicosilação leva a menor ligação não específica.6 protocolos que descrevem as metodologias de conjugação de glutaraldeído e periodato podem ser revistos em Harlow, E. et al.7
oferecemos vários reagentes de detecção cromogénicos e quimioluminescentes para aplicações de blotting, histologia e ELISA.
também oferecemos uma linha completa de anticorpos conjugados HRP.
Instruções de Preparação
a escolha do solvente dependerá da aplicação pretendida. As enzimas em pó são água solúvel ou tampão fosfato de 0, 1 M, pH 6 (10 mg/mL). A suspensão (P6140) pode ser diluída em água.
armazenagem/estabilidade
as peroxidases em pó devem ser refrigeradas a 2-8 °C. a armazenagem de congeladores também é aceitável, mas não é necessária. A suspensão (P6140) deve ser conservada a 2-8 °C. Se devidamente conservada, estes produtos têm um prazo de validade de, pelo menos, dois anos.
Estabilidade de Temperatura de Pó Liofilizado
Temperatura de Estabilidade de Soluções de
Estabilidade de Soluções vs. pH
Estabilidade de Soluções vs. Concentração
RZ Perfil
RZ (Reinheitszahl): a absorvância relação A403/A275. É uma medida do conteúdo de hemina da peroxidase, Não atividade enzimática. Mesmo as preparações com alto valor RZ podem ter baixa atividade enzimática. Para as proteínas conjugadas, tais como anticorpos à peroxidase, escolha uma peroxidase com um valor RZ de pelo menos 3, 0.
Spectrophotometric Method to Determine the RZ Value for Peroxidase
Peroxidase Enzymes for Labeling
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